人PTD011基因(TPAAHE09)制造技术

本发明专利技术公开了ＴＰＡＡＨＥ０９多肽和多核苷酸以及通过重组技术生产该多肽的方法。本发明专利技术还公开了在治疗和诊断试验中利用ＴＰＡＡＨＥ０９多肽和多核苷酸的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新鉴定的多肽、编码这些多肽的多核苷酸和这些多核苷酸和多肽在治疗和可能可以用于治疗的其激动剂、拮抗剂和/或抑制剂化合物的鉴定中的用途以及这些多肽和多核苷酸的生产。功能基因组学主要依赖各种生物信息学工具，由现有的多个分子生物学数据库中鉴定可能的目的基因序列。这就需要不断鉴定和表征其他基因及其相关多肽/蛋白质，作为寻找药物的靶。本专利技术的肽还包括以下分离的多肽，其氨基酸序列与序列2的整个氨基酸序列的同一性为至少70％，优选同一性为至少80％，更优选同一性为至少90％，更加优选同一性为至少95％，最优选同一性为至少97-99％。这些多肽还包括序列2的多肽。本专利技术的多肽还包括由含有序列1的多核苷酸编码的分离多肽。本专利技术的多肽引起人们的关注是因为人PTD011基因是使用EST测序克隆自人垂体肿瘤。因此，本专利技术的多肽被认为在神经内分泌和信号传导途径中起作用。这些特性以下称为“TPAAHE09活性”或“TPAAHE09多肽活性”或“TPAAHE09生物活性”。这些活性还包括所述TPAAHE09多肽的抗原和免疫原活性，特别是序列2的多肽的抗原和免疫原活性。优选，本专利技术的多肽具有至少一种TPAAHE09的生物活性。本专利技术的多肽可以是“成熟”蛋白的形式，也可以是较大蛋白如融合蛋白的一部分。通常包括附加氨基酸序列较为有利，附加氨基酸序列包括分泌或前导序列，原序列，帮助纯化的序列如聚组氨酸残基，或重组生产过程中有助于稳定的附加序列。本专利技术也包括上述多肽的变体，即参照物中保守氨基酸发生置换的多肽，保守置换是指一个残基被具有类似特性的其他氨基酸残基置换。典型的这种置换包括Ala，Val，Leu和Ile之间的置换；Ser和Thr之间的置换；酸性残基Asp和Glu之间的置换；Asn和Gln之间的置换；碱性残基Lys和Arg之间的置换；或芳香族残基Phe和Tyr之间的置换。特别优选的是其中置换、缺失或增加几个、5-10个、1-5个、1-3个、1-2个或1个氨基酸或这些方式的组合的变体。本专利技术的多肽可以通过任何合适的方式制备。这些多肽包括分离的天然存在的多肽，重组生产的多肽，合成生产的多肽，或这些方法组合生产的多肽。制备这些多肽的方法在本领域广为人知。本专利技术另一方面涉及TPAAHE09多核苷酸。这些多核苷酸包括含有以下核苷酸序列的分离多核苷酸，所述核苷酸序列编码的多肽与序列2的整个氨基酸序列的同一性为至少70％，优选同一性为至少80％，更优选同一性为至少90％，更加优选同一性为至少95％。多肽同一性为至少97％是高度优选的，多肽同一性为至少98-99％更高度优选，多肽同一性为至少99％是最优选的。这些多核苷酸包括含有编码序列2的多肽的序列1中的核苷酸序列的多核苷酸。本专利技术的多核苷酸还包括含有以下核苷酸序列的分离的多核苷酸，上述核苷酸序列与编码序列2多肽的核苷酸序列整个编码区的同一性为至少70％，优选同一性为至少80％，更优选同一性为至少90％，更加优选同一性为至少95％。同一性为至少97％的多核苷酸是高度优选的，同一性为至少98-99％的多核苷酸更高度优选，同一性为至少99％的多核苷酸是最优选的。本专利技术的多核苷酸还包括含有以下核苷酸序列的分离的多核苷酸，上述核苷酸序列与序列1的整个核苷酸序列的同一性为至少70％，优选同一性为至少80％，更优选同一性为至少90％，更加优选同一性为至少95％。同一性为至少97％的多核苷酸是高度优选的，同一性为至少98-99％的多核苷酸更高度优选，同一性为至少99％的多核苷酸是最优选的。这些多核苷酸包括含有序列1的多核苷酸的多核苷酸和序列1的多核苷酸。本专利技术也提供上述多核苷酸的互补多核苷酸。序列1的核苷酸序列为cDNA序列，含有一个多肽编码序列(核苷酸221-517)，编码序列2的99氨基酸的多肽。编码序列2多肽的核苷酸序列可以与序列1中的多肽编码序列相同，或者不同，而是由于遗传密码的丰余(简并)形成的，但也编码序列2的多肽。序列2的多肽在mirl-ste基因间区域与面包酵母推测的11.3 kD蛋白具有同源性和/或结构相似性。预期本专利技术优选的多肽和多核苷酸具有其同源多肽和多核苷酸类似的生物功能/特性。并且，本专利技术的优选多肽和多核苷酸具有至少一种TPAAHE09活性。本专利技术的多核苷酸可以通过标准克隆和筛选技术从cDNA文库中获得，该文库使用表达序列标记(EST)分析由人垂体肿瘤细胞的mRNA衍生(Adams,M.K.,et al.,Science(1991)2521651-1656；Adams,M.D.,etal.,Nature,(1992)355632-634；Adams,M.D.,et al.,Nature(1995)377Supp3-174)。本专利技术的多核苷酸也可以来自天然来源如基因组DNA文库，或可以使用众所周知的市售技术合成。当本专利技术的多核苷酸用于重组生产本专利技术的多肽时，该多核苷酸可以包括成熟多肽的编码序列本身；成熟多肽编码序列与其他编码序列框内融合的序列，其他编码序列例如前导或分泌序列、前或原或前原蛋白序列或其他融合肽部分的编码序列。例如可以编码帮助融合多肽纯化的标记序列。在本专利技术这一方面的一些优选实施方案中，标记序列是6-组氨酸肽或HA标记，前者以pQE载体提供(Qiagen，Inc.)，有关论述参见Gentz et al.,Proc Natl Acad Sci USA(1989)86821-824。多核苷酸也可以含有非编码的5′或3′序列，如转录、非翻译序列，剪切和聚腺苷酸化信号，核糖体结合位点和稳定mRNA的序列。本专利技术进一步优选的实施方案包括编码多肽变体的多核苷酸，所述变体包括序列2的氨基酸序列(序列2)，其中置换、缺失或增加几个、5-10、1-5、1-3、1-2或1个氨基酸残基或是这些方式的组合。本专利技术的多核苷酸与序列1的核苷酸序列等同或足够等同，因此可以用作cDNA和基因组DNA的杂交探针或核酸扩增(PCR)反应的引物，以分离编码本专利技术多肽的全长cDNA和基因组克隆，也可以分离与序列1具有高序列相似性的其他基因(包括编码除人以外的物种的同源物和直向同源物的基因)的cDNA和基因组克隆。一般这些核苷酸序列与参照物序列的同一性为70％、优选同一性为80％，更优选同一性为90％，最优选同一性为95％。探针或引物一般包括至少15个核苷酸，优选至少30个核苷酸，也可以包括至少50个核苷酸。特别优选的探针为30到50个核苷酸。获得编码本专利技术多肽的多核苷酸包括除人以外的物种的同源物或直向同源物的方法包括以下步骤用具有序列1或其片段的标记探针在严紧杂交条件下筛选合适的文库；分离含有所述多核苷酸序列的全长cDNA和基因组克隆。这些杂交技术是本领域技术人员熟知的。优选的严紧杂交条件包括在如下溶液中42℃温育过夜，然后在约65℃用0.1×SSC洗涤滤膜，所述溶液包括50％甲酰胺，5×SSC(150 mM NaCl，15mM柠檬酸三钠)，50 mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt溶液，10％葡聚糖硫酸酯和20μg/ml变性剪切的鲑精DNA。因此，本专利技术也包括通过用具有序列1或其片段的序列的标记探针在严紧杂交条件下筛选合适的文库获得的多核苷酸。技术人员可以认识到，在多种情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选自以下多肽的分离的多肽：（ｉ）含有与序列２的整个氨基酸序列的同一性为至少：（ａ）７０％（ｂ）８０％（ｃ）９０％；或（ａ）９５％的氨基酸序列的分离多肽；（ｉｉ）含有序列２氨基酸序列的分离多肽；或（ｉｉｉ） 其氨基酸序列为序列２的分离多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛羽丰，宋怀东，胡仁明，
申请(专利权)人：上海第二医科大学，
类型：发明
国别省市：CN[中国]