一种s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种s100β蛋白检测试剂盒，包括试剂R1：硼酸缓冲液、PEG‑6000、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白、HY‑500防腐剂，其溶剂为纯化水；试剂R2：硼酸缓冲液、牛血清白蛋白、S9、胶乳微球、HY‑500防腐剂、S100β蛋白抗体、PVP，其溶剂为纯化水。本发明专利技术还公开了一种s100β蛋白检测试剂盒的使用方法。本发明专利技术是优点在于：(1)具有较高的检测灵敏度和准确性，操作简单、快速；(2)稳定性好，在2‑8℃至少可以保存12个月；(3)是采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒，操作成本低、特异性强；(4)适合全自动测试，可大规模的开展和推广。

A S100 beta protein detection kit and its use method

The invention discloses a S100 protein assay kit, including R1 reagent: boric acid buffer solution, PEG 6000, sucrose, trehalose, bovine serum albumin, HY 500 preservatives, the solvent is water purification reagent; R2: boric acid buffer solution, bovine serum albumin, S9, HY, latex microspheres 500 preservatives and S100 protein antibody, PVP, the solvent is water purification. The invention also discloses a method for the use of S100 beta protein detection kit. The invention has the advantages of: (1) has high detection sensitivity and accuracy, simple operation, good stability; (2), in 2 8 degrees can be stored for at least 12 months; (3) using latex enhanced immune transmission S100 beta protein kit method, low operation cost, specific strong; (4) suitable for automatic test, and can carry out large-scale promotion.

【技术实现步骤摘要】
一种s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
s100β蛋白又叫中枢神经特异蛋白，也有学者将s100β蛋白描述为脑的“C反应蛋白”。一定生理浓度的s100β蛋白具有神经营养作用，高浓度的s100β蛋白具有神经毒性，S100β蛋白的过表达将增加大脑对缺血缺氧的易感性，导致神经元的凋亡。目前市面上用于S100β蛋白检测的产品主要是以荧光免疫分析法、酶联免疫分析法的方式进行检测，这些方法成本高、准确度低，还需要配备特定的仪器进行配合检测，操作比较繁琐。因此，目前急需一种采用其他检测方法，且能获得成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好的新的S100β蛋白检测产品，以定量检测血清中S100β蛋白的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种成本低、特异性强、灵敏度高、准确度高、稳定性好的s100β蛋白检测试剂盒及其使用方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。一种s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育1min；(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；(3)再与试剂R2混合，37℃孵育5min；(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为2:1。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长380nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(5)中，吸光度变化值为ΔA，即A1减去A2后的值。本专利技术的检测原理：在胶乳颗粒上包被S100β蛋白多克隆抗体，S100β蛋白多克隆抗体和样本中的S100β蛋白抗原发生凝集反应，形成了抗原抗体复合物并产生浊度，该浊度的高低与样本中的S100β蛋白抗原浓度成正相关，测定其吸光度值并根据校准曲线计算出S100β蛋白抗原的含量。本专利技术相比现有技术的优点在于：(1)本专利技术试剂盒具有较高的检测灵敏度和准确性，操作简单、快速，从检测到出结果最多只需要6分钟；(2)本专利技术试剂盒试剂R2中的S100β蛋白抗体结合胶乳微球得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒的制备由于采用的化学偶联法，稳定性好，在2-8℃至少可以保存12个月；(3)本专利技术为采用胶乳增强免疫透射比浊法的S100β蛋白试剂盒，操作成本低、特异性强；(4)本专利技术可用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。实施例2本实施例的一种s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。实施例3本实施例的一种s100β蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。实施例4本实施例的一种上述实施例中s100β蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)配制试剂R1：①按照上述实施例中试剂R1的组分含量，将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1分散液；②按照上述实施例中试剂R1的组分含量，将PEG-6000、蔗糖、海藻糖、HY-500防腐剂溶于R1分散液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)配制试剂R2：①按照上述实施例中试剂R2的组分含量，将牛血清白蛋白溶于硼酸缓冲液中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2一次分散液；②按照上述实施例中试剂R2的组分含量，将S9、HY-500防腐剂、胶乳微球、PVP于R2分散液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③S100β蛋白抗体的标记工艺：a.将粒径为150nm的胶乳颗粒用0.5mmol/L的PBS缓冲液清洗2遍，每次15000rpm转速下离心15min，吸去上清液；然后用0.5mmol/L的PBS缓冲液稀释胶乳颗粒到浓度为3％，每毫升体积溶液中加入S90.5mg，混匀，室温摇晃反应0.5小时，15000rpm转速下离心10min，去上清，将沉淀悬浮于50mmol/L的硼酸缓冲液中，超声分散；b.再于15000rpm转速下离心1.5min，弃上清，将沉淀悬浮于100mmol/L的硼酸缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为5.0％，超声分散，边搅拌边加入三分之一体积的S100β抗体，混合搅拌，室温反应2h；c.15000rpm转速下离心35min，弃上清，将包被好的抗体加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭30min，离心去上清，加入一倍的100mmol/L的硼酸缓冲液稀释，超声分散，4℃过夜保存，得最终所需的S100β蛋白抗体胶乳颗粒；④用R2分散液来溶解得到的S100β蛋白抗体胶乳颗粒，使其中的胶乳颗粒终浓度为1.0％，超声分散，最终制得试剂R2。实施例5本实施例的一种上述实施例中s100β蛋白检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)将12μL待测样品与400μL试剂R1混合，37℃孵育1min；(2)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A1；(3)再与200μL试剂R2混合，37℃孵育5min；(4)用全自动生化分析仪在主波长380nm、副波长405nm处测定反应后的吸光度A2；(5)根据吸光度变化值“ΔA＝A1-A2”计算出样本中的s100β蛋白的含量。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种s100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：

【技术特征摘要】
1.一种s100β蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：试剂R2：2.一种使用如权利要求1所述的s100β蛋白检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育1min；(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；(3)再与试剂R2混合，37℃孵育5min；(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；(5)根据吸光度变化值计算出样本中的s100β蛋白的含量。3.根据权利要求2所述的s100β蛋白检测试剂盒的使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴泽东，丁先骏，庄庆华，张金东，周珍珍，吴铮，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34