测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留的方法技术

本发明专利技术涉及测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留的方法。该方法采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行测定，包括以下步骤：提供超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪以及牛肺表面活性提取物和对照品，确定色谱条件和质谱条件，进行配液和测试，以及结果处理。该方法可同时测定四环素、金霉素、土霉素、多西环素、美他环素、米诺环素、β‑多西环素、差向四环素、差向金霉素、脱水四环素和脱水差向四环素等11种抗生素及已知杂质。该方法的线性范围、灵敏度、精密度、回收率均满足分析要求。

Determination of tetracyclines residues in bovine pulmonary surfactant extract

The present invention relates to a method for the determination of tetracycline antibiotics residues in bovine pulmonary surfactant extract. The method of using tandem mass spectrometry ultra performance liquid chromatography, which comprises the following steps: providing ultra high performance liquid chromatography and three triple quadrupole mass spectrometer and the pulmonary surface active extract and control products, determine the conditions of chromatography and mass spectrometry conditions, with liquid and test, and the result processing. The method of simultaneous determination of tetracycline, chlortetracycline, oxytetracycline, doxycycline, Metacycline, minocycline, doxycycline, beta epitetracycline, ECTC, tetracycline and dehydrated epitetracycline and other 11 kinds of antibiotics and known impurities. The linear range, sensitivity, precision and recovery of the method meet the requirements of the analysis.

【技术实现步骤摘要】
测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留的方法
本专利技术属于医药
，涉及牛肺表面活性提取物中残留抗生素的测定方法，特别是涉及使用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素的残留，这些四环素类抗生素例如有四环素、金霉素、土霉素、多西环素、美他环素、米诺环素、β-多西环素、差向四环素、差向金霉素、脱水四环素和脱水差向四环素等11种之多。
技术介绍
牛肺表面活性提取物是从健康新生小牛肺中分离提取的肺表面活性物质，主要成分包括甘油三酯、磷脂、游离脂肪酸、胆固醇和少量活性蛋白[SHUL.Studyoncompositionanalysisandqualitycontrolofmedicinalcalfpulmonarysurfactant[D].Beijing:Univ.ofChineseAcademyofSciences,2016]，其中磷脂、胆固醇等均是经典的表面活性物质或者人们常将它们作为表面活性剂即乳化剂使用，例如胆固醇(又称为胆甾醇)由于具有表面活性作用通常在药剂中作为水包油乳剂的乳化剂。1959年，Avery和Mead首次证实了，肺表面活性物质的缺乏是导致新生儿呼吸窘迫综合症的主要原因[AVERYME,MEADJ.Surfacepropertiesinrelationtoatelectasisandhyalinemembranedisease[J].AMAJDisChild,1959,97(5):517-523]。新生儿呼吸窘迫综合症，是指新生儿出生不久后出现的进行性呼吸困难、呻吟、发绀、吸气三凹征，严重者发生呼吸衰竭等症状，致死率较高[YUJL.Preventionandtreatmentofneonatalrespiratorydistresssyndrome[J].ChinJPractPediatr(中国实用儿科杂志),2003,18(11):643-646；XUZZ.Neonatalrespiratorydistresssyndrome[J].JiangsuMedJ(江苏医药),1982,5:26-28]。该病多见于早产儿，尤其是32周前早产儿，由于肺泡尚未发育成熟，表面活性物质缺乏，从而导致该病[CHENA,SHILP,ZHENGJY,etal.Clinicalcharacteristicsandoutcomesofrespiratorydistresssyndromeintermandlate-pretermneonates[J].ChinJPediatr(中华儿科杂志),2008,46(9):654-657]。目前，临床上已证实，采用肺表面活性物质替代疗法，可以显著提高患儿治愈率[SWEETDG,CARNIELLIV,GREISENG,etal.GuidelinesforthepreventionandtreatmentofneonatalrespiratorydistresssyndromeinEurope[J].ChinJPediatr(中华儿科杂志),2011,49(1):27-33；DONGSH.Applicationofpulmonarysurfactantinneonatalrespiratorydistresssyndrome[J].ChinJPractPediatr(中国实用儿科杂志),1988,3(1):11-12；LIJ,FANXM,SONGGW,etal.Amulticenterclinicaltrialofthesurfactantreplacementtherapyforneonatalrespiratorydistresssyndrome[J].ChinJPediatr(中华儿科杂志),2000,38(6):344-347；ZHANGM,ZHOUX.Neonatalrespiratorydistresssyndrometreatmentdrug-Curosurf[J].WorldPharmacy(国外医药-合成药生化药制剂分册),2001,22(2):110；XINY,ZHENGRX.Clinicalanalysisof27casesofneonatalrespiratorydistresssyndromecomplicatedwithpneumothorax[J].JCapitUnivMedSci(首都医科大学学报),2016,37(2):148-152]。患儿发病时，将牛肺表面活性提取物的注射制剂于气管内给药，可产生使肺泡扩张和稳定的作用，改善肺的顺应性和气体交换，从而达到治疗新生儿呼吸窘迫综合症的效果[CORBETAJ,LONGWA,MURPHYDJ,etal.Reducedmortalityinsmallprematureinfantstreatedatbirthwithasingledoseofsyntheticsurfactant[J].JPaediatrChildHealth,1991,27:245-249；ZHANGWT,FUDC,WANGY.Clinicaltreatmentandanalysisof308casesofneonatalrespiratorydistresssyndrome[J].ChinJPharmEconom(中国药物经济学),2013,4:321-322]。由于牛肺表面活性提取物，是从新生小牛肺中分离提取得到的，因此，其中是否存在抗生素残留，残留抗生素是否会影响临床治疗效果，仍需进一步研究。目前我国抗生素滥用情况较为严重，四环素类抗生素由于抗菌谱广，被普遍应用于畜牧业[LIUXC,DONGYH,WANGH.InvestigationontheresiduesoftetracyclineantibioticsinintensiveexcavityoflivestockandpoultryinJiangsuprovince[J].JArgo-EnvironSci(农业环境科学学报),2008,27(3):1177-1182；WULQ,QIANMR,LULZ,etal.AntibioticresiduesinwastewatersfrommainlivestockfarmsinZhejiangprovince[J].ActaAgricZhejiangensis(浙江农业学报),2012,24(4):699-705；ZHANGLH,WANGJJ,HAXJ,etal.DistributioncharacteristicsofantibioticresistancegenesinvegetablesoilsinBeijing[J].ChinJEnvironSci(环境科学),2016,37(11):4395-4401]。因此，应建立牛肺表面活性提取物中的四环素类抗生素残留的检测方法是极其有必要的，这涉及到患有呼吸窘迫综合症这种危急病症的新生儿特别是早产新生儿用药的安全性和有效性问题。目前，药典中标准规定使用微生物管碟法进行四环素类抗生素的残留测定[Ch.P(2015)VolIV(中国药典2015年版.四部)[S].2015:252]。该方法仅用于四环素残留量的测本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留量的方法，该方法采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行测定，包括以下步骤：(1)提供超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪；提供牛肺表面活性提取物；提供选自下列的对照品：四环素对照品、土霉素对照品、金霉素对照品、多西环素对照品、美他环素对照品、米诺环素对照品、4‑差向四环素对照品、4‑差向金霉素对照品、β‑多西环素对照品、脱水四环素对照品、脱水差向四环素对照品；(2)色谱条件：色谱柱：Waters

【技术特征摘要】
1.测定牛肺表面活性提取物中四环素类抗生素残留量的方法，该方法采用超高效液相色谱-串联质谱法进行测定，包括以下步骤：(1)提供超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪；提供牛肺表面活性提取物；提供选自下列的对照品：四环素对照品、土霉素对照品、金霉素对照品、多西环素对照品、美他环素对照品、米诺环素对照品、4-差向四环素对照品、4-差向金霉素对照品、β-多西环素对照品、脱水四环素对照品、脱水差向四环素对照品；(2)色谱条件：色谱柱：WatersHSST3，柱规格2.1×100mm，填料粒径1.8μm，流动相A：0.1％甲酸的乙腈溶液，流动相B：0.1％甲酸的水溶液，流速：0.3ml/min，柱温：30℃，进样量：1μL，使用下列所示梯度洗脱程序进行洗脱：(3)质谱条件采用三重四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源，毛细管电压为4.5kV，气化室温度为100℃，鞘气压力为40arb；离子吹扫气压力为40arb，辅助气压力为10arb，毛细管温度为350℃；采用选择反应监测模式，监测条件如下表：(4)配液和测试：(41)精密称取四环素对照品、土霉素对照品、金霉素对照品、多西环素对照品、美他环素对照品、米诺环素对照品、差向四环素对照品、差向金霉素对照品、β-多西环素对照品、脱水四环素对照品以及脱水差向四环素对照品各10mg，精密称定，分别置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各对照品储备液(其浓度为1mg/ml)；(42)分别精密量取各对照品储备液1ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中约含各组分1μg的溶液，作为分离度试验溶液；取该分离度试验溶液，按“(2)色谱条件”和“(3)质谱条件”项下的色谱和质谱条件进行分离度试验；(43)精密量取上述分离度试验溶液，用甲醇定量稀释成每1ml中含各对照品200ng、100ng、50ng、20ng、10ng、5ng、2ng、1ng和0.5ng的混合溶液，按“(2)色谱条件”和“(3)质谱条件”项下的色谱和质谱条件进行线性范围试验和精密度试验；(44)精密量取每1ml含各对照品100ng的对照品混合溶液0.5ml，置50ml离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珉，侯金凤，王成刚，齐麟，寇晋萍，刘海涛，王光裕，李文东，车宝泉，王俊秋，
申请(专利权)人：北京市药品检验所，
类型：发明
国别省市：北京,11