用于检测IL-2的酶联免疫试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测IL‑2的酶联免疫试剂盒及其制备方法。该试剂盒中包括IL‑2标准抗原、抗IL‑2的捕获抗体和抗IL‑2的检测抗体；捕获抗体为2H5抗体(重链的氨基酸序列为序列1，轻链的氨基酸序列为序列2)，检测抗体为经生物素标记的8G8抗体(重链的氨基酸序列为序列3，轻链的氨基酸序列为序列4)。本发明专利技术所提供的基于双抗夹心法检测IL‑2的酶联免疫试剂盒可实现对细胞培养上清或人血清中IL‑2含量的准确定量检测，该检测方法可以作为一种简便、经济、实用的免疫性疾病诊断治疗与预后判断的方法。

For the detection of IL 2 ELISA kit and a preparation method thereof.

The invention discloses a method for detecting IL 2 ELISA kit and a preparation method thereof. The antibody detection kit includes 2 standard IL antigen, anti IL 2 capture antibody and anti IL 2; capture antibody 2H5 antibody (amino acid sequence of the heavy chain sequence 1 amino acid sequences of light chain sequence, 2) antibody detection by 8G8 antibody labeled with biotin (amino acid the sequence of heavy chain sequence of 3 amino acid sequences of light chain sequence 4). Detection of IL double sandwich method based on the 2 ELISA kit for cell culture supernatants or serum IL accurate quantitative detection of 2 content, method of the detection method can be used as a simple, economical and practical for the diagnosis of autoimmune disease treatment and prognosis.

【技术实现步骤摘要】
用于检测IL-2的酶联免疫试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及生物
中，用于检测IL-2的酶联免疫试剂盒及其制备方法。
技术介绍
白细胞介素2(Interleukin-2，IL-2)是免疫系统中的一类细胞生长因子，最初从T细胞培养上清中分离获得，能调控免疫系统中白血球细胞活性，激活T细胞，并维持T细胞分化与增殖，同时还参与炎症或自身免疫反应、造血和肿瘤监视，因此临床上已将IL-2作为遏制肿瘤细胞生长的免疫治疗药物。近年来，研究发现IL-2不仅能提升免疫反应，还能维持Treg细胞的稳定及其介导的免疫耐受，具有双向调节作用。因此，IL-2作为一种人体内重要的功能复杂的淋巴因子，其含量的变动与人体免疫功能状况关系密切。资料显示，癌症病人及病毒感染患者体内IL-2含量明显降低。因此，IL-2的含量与活性的测定对癌症及某些疾病的诊断与预后判断意义十分重要。目前，IL-2的检测方法常用的主要有3H-TdR掺入法、MTT比色法和ELISA试剂盒检测法。3H-TdR掺入法主要是将3H-TdR作为DNA合成原料掺入增殖的细胞染色体中，掺入的3H-TdR的射线量与IL-2的分泌水平在一定范围内正相关。但该方法所用的试剂、设备成本高，操作复杂，试剂存在放射性污染。MTT比色法基于细胞内线粒体内琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，其显色程度可反映增殖细胞的活性。但是该方法不属于直接反映IL-2水平，精确度受限制。常规的ELISA检测方法，则标准不一，有的成本高，有的灵敏度欠缺。因此，开发一种简便、经济、实用的IL-2检测方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何检测IL-2。本专利技术首先提供了一种用于检测IL-2的系统，所述系统包括抗IL-2的捕获抗体和抗IL-2的检测抗体；所述捕获抗体为2H5抗体，所述检测抗体为经生物素标记的8G8抗体；所述2H5抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述2H5抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列2所示；所述8G8抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列3所示；所述8G8抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列4所示。上述系统中，所述2H5抗体可通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列5所示的2H5抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列6所示的2H5抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到。进一步，所述2H5抗体的重链的编码基因和所述2H5抗体的轻链的编码基因是分别通过重组表达载体1和重组表达载体2导入所述哺乳动物细胞的；所述重组表达载体1具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述2H5抗体的重链的编码基因(序列5)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-2H5-1)；所述重组表达载体2具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述2H5抗体的轻链的编码基因(序列6)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-2H5-2)。其中，所述哺乳动物细胞具体可为CHO细胞。更加具体的，所述2H5抗体是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将等摩尔的所述pSecTag2A-2H5-1和所述pSecTag2A-2H5-2转入CHO细胞后，培养24小时，用选择培养基(含有0.3mg/mLZeocin)筛选抗性克隆，将抗性克隆扩大培养，取培养上清先后进行ProteinA亲和层析和S200分子筛层析，最后用30KDa超滤离心管浓缩，获得所述2H5抗体。上述系统中，所述8G8抗体可通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列7所示的8G8抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列8所示的8G8抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到。进一步，所述8G8抗体的重链的编码基因和所述8G8抗体的轻链的编码基因是分别通过重组表达载体3和重组表达载体4导入所述哺乳动物细胞的；所述重组表达载体3具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述8G8抗体的重链的编码基因(序列7)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-8G8-1)；所述重组表达载体4具体是将pSecTag2A载体(Invitrogen公司)中的SfiI和NotI内切酶识别位点间的小片段替换为所述8G8抗体的轻链的编码基因(序列8)后得到的重组表达载体(命名为pSecTag2A-8G8-2)。其中，所述哺乳动物细胞具体可为CHO细胞。更加具体的，所述8G8抗体是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将等摩尔的所述pSecTag2A-8G8-1和所述pSecTag2A-8G8-2转入CHO细胞后，培养24小时，用选择培养基(含有0.3mg/mLZeocin)筛选抗性克隆，将抗性克隆扩大培养，取培养上清先后进行ProteinA亲和层析和S200分子筛层析，最后用30KDa超滤离心管浓缩，获得所述8G8抗体。上述系统中，所述检测抗体为将生物素标记所述8G8抗体得到的抗体。所述检测抗体具体可按照包括如下步骤的方法制备获得：将所述8G8抗体与活化的生物素按照摩尔比1：30混合，室温(25℃)放置半小时，随后过分子筛柱去除未结合的生物素，得到经生物素标记的8G8抗体即为所述检测抗体。所述系统可为酶联免疫试剂盒。除了上述物质，所述酶联免疫试剂盒中还可含有如下中的至少一种：IL-2标准抗原、96孔酶标板、铺板缓冲液、洗涤液、封闭液、辣根过氧化物酶标记亲和素、显色液和终止液。在本专利技术中，所述IL-2标准抗原可为美国R&D公司产品。所述铺板缓冲液具体可为pH为7.0的磷酸盐缓冲液。所述洗涤液具体可为仅含有0.1％体积百分含量Tween20的pH为7.0的磷酸盐缓冲液。所述pH可为7.0的磷酸盐缓冲液的溶剂为水，溶质为氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠；所述氯化钠在所述pH为7.0的磷酸盐缓冲液中的浓度为135mM，所述氯化钾在所述pH为7.0的磷酸盐缓冲液中的浓度为2.7mM，所述磷酸二氢钾在所述pH为7.0的磷酸盐缓冲液中的浓度1.5mM，所述磷酸氢二钠在所述pH为7.0的磷酸盐缓冲液中的浓度为8mM。所述封闭液具体可为仅含有20g/LBSA的所述洗涤液。所述显色液具体可为四甲基联苯胺。所述终止液具体可为1M硫酸。本专利技术还提供了下述X1)或X2)：X1)成套试剂，由所述2H5抗体和所述8G8抗体组成；X2)成套试剂，由序列表中序列5所示的2H5抗体的重链的编码基因、序列6所示的2H5抗体的轻链的编码基因、序列7所示的8G8抗体的重链的编码基因和序列8所示的8G8抗体的轻链的编码基因组成。X1)所述成套试剂可用于检测IL-2。X2)所述成套试剂可用于检测IL-2和制备X1)所述成套试剂。本专利技术还提供了下述任一产品：P1)所述2H5抗体；P2)与所述2H5抗体相关的生物材料，为A1)至A9)中的任一种：A1)编码所述2H5抗体的核酸分子；A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；A4)含有A2)所述表达盒的重组载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测IL‑2的系统，包括抗IL‑2的捕获抗体和抗IL‑2的检测抗体；所述捕获抗体为2H5抗体，所述检测抗体为经生物素标记的8G8抗体；所述2H5抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述2H5抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列2所示；所述8G8抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列3所示；所述8G8抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列4所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测IL-2的系统，包括抗IL-2的捕获抗体和抗IL-2的检测抗体；所述捕获抗体为2H5抗体，所述检测抗体为经生物素标记的8G8抗体；所述2H5抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列1所示；所述2H5抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列2所示；所述8G8抗体的重链的氨基酸序列如序列表中序列3所示；所述8G8抗体的轻链的氨基酸序列如序列表中序列4所示。2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于：所述2H5抗体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列5所示的2H5抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列6所示的2H5抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。3.根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于：所述8G8抗体是通过将等摩尔的核苷酸序列如序列表中序列7所示的8G8抗体的重链的编码基因和核苷酸序列如序列表中序列8所示的8G8抗体的轻链的编码基因在哺乳动物细胞中进行表达得到的。4.下述X1)或X2)：X1)成套试剂，由权利要求1-3中任一所述2H5抗体和所述8G8抗体组成；X2)成套试剂，由序列表中序列5所示的2H5抗体的重链的编码基因、序列6所示的2H5抗体的轻链的编码基因、序列7所示的8G8抗体的重链的编码基因和序列8所示的8G8抗体的轻链的编码基因组成。5.下述任一产品：P1)权利要求1-3中任一所述2H5抗体；P2)与权利要求1-3中任一所述2H5抗体相关的生物材料，为A1)至A9)中的任一种：A1)编码权利要求1-3中任一所述2H5抗体的核酸分子；A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；A8)含有A...

【专利技术属性】
技术研发人员：程联胜，娄阳，王凤荣，刘雯婷，
申请(专利权)人：合肥瀚科迈博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34