一种虾青素含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种虾青素含量的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：a)绘制标准曲线；b)提取；c)皂化；d)色谱法检测虾青素含量；和e)根据步骤d)的结果计算得到待测样品中虾青素的含量。根据本发明专利技术的方法以二氯甲烷和丙酮作为提取液，提高了提取液对样品中虾青素的提取效果，从而提高了虾青素含量检测的准确度。实验结果表明，采用本发明专利技术提供的方法对样品中虾青素的含量进行检测时的专属性良好，重复性、稳定性和回收率的RSD值均在2％以内。

A method for the determination of astaxanthin content

The invention discloses a method for detecting the content of astaxanthin, the detection method comprises the following steps: a) drawing standard curve b); extraction; saponification; c) d) to detect the astaxanthin content of chromatography; and E) according to the result of step d) detected in samples of astaxanthin. According to the method of the invention, dichloromethane and acetone are used as extraction liquid, which improves the extraction effect of astaxanthin in the sample and improves the accuracy of astaxanthin content detection. The experimental results show that when the method is applied to detect the content of astaxanthin in the sample, the specificity is good, repeatability, stability and RSD value of recovery is less than 2%.

【技术实现步骤摘要】
一种虾青素含量的检测方法
本专利技术属于化学分析领域，尤其涉及一种虾青素含量的检测方法。
技术介绍
虾青素属于萜烯类不饱和化合物、是一种酮式类胡萝卜素，广泛存在于虾、蟹、藻类及真菌中，研究表明虾青素在抗氧化、提高免疫力、消除炎症、预防肿瘤、抑制自由基引发的脂质过氧化方面有显著效果，在食品添加剂、保健食品、医药、水产养殖和化妆品等方面有广泛的应用，建立快速、简便、精确的虾青素分析方法有其必要性。虾青素(Astaxanthin)，化学名称为3,3’-二羟基-β,β’-胡萝卜素-4,4’-二酮[5]，分子式C40H52O4，相对分子质量为596.86，熔点为216℃，不溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、乙醚、正己烷等有机溶剂。虾青素分子中有4个异戊二烯单位的共轭双键，是典型的类胡萝卜素碳链结构，虾青素分子中碳原子共轭双键链的两端有羟基和不饱和羰基构成α-羟基酮结构，这一结构具有非常活泼的电子效应，易于清除自由基等氧化成分，天然虾青素非常不稳定，易受到光热酸碱氧化剂的影响而被氧化成虾红素，从而被降解。大量研究证实虾青素具有较强的抗氧化活性，在提高免疫力，预防肿瘤、心血管疾病、糖尿病等慢性疾病的发生发展，延缓衰老等方面具有积极的促进作用。有研究旨在探讨每日添加虾青素对身体物理性能的影响，研究结果表明，食用添加了虾青素的补充剂对于提高肌肉强度有一定效果，可以提高运动耐力。现虾青素的检测多使用紫外分光光度法。紫外分光光度法是依据美国食品药品监督管理局(FDA)官方网站备案资料“AnalysisofTotalAstaxanthininalgaemealpreparedfromHaematococcuspluvialis”的方法制定。但分光光度法会受到样品本底的影响测定结果偏高。本专利技术所申请方法，具有较好的稳定性和精密度，较低的检出限和定量限，适合于产品中虾青素的检测。由于虾青素具有上述优异的功效，目前已经广泛添加于各种产品中，做成运动营养补剂。为了更好的控制产品的质量，保证产品中虾青素的功效作用，必须对软胶囊中虾青素的含量进行准确检测。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种软胶囊中虾青素含量的检测方法，采用本专利技术提供的方法对软胶囊中虾青素的含量进行检测时的准确度高。本专利技术提供了一种软胶囊中虾青素含量的检测方法，包括以下步骤：a)、绘制标准曲线：准确称取全反式虾青素标准品用丙酮溶解并定容，然后稀释成不同浓度，用液相色谱分析仪测定得到虾青素标准曲线。b)、提取：将待测样品，加入二氯甲烷-丙酮溶液，超声混合提取，得到提取液；c)、皂化：向步骤2)得到的提取液中加入氢氧化钠-甲醇溶液，涡旋混匀，充氮密封反应，然后在反应液中加入磷酸-甲醇溶液中和剩余的碱，混匀，过滤膜，得滤液；d)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；e)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到待测样品中虾青素的含量。优选的，步骤b)中，所述二氯甲烷-丙酮溶液的二氯甲烷和丙酮的体积比为100:1500至100:200，更优选为100:800至100:300，更优选为100:400至100:500。优选的，步骤b)中，所述二氯甲烷-丙酮溶液中可以加入少量的，例如约0.5g的2,6-二叔丁基对甲酚混合后使用，所述2,6-二叔丁基对甲酚作为抗氧化剂有助于减缓虾青素被氧化。优选的，所述待测样品为含有虾青素的片剂、注射剂、气雾剂、丸剂、胶囊剂、散剂或膏剂，优选为胶囊剂，更优选为软胶囊剂。优选的，所述软胶囊待测样品中含有虾青素、葡萄籽油中的一种或多种。优选的，步骤b)中所述待测样品与二氯甲烷-丙酮溶液的用量比为300ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品至1000ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品。更优选地，步骤b)中所述待测样品与二氯甲烷-丙酮溶液的用量比为40ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品至160ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品；进一步优选地，步骤b)中所述待测样品与二氯甲烷-丙酮溶液的用量比为60ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品至160ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品；在本专利技术中，优选先将所述二氯甲烷和丙酮混合，得到二氯甲烷-丙酮溶液；再将所述软胶囊待测样品与二氯甲烷-丙酮溶液混合。优选的，步骤b)中，所述混合的时间为5～10min。优选的，步骤c)中，所述提取液与氢氧化钠-甲醇溶液体积比为5:1至5:2；所述氢氧化钠-甲醇溶液为称取0.8g氢氧化钠，用甲醇溶解并稀释至100ml，混合后使用；所述涡旋混匀的反应温度为2～6℃，反应时间为12～14h；所述磷酸-甲醇溶液为2ml磷酸和98ml甲醇混匀后使用。优选的，所述步骤d)具体为：d1)、对步骤b)中得到的滤液进行液相色谱检测，得到滤液中虾青素的峰面积；d2)、根据所述滤液中虾青素的峰面积与步骤1)中绘制的虾青素的浓度-峰面积标准曲线对比，得到所述滤液中虾青素的含量。优选的，所述步骤d)中，所述液相色谱检测的色谱柱优选为C30(250×4.6mm，0.5μm)柱；所述液相色谱检测的洗脱方式优选为梯度洗脱；所述液相色谱检测的波长优选为450～500nm，更优选为470～475nm；所述液相色谱检测的流动相的流速优选为0.5～2ml/min，更优选为0.8～1.2ml/min，最优选为1.0ml/min；所述液相色谱检测的柱温优选为20～30℃，更优选为25℃；所述液相谱检测的进样量优选为10～30μL，更优选为20μL。液相色谱检测结束后，得到上清液中虾青素的峰面积。有益效果本专利技术以二氯甲烷和丙酮作为提取液，提高了提取液对样品中虾青素的提取效果，从而提高了虾青素含量检测的准确度。实验结果表明，采用本专利技术提供的方法对样品中虾青素的含量进行检测时的专属性良好，重复性、稳定性和回收率的RSD值均在2％以内。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1提供的虾青素对照品色谱图；图2是本专利技术实施例5加标样品的代表性色谱图。具体实施方式在下文中，将参照附图详细地描述本公开的优选的实施方式。在描述之前，应当了解在说明书和所附权利要求中使用的术语，并不应解释为局限于一般及辞典意义，而是应当基于允许专利技术人为最好的解释而适当定义术语的原则，基于对应于本专利技术技术层面的意义及概念进行解释。因此，在此的描述仅为说明目的的优选实例，而并非是意指限制本专利技术的范围，因而应当了解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以做出其他等同实施和修改。此外，除非另有说明，以下公开的试剂和溶剂均为市售产品。使用仪器有高效液相色谱仪(配紫外检测器)，分析天平，超声波清洗机，涡旋混匀器，氮吹仪，棕色容量瓶。使用试剂均为色谱纯，购自国药集团，有丙酮，磷酸，氢氧化钠，甲醇，二氯甲醇，叔丁基甲基醚，2,6-二叔丁基对甲酚(分析纯)。优选的，在步骤c)中，所述提取液与氢氧化钠-甲醇溶液体积比为5ml:1～5ml，更优选为5ml:1～2ml。在本专利技术中，优选先将碱和甲醇混合配制成碱液，再将所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种软胶囊中虾青素含量的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：a)、绘制标准曲线：准确称取全反式虾青素标准品用丙酮溶解并定容，然后稀释成不同浓度，用液相色谱分析仪测定得到虾青素标准曲线；b)、提取：将待测样品，加入二氯甲烷‑丙酮溶液，超声混合提取，得到提取液；c)、皂化：向步骤2)得到的提取液中加入氢氧化钠‑甲醇溶液，涡旋混匀，充氮密封反应，然后在反应液中加入磷酸‑甲醇溶液中和剩余的碱，混匀，过滤膜，得滤液；d)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；e)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到待测样品中虾青素的含量。

【技术特征摘要】
1.一种软胶囊中虾青素含量的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：a)、绘制标准曲线：准确称取全反式虾青素标准品用丙酮溶解并定容，然后稀释成不同浓度，用液相色谱分析仪测定得到虾青素标准曲线；b)、提取：将待测样品，加入二氯甲烷-丙酮溶液，超声混合提取，得到提取液；c)、皂化：向步骤2)得到的提取液中加入氢氧化钠-甲醇溶液，涡旋混匀，充氮密封反应，然后在反应液中加入磷酸-甲醇溶液中和剩余的碱，混匀，过滤膜，得滤液；d)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；e)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到待测样品中虾青素的含量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤b)中，所述二氯甲烷-丙酮溶液的二氯甲烷和丙酮的体积比为100:1500至100:200，更优选为100:800至100:300，更优选为100:400至100:500。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤b)中，所述二氯甲烷-丙酮溶液中可以加入少量的，例如约0.5g的2,6-二叔丁基对甲酚混合后使用，所述2,6-二叔丁基对甲酚作为抗氧化剂有助于减缓虾青素被氧化。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品为含有虾青素的片剂、注射剂、气雾剂、丸剂、胶囊剂、散剂或膏剂，优选为胶囊剂，更优选为软胶囊剂。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述软胶囊待测样品中含有虾青素、葡萄籽油中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤b)中所述待测样品与二氯甲烷-丙酮溶液的用量比为300ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样品至1000ml二氯甲烷-丙酮溶液/每g待测样...

【专利技术属性】
技术研发人员：李奇庚，魏冰，曹珍艳，
申请(专利权)人：北京康比特体育科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11