一种多肽－人NADH脱氢酶亚结构蛋白I－9.25和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－－人ＮＡＤＨ脱氢酶亚结构蛋白Ｉ－９．２５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＮＡＤＨ脱氢酶亚结构蛋白Ｉ－９．２５的多核苷酸的用途。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
呼吸链NADH脱氢酶(也称之为复合物I或NADH-辅酶Q氧化还原酶)是一种多聚酶复合物，存在于线粒体内膜、叶绿体及蓝细菌中。在蓝细菌中，其又被作为一种NADH-质体醌氧化还原酶。该酶复合物由25-30个多聚肽链亚单位组成，其中有15个亚单位存在于膜上，而这15个亚单位中的7个在许多不同的物种中均由线粒体和叶绿体基因组编码。由这些细胞器编码的保守的亚单位被称之为亚单位I(由线粒体中的ND1基因及叶绿体中的NDH1基因编码)，其中含有辅酶Q结合位点。呼吸链NADH脱氢酶酶复合物的ND1亚单位与大肠杆菌甲酸脱氢酶的亚单位4及脱氢酶4的亚单位C有着高度的相似性。Paracoccus反硝化NQ08蛋白及大肠杆菌nuoHNADH辅酶Q氧化还原酶亚单位亦为NADH脱氢酶亚单位I家族的成员。该蛋白家族的成员在生物体内均参与各种呼吸链的反应，作为电子传递的中间物，负责将电子传递给氧，生成氧离子，与2H+结合成H2O。众所周知，呼吸链是生物体内电子传递及能量转换的重要方式，而呼吸链反应过程中涉及各种不同酶的作用。这些不同的酶在呼吸链过程中协调作用以促进呼吸代谢过程的完成。其中的任意一种物质突变或表达异常都将导致呼吸链的作用异常。因而，NADH脱氢酶复合物作为呼吸链的重要组成部分亦在此过程中起着重要的调节作用，其表达异常将导致生物体内呼吸链能量代谢的紊乱，从而引发各种相关的代谢紊乱症。研究发现，NADH脱氢酶亚单位I蛋白家族的成员中存在如下所示的两个保守的序列片段序列片段1G---Q-X--X-D---K---X--； 序列片段2P-F-D---E--E-X---X(2)-G；除西瓜及利什曼原虫属的ND1亚单位不含有序列片段1及莱因哈德衣藻不含有序列片段2外，其余该酶亚单位家的成员均同时含有以上所述的两个保守的序列片段。该两个序列片段可能是酶复合物亚单位I的活性作用中心，其突变将导致亚单位的表达异常，不能与辅酶Q正常的结合，从而影响其在呼吸链中的作用。该蛋白家族的成员的表达异常通常与生物体内各种与呼吸链相关的发育代谢紊乱症、物质代谢紊乱症等疾病的发生相关。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与NADH脱氢酶亚单位I的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25。由于如上所述NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25的抗体。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本专利技术提供了一种多肽——人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25，其基本上是由<210>2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的人NADH脱氢酶亚结构蛋白I-9.25相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(I)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(II)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(III)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合；或者(IV)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括<210>1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与<210>1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”在本专利技术中是指编码具有<210>2的蛋白质或多肽，但与<210>1所示的编码区序列有差别的核酸序列。编码<210>2的成熟多肽的多核苷酸包括只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＮＡＤＨ脱氢酶亚结构蛋白Ｉ－９．２５，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]