编码L.INFANTUM的四种蛋白质的抗原决定簇的嵌合基因制造技术

本发明专利技术涉及用于预防和治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，所述药物组合物含有嵌合蛋白Ｑ，其是编码Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ　ｉｎｆａｎｔｕｍ的四种蛋白质的抗原决定簇的嵌合基因的产物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般地用于药物制品的工业生产。
技术介绍
利什曼病是一类在世界范围内广泛存在的疾病，其特征为可以引发多种临床症状。它是由利什曼属的寄生型原生动物引起的。在自然界中，利什曼病主要是作为一种动物传染病，研究表明，人类是第二宿主。L.Infantum，利什曼属中的一种，主要分布在地中海地区，会导致人类和犬类患内脏型利什曼病(Visceral LeishmaniosisLV)。实际上，被L.Infantum感染的犬类是这种寄生虫在动物中最主要的宿主，由于这类疾病具有较长的潜伏期，尤其是那些还没有产生可观察的临床症状的犬类更是潜在的传播源。流行病学数据显示，犬科动物利什曼病的流行与这类寄生虫向人类的传播之间存在直接的联系。所以，为了防止这类疾病的蔓延，关键在于能否在感染或疾病发生的早期进行有效的诊断。这种寄生虫在脊椎动物宿主身上的传播方式是通过白蛉亚科(Phlebotominae)的蝇类的叮咬实现的。通过这种方式，寄生虫进入单核吞噬细胞，在吞噬溶酶体结构中分化并产生鞭毛虫。被感染的细胞会在特定的组织中聚集，例如脾、肝和淋巴结中。据估算，世界上大约有15,000,000人被感染患有利什曼病，并且以每年500,000人的速度递增，主要发生于不发达国家和发展中国家。近来的流行病学数据表明，在欧洲西南部的国家，上文提及的由L.Infantum引发的内脏型利什曼病(Visceral LeishmaniosisVL)已经日趋严重。在意大利有些地区VL的发病率界于14.4％于37％之间。在葡萄牙，尤其是里斯本附近区域，血清阳性率已达8.4％；在法国阿尔卑斯山附近的沿海地区，发病率从3.2％至17.1％不等。在西班牙的加泰罗尼亚地区，平均感染率为9.3％，在某些地区，感染率甚至达到18％。在马略卡岛，发病率为14％；木尔西亚为2.4％；格拉纳达为8.8％；萨拉曼卡为10％-15％；马德里省为5.25％；卡赛雷斯为14％。虽然在人类中由L.Infantum引发的VL的病例相对较少，但是在犬科动物利什曼病高发地区，大量的感染利什曼病的人出现了免疫力消退的症状。事实上，在欧洲南部，50％的利什曼病患者同时也是HIV病毒的携带者。另一方面，根据利什曼病-HIV共感染的数据，由于存在大量的尚不足以被检测的感染症状，估计被寄生虫感染的水平比现有的数据高一至两个数量级。不同类型的利什曼感染的共同特征是它们都会引起宿主很强的体液应答反应。因此，基于血清学技术的检测方法是目前使用最广的检测方法。无论是自然感染还是人为感染的情况，疾病的临床症状还未出现之前，抗体就可以被检测到。这些检测的方法的灵敏度和特异性和使用的抗原的种类、来源和纯度相关。现在的商业化的免疫学方法，使用的是完整的鞭毛属生物或来源于鞭毛属生物的抗原。这种方法通常会和来源于麻疯病、肺结核、非洲tripanosomiasis、南美锥虫病(查格斯氏病)、疟疾和其它寄生虫病患者的血清发生交叉反应。血清学方法检测的灵敏度和特异性和使用的抗原的种类、来源和纯度相关。在刚刚过去的几年中，许多利什曼病相关的抗原被确定和研究。其中有些还是特异针对这类寄生虫的蛋白。在这些特异针对这类寄生虫的蛋白中，表面蛋白酶GP63、表面糖蛋白gp46和KMP-11蛋白值得一提。另外一组利什曼病相关抗原由保守的蛋白质组成，，例如热激蛋白、微管蛋白和肌动蛋白等等。为了研究犬科动物利什曼病的特异的血清学诊断系统的一部分，需要确定L.Infantum的抗原。采用的方法是，从患有犬科动物内脏利什曼病的狗血清中通过免疫检测的方法确定L.Infantum的基因表达库。通过比较发现，用这种方法分离出的抗原都属于进化过程中的保守的蛋白家族。通过队这些抗原的表位B的研究发现，在所有的情况中，这些抗原决定簇都位于非极端保守的区域。特别值得一提的是，在80％的VL患者血清样本中都发现有酸性核糖体蛋白LiP2a和LiP2b。酸性核糖体蛋白LiP2a和LiP2b中应该包含利什曼病的特异的抗原决定簇。去除天然蛋白中的某些片段，可以得到重组的酸性核糖体蛋白LiP2a和LiP2b，它们可用于区别利什曼病和南美锥虫病(查格斯氏病)。同时研究还表明L.Infantum的PO核糖体蛋白，一种在进化过程中高度保守的蛋白，在许多患有VL的狗的血清样本中都有发现。但是，它的抗原决定簇主要位于C端，即位于进化过程中该蛋白不保守的区域。在78％的患有VL的狗的血清之中，都存在有抗H2A蛋白的抗体。并且抗体是由利什曼蛋白H2A上特异的抗原决定簇引发的，而不是由真核生物的H2A蛋白的共有序列引发的。在患有VL的狗的血清中发现的抗原决定簇位于H2A蛋白的两端。这样，一种明显的解决方案就是构建一个嵌合基因，它包含有编码蛋白LiP2a、LiP2b、LiPO和H2A的抗原决定簇的DNA序列，从而可以产生富含上述抗原决定簇的蛋白。构建嵌合基因，它包含有编码所需的抗原决定簇的DNA序列，从而可以产生富含抗原决定簇的蛋白的这一目标，至少到现在为止，还没有实现。专利技术描述首先，本专利技术涉及一种嵌合基因，它由编码L.infantum的四种蛋白质的抗原决定簇的DNA序列组成，可以用于预防或治疗犬科动物利什曼病。本专利技术涉及一种由上述嵌合基因编码的蛋白质。该蛋白包含一个或多个由上述嵌合基因编码的L.infantum的四种蛋白的抗原决定簇。本专利技术还涉及一种预防或治疗人类和动物患犬科动物利什曼病的方法，在这一治疗方法中可以使用本专利技术的嵌合基因或由该基因编码的蛋白。也可以使用抗本专利技术的嵌合基因编码的蛋白或其抗原决定簇部分例如表位的抗体。另一方面，本专利技术涉及可以用于预防和/或治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，其中的活性成分来源于或针对本专利技术的嵌合基因和/或其编码的蛋白。这种活性物质优选可以用于治疗和/或预防利什曼病的药物组合物。特别地，这种药物组合物可以制成疫苗的形式，其包含本专利技术所述的嵌合基因编码的蛋白或蛋白的一个或多个部分，所述部分包含一个或多个本专利技术所述的嵌合基因编码的蛋白的抗原决定簇。因此，在另一方面，本专利技术涉及一种用于预防和治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，它a)由给予个体(人类或动物)的嵌合蛋白Q，或该嵌合蛋白Q的含有保守氨基酸修饰或取代的变体组成；或b)由分离形式的蛋白Q，或与腹膜内、皮下或肌肉内途径给药的任何生理学佐剂联合的蛋白Q组成。本专利技术还涉及一种能刺激产生可以识别利什曼寄生虫的抗体的疫苗，它a)由给予个体(人类或动物)的嵌合蛋白Q，或该嵌合蛋白Q的变体组成，所述变体与蛋白Q在保守氨基酸上不同；或b)由分离形式的蛋白Q，或与腹膜内、皮下或肌肉内途径给药的生理学佐剂联合的蛋白Q组成。另外，本专利技术涉及一种用于预防和治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，它a)由给予个体(人类或动物)的与完整或片段化的蛋白质LiHsp70联合的嵌合蛋白Q，或该嵌合蛋白Q的含有保守氨基酸修饰或取代的变体组成；或b)由分离形式的蛋白Q，或与腹膜内、皮下或肌肉内途径给药的生理学佐剂联合的蛋白Q组成。在另一方面，本专利技术涉及一种用于预防和治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，它a)由给予个体(人类或动物)的携带编码嵌合蛋白Q的序列，或该序列的含有编码保守氨基酸的核苷酸的修饰或取代的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防或治疗人类或动物的利什曼病的药物组合物，它： ａ）由给予个体（人类或动物）的嵌合蛋白Ｑ，或该嵌合蛋白Ｑ的含有保守氨基酸修饰或取代的变体组成；或 ｂ）由分离形式的蛋白Ｑ，或与腹膜内、皮下或肌肉内途径给药的任何生理学佐剂联合的蛋白Ｑ组成。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：卡洛斯贝达特阿隆索，
申请(专利权)人：CBF莱蒂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]