肿瘤疫苗及其制备方法技术

给药病人的肿瘤疫苗，其特征是，它含有肿瘤细胞，该肿瘤细胞本身在ＨＬＡ范围呈现由肿瘤抗原衍生的肽，而且其中至少部分在细胞表面上表明至少有一个病人的ＭＨＣ－Ｉ单模标本，以及该细胞要加载一个或多个的ａ）型和／或ｂ）的肽，以致使该肿瘤细胞在有肽的范围内被病人的免疫系统识别为外来的，而且激发一种细胞免疫应答，其中该肽是 ａ）起ＭＨＣ－Ｉ单模标本的配位体的作用，它与病人及疫苗的肿瘤细胞是共同的，该肽不同于由病人细胞所表达的蛋白衍生的肽，或是 ｂ）起ＭＨＣ－Ｉ单模标本的配位体的作用，它与病人及疫苗的肿瘤细胞是共同的，并由病人细胞表达的肿瘤抗原衍生的，而且在疫苗的肿瘤细胞上的浓度在病人的肿瘤细胞上表达时要高于由相同的肿瘤抗原衍生的肽的浓度。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于肿瘤细胞的治疗用疫苗的开展主要是根据下列前提，在肿瘤细胞与正常细胞之间存在量或质的区别；免疫系统原则上具有识别上述区别的能力；通过用疫苗进行有效的特殊免疫作用，而可以刺激该免疫系统，并根据这种区别可以识别肿瘤细胞，由此，导致它们被推斥。为了引起一个抗肿瘤应答，至少必须满足两个条件第一，肿瘤细胞必须表达正常细胞中没有的抗原或新抗原决定基。第二，必须使免疫系统进行活化，以便对上述抗原进行反应。对肿瘤进行免疫治疗的一大难题是其低免疫原性，尤其是在人体中。就这点而言，令人惊奇的是，正如预料那样，在恶性细胞中的大量基因变化导致肽-新抗原决定基的形成，它可被细胞毒素的T-淋巴细胞的MHC-I-分子范围所识别。最近，发现了与肿瘤有关的以及肿瘤特定的抗原，它们构成新抗原决定基，而且由此应构成被免疫系统袭击的潜在目标。然而，它对免疫系统在消除表达这些新抗原决定基的肿瘤中并没有成功，这明显地，不是由于新抗原决定基缺乏。而是由于对该新抗原决定基的免疫性应答不够。为了对细胞基的癌进行免疫治疗，应该开展两个一般的策略一方面所采用的免疫治疗，它是使用肿瘤反应性的T-淋巴细胞在体外扩张，并又重新引入病人中；另一方面是有效免疫治疗，它使用肿瘤细胞，以期待对肿瘤抗原形成新的或更强的免疫应答，导致系统性的肿瘤应答。可以用各种不同方式制备基于有效免疫治疗的肿瘤疫苗，例如，辐照混有免疫刺激物助剂的肿瘤细胞，如小棒状杆菌属(Corynebacterium parvum)或菌Calmetle Guerin(BCG)以引起抗肿瘤抗原的免疫反应(Oettgen与Old，1991年)。近几年来，尤其是采用了基因改性的肿瘤细胞，以便对癌症进行有效的免疫治疗。其中，引入到肿瘤细胞中的外来基因分成三个种类其中之一是使用基因改性的肿瘤细胞，以产生胞质分裂素。肿瘤细胞和胞质分裂素信号的局部重合，认为是有一种激起抗肿瘤免疫性的刺激物。应用这种策略的综述可参阅Pardoll，1993年，Zatloukal等人，1993年，及Dranoff与Mulligan，1995年。具有为分泌细胞分裂素，如IL-2，GM-CSF或IFN-γ，或者为表达共-刺激的分子的改性的肿瘤细胞已在动物试验中表明，产生了有效的抗肿瘤免疫性(Dranoff等人，1993年；Zatloukal等人，1995年)。在具有明显肿瘤，而且已发展为对肿瘤产生耐受力的人中，要完全检测这一系列综合的交替作用，以便产生有效的抗肿瘤反应，是非常困难的。在人体上使用分泌细胞分裂素的肿瘤疫苗的实质效用，至今尚未被证实。另一类用于改性肿瘤细胞以作为肿瘤疫苗使用的编码所谓的辅助蛋白，这种方法的目的在于，使肿瘤细胞转化为有抗原的细胞(新APCs)以便能直接产生肿瘤特定的T-淋巴细胞。这类方法的实例描述于Ostrand-Rosenberg，1994年。肿瘤抗原(TAS)或由其衍生的肽的分离与识别，例如，已描述于Wolfel等人1994年a)与1994年b)；Garrel等人，1993年，Lehmann等人1989年，Tibbets等人，1993年，或国际专利申请文献Wo 92/20356，Wo 94/05304，Wo94/23031，Wo 95/00159。这些方法，对使用肿瘤抗原作为肿瘤疫苗的免疫原是必要的，该免疫原可以是以蛋白质形式，也可以肽形式存在。但是，上述的肿瘤抗原形式的肿瘤疫苗。对激起细胞的免疫应答仍是不足以致免疫性，免疫应答对清除带肿瘤抗原的肿瘤细胞是必要的，助剂的共同施用仅对加强免疫应答提供有限的可能性(Oettgen和Old，1991年)。用于提高肿瘤疫苗效用的第三种有效免疫治疗策略是，基于异基因化(外来的)自体的肿瘤细胞。这种概念是基于免疫系统和表达一个外来蛋白的肿瘤细胞反应。并在这反应过程中，也引起了一个针对这些肿瘤抗原(TAs)的免疫应答，该免疫应答是由疫苗的肿瘤细胞呈现的。Zatloukal等人，在1993年提出了这些不同方法的综述。其中，通过采用不同的基因，而使肿瘤细胞异化以便加强免疫原性。三分子复合物在调节特定的免疫应答时起了重要作用，该三分子复合物是由T-细胞-抗原受体，MHC(主要组织相容性复合物)分子与其配位体所组成的，它是一个由肽片段衍生的蛋白质。MHC-I-分子(或其对应的人体分子，即HLAs)是具有严格特性的肽受体，它可以结合上百万的不同的配位体。上述前提，可以由等位基因(Allel)特性的肽型主提供，它有下列的特性要求，根据MHC-I单模标本，该肽具有一定的长度，该长度实质上有8-10个氨基酸基团。通常两个氨基酸位置是所谓“固定式”，它仅能由一个单氨基酸或具有紧密关系的侧链的多氨基酸基团所占有。固定式氨基酸在肽中的确切位置以及特性要求随HMC-I-单模标本而变化。肽配位体的C-末端经常是一个脂族的或有加载基团。此外，这种等位基因特性的MHC-I-肽-配位体型主，迄今是众所周知的特别是，H-2Kd、Kb、Kk、Kkml、Db、HLA-A*0201、A*0205与B*2705。在细胞内部的蛋白质转化的范围内，会使有规则的、退化的与外来的基因产物，如病毒性蛋白质或肿瘤抗原分解成小的肽。其中有一些构成用于MHC-I-分子的潜在的配位体。这就为其由MHC-分子的呈现提供了前提，其结果是导致细胞的免疫应答的激发，虽然至今尚不能清楚地解释，作为MHC-I-配位体的肽在细胞中是如何制备出来的。为了加强免疫应答而使用这种用于异化肿瘤细胞的一种方法，包括用诱变的化学试剂，例如从N-甲基-N′-亚硝基胍处理肿瘤细胞。它将导致，肿瘤细胞呈现从细胞蛋白质的突变的变异体衍生的新抗原，构成外来的基因产物(Van Pel与Boon，1982年)。然而，因为该诱变的情况是随机地分布在基因组上，因此，可期待使一些细胞，由于不同的诱变情况而表现不同的新抗原。这种方法在质量方面与数量方面来看是难于控制的。用一个或多个外来的蛋白质的基因转染而异化肿瘤细胞的另一方法，例如，用一个不同单模标本的外来MHC-I-分子或MHC-蛋白质，对其进行转染，然后呈现在细胞表面上(EP-A20569678；Plautz等人，1993年；Nabel等人，1993年)。这种方法是基于上述概念，即当以整体细胞疫苗形式使用时，肿瘤细胞根据表达的蛋白质或由其衍生的肽而被识别为异种，或者当自体的MHC-I-分子进行表达时，通过提高细胞表面上的MHC-I-分子的量，而使肿瘤抗原的呈现达到最佳化。由此，用一个外来蛋白质修饰肿瘤细胞。可使该细胞在MHC范围内呈现来自外来蛋白质的肽，并在MHC-肽-复合体识别范围内。产生了从“自体的”到“外来的”的变化。当识别一个蛋白质或肽为异种时，意味着在免疫识别过程中，不仅针对外来的蛋白质，而且针对归属于肿瘤细胞的肿瘤抗原产生一种免疫应答。在上述过程中，呈现抗原的细胞(APCs)是活性的。它们处理存在于疫苗的肿瘤细胞的蛋白质(包括TAs)以形成肽，而且作为配位体用于它们自己的MHC-I与MHC-II分子。上述活性的，加载肽的APCs移位到淋巴结中，其中一些未成熟的T-淋巴细胞识别来自APCS上的TA的肽，而且可将其用作克隆扩张的刺激物，换句话说，用于产生肿瘤特定的CTLs与T-辅助细胞。本专利技术的目的在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：沃尔特·施米特，马克斯·伯恩斯蒂尔，塔马斯·施韦格霍弗，彼得·斯坦雷恩，迈克尔·布希里，
申请(专利权)人：贝林格尔·英格海姆国际有限公司，
类型：发明
国别省市：