一种新的多肽--人NADH脱氢酶亚单位I-14.08和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ＮＡＤＨ脱氢酶亚单位Ⅰ－１４．０８，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ＮＡＤＨ脱氢酶亚单位Ⅰ－１４．０８的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人NADH脱氢酶亚单位I-14.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。呼吸链NADH脱氢酶(也称之为复合物I或NADH-辅酶Q氧化还原酶)是一种多聚酶复合物，存在于线粒体内膜、叶绿体及蓝细菌中。在蓝细菌中，其又被作为一种NADH-质体醌氧化还原酶。该酶复合物由25-30个多聚肽链亚单位组成，其中有15个亚单位存在于膜上，而这15个亚单位中的7个在许多不同的物种中均由线粒体和叶绿体基因组编码。由这些细胞器编码的保守的亚单位被称之为亚单位I(由线粒体中的ND1基因及叶绿体中的NDH1基因编码)，其中含有辅酶Q结合位点。呼吸链NADH脱氢酶酶复合物的ND1亚单位与大肠杆菌甲酸脱氢酶的亚单位4及脱氢酶4的亚单位C有着高度的相似性。Paracoccus反硝化NQ08蛋白及大肠杆菌nuoH NADH辅酶Q氧化还原酶亚单位亦为NADH脱氢酶亚单位I家族的成员。该蛋白家族的成员在生物体内均参与各种呼吸链的反应，作为电子传递的中间物，负责将电子传递给氧，生成氧离子，与2H+结合成H2O。众所周知，呼吸链是生物体内电子传递及能量转换的重要方式，而呼吸链反应过程中涉及各种不同酶的作用。这些不同的酶在呼吸链过程中协调作用以促进呼吸代谢过程的完成。其中的任意一种物质突变或表达异常都将导致呼吸链的作用异常。因而，NADH脱氢酶复合物作为呼吸链的重要组成部分亦在此过程中起着重要的调节作用，其表达异常将导致生物体内呼吸链能量代谢的紊乱，从而引发各种相关的代谢紊乱症。除西瓜及利什曼原虫属的ND1亚单位不含有序列片段1及莱因哈德衣藻不含有序列片段2外，其余该酶亚单位家的成员均同时含有以上所述的两个保守的序列片段。该两个序列片段可能是酶复合物亚单位I的活性作用中心，其突变将导致亚单位的表达异常，不能与辅酶Q正常的结合，从而影响其在呼吸链中的作用。该蛋白家族的成员的表达异常通常与生物体内各种与呼吸链相关的发育代谢紊乱症、物质代谢紊乱症等疾病的发生相关。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与人NADH脱氢酶亚单位I的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人NADH脱氢酶亚单位I-14.08。由于如上所述人NADH脱氢酶亚单位I-14.08蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人NADH脱氢酶亚单位I-14.08蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人NADH脱氢酶亚单位I-14.08蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人NADH脱氢酶亚单位I-14.08以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚单位I-14.08的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人NADH脱氢酶亚单位I-14.08的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人NADH脱氢酶亚单位I-14.08的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人NADH脱氢酶亚单位I-14.08的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人NADH脱氢酶亚单位I-14.08的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人NADH脱氢酶亚单位I-14.08异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中386-772位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1933位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人NADH脱氢酶亚单位I-14.08蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人NADH脱氢酶亚单位I-14.08蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人NADH脱氢酶亚单位I-14.08表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人NADH脱氢酶亚单位I-14.08结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＮＡＤＨ脱氢酶亚单位Ⅰ－１４．０８，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]