用于将系统性免疫应答靶向于特定器官或组织的方法和组合物技术方案

本发明专利技术提供了用于靶定针对特定器官或组织分别产生的免疫应答的方法和组合物；例如，对于受癌症影响的人来说，使用一种或多种具有对可能特异性地定位于所述需要的器官或组织的具有器官或组织亲嗜性的试剂。例如，本发明专利技术提供了用于使用粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）增强的肿瘤细胞免疫和单核细胞增生利斯特氏菌（ＬＭ）感染的组合，治疗来自结直肠癌的肝脏转移瘤的方法和组合物。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
1.专利技术背景在当今世界上，癌症一直是最具毁灭性的健康问题之一。在美国，每5个人中大约有1个人受到癌症的影响。研究业已导致了很多不同类型治疗方法的发现，包括通常被用于化疗的细胞毒性剂，如抗代谢剂，它能干扰微管形成，烷化剂，基于铂的试剂，蒽环类，抗生素试剂，和拓扑异构酶抑试剂等。另外，业已对更传统的手术和放射疗法进行了改进，同时，切割边缘治疗涉及业已开发的免疫调节和基因治疗。不过，尽管业已评估了数千种潜在的抗癌试剂，人类癌症治疗仍然在与并发症和副作用做斗争，这些副作用通常会提供一系列不是最佳的治疗选择。一种治疗癌症的引起注意的新型非化学方法是基于这样的发现迅速形成的肿瘤，具有不规则的血管组构，导致了在时间上和空间上不均匀的血液流动，并且产生了缺氧的部位。肿瘤血流的这种不均匀性，妨碍了血液携带的化疗试剂向癌细胞的送递，并且这种状态降低了放疗和化疗试剂的效果，并且倾向于选择更具侵袭性和更容易转移的癌细胞(参见Brown和Giaccia(1998)Cancer Res 581408-1416)。具有讽刺意味的是，所述相同的缺氧的状态导致了非致病性，厌氧细菌的有利的定居，所述细菌定居，并且能够导致从转移的肿瘤内部开始的裂解(例如，参见，Carey等(1967)Eur.J.Cancer 337-46，披露了用梭菌治疗肿瘤)。所述早期努力并不十分成功。最近，Dang等((2001)PNAS USA 98151 55-160；并且由Jain和Forbes进行了评述(2001)PNAS USA 9816748-750)筛选了细菌的大约26种菌株均匀感染并且分布在肿瘤的血管化较差部位的能力。诺氏梭菌的一种菌株是特别有效的，并且进行了遗传学修饰，以便消除它所编码的致命的毒素。所得到的受感染的肿瘤会出现细菌诱导的坏死，不过，不能完全消除外周存活的和血管化的肿瘤细胞——这些细胞必须用常规化疗试剂治疗(化疗/细菌裂解疗法的组合被称为“COBALT”)。在相关的方法中，Lemmon等((1997)Gene Ther 4791-96)业已披露了作为基因送递系统的厌氧细菌的工程产生，它是由肿瘤微环境控制的，以及Theys等((2001)Cancer Gene Ther 8294-97)业已披露了通过用工程产生的丙酮丁醇梭菌，使胞嘧啶脱氨酶特异性靶定实体瘤。尽管所述细菌裂解疗法和大量抗肿瘤试剂的发展可用于癌症的临床治疗，仍然存在对用于治疗癌症的更有效的方法的需要。因此，存在对改进的癌治疗方法，特别是影响特殊器官或组织的恶性实体瘤以及它们所产生的转移瘤的治疗的需要。用于癌症和肿瘤化疗的开发中的替代方法一直是使用肿瘤疫苗，所述疫苗是以与佐剂混合的弱免疫原性特异性肿瘤抗原为基础的，以便诱导，恢复或增强针对残余的或转移的肿瘤细胞的抗肿瘤免疫原性。肿瘤疫苗介导的治疗方法，涉及在靶定的肿瘤细胞中激活细胞毒性(有关综述，参见Nawrocki和Mackiewicz(1999)Cancer Treat Rev 2529-46)。业已表征了由细胞毒性T-细胞识别的若干种HLA-限制性特异性肿瘤抗原。第一代肿瘤疫苗，包括用完整的癌细胞或肿瘤细胞裂解物与非特异性佐剂一起制备的疫苗。新型第二代肿瘤采用了遗传学修饰过的肿瘤细胞，抗原呈递细胞(树突细胞)或重组肿瘤抗原(例如DNA肿瘤疫苗，正如下文所定义的)。可以对肿瘤细胞进行修饰，以便增强它们在诱导抗肿瘤免疫应答方面的效力，包括用编码能提供细胞毒性T-细胞识别和杀伤癌细胞所需要的信号的分子的基因进行遗传学修饰，所述分子如B7共刺激分子，HLA蛋白，以及不同细胞因子的基因(例如，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或GM-CSF)。另一种肿瘤疫苗方法是基于以下发现，接种含有编码肿瘤蛋白抗原的cDNA的质粒会导致对所述肿瘤抗原的强的和长期的体液和细胞介导的免疫应答。因此，如果可以鉴定有效的肿瘤抗原，就可以将编码所述肿瘤蛋白抗原的DNA序列插入载体基因组(例如质粒或甲病毒)，以便诱导抗肿瘤免疫应答。所述基于特异性肿瘤抗原的DNA疫苗，被称为DNA肿瘤疫苗(或DNA癌症疫苗)。据推测，某些骨髓衍生的专门的抗原呈递细胞(APCs)是由所述质粒转染的，并且，所述cDNA转录并且翻译成能诱导特异性反应的免疫蛋白。在一种相关的方法中，将所谓的裸露DNA直接注射到宿主体内，以便产生免疫应答。裸露的DNA包括直接注射到所述宿主体内的简单的细菌质粒。业已研究了DNA疫苗送递代表编码黑素瘤的诸如ALVAC gp100基因和编码结肠结肠癌的ALVAC CEA-B7.1的靶基因的精确的和特异性的核苷酸序列以及特异性蛋白片段，如存在于乳腺癌细胞中的HER2/Neu肽的能力，作为诱导免疫应答的潜在方法(例如，参见Tartaglia等(2001)Vaccine 192571-5；Knutson等(2001)J Clin Invest 107477-84；Chen等(2001)GeneTher 8316-23；和Sivanandham等(1998)Cancer ImmunolImmunother 46261-7)。不幸的是，肌内注射DNA通常不能产生有效的免疫应答，不过，经皮或皮内送递DNA可能更为有效。例如，经皮送递用乙型肝炎抗原编码DNA包被的微型金珠进行的临床实验，产生了对所述抗原的保护水平的抗体(参见Poland等The Fourth AnnualCconference On Vaccine Research，Arlington，VA(April 23-25，2001(www.nfid.org/conferences/vaccine01/abstracts/abss37-40.pdf))DNA疫苗，当有效时，提供了诱导有效的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的独特的方法，因为所述DNA编码的蛋白是在转染细胞的细胞质中合成的。另外，细菌质粒富含未甲基化的CpG核苷酸，并且是由巨噬细胞作为外源物质识别的，并且诱导天然免疫应答，它能够增强获得性免疫力。因此，在没有佐剂的情况下施用时，质粒DNA疫苗是有效的。另外，由所述疫苗表达的cDNAs，能够方便地进行操作，以便表达很多不同的抗原，并且提供共表达能增强免疫应答的其他蛋白的能力(例如，细胞因子和共刺激剂)。不过，特异性DNA疫苗必须通过实验和证明效力进行开发。对于用于癌症治疗的DNA疫苗来说尤其如此，因为即使是高水平表达的肿瘤特异性抗原，也不总是DNA癌疫苗免疫治疗的有效目标。因此，作为DNA肿瘤疫苗开发的唯一的第一个步骤，通常必须鉴定表面表达的肿瘤特异性抗原。所述新型肿瘤疫苗方法业已产生了特异性抗肿瘤免疫应答和目标临床反应。不过，所述肿瘤疫苗方法既不完整，也不是总能成功，因此，需要对癌症的免疫学治疗的改进的方法。2.专利技术概述概言之，本专利技术提供了在受试者体内产生针对器官或组织特异性疾病或状况的系统性免疫应答的方法，包括施用治疗有效量的疫苗，它能产生针对所述器官或组织特异性疾病或状况的免疫应答，并联合施用亲嗜性定位于或直接施用于所述器官或组织，并且在所述器官或组织中产生亲嗜性免疫应答的试剂。在优选实施方案中，所述器官或组织特异性疾病或状况是肿瘤或癌生长，而所述疫苗是肿瘤疫苗。在另一种优选实施方案中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在受试者体内产生针对器官或组织特异性疾病或状况的系统性免疫应答的方法，包括：施用治疗有效量的疫苗，它能产生针对所述器官或组织特异性疾病或状况的免疫应答；和施用亲嗜性定位于或直接施用于所述器官或组织的试剂，它能在所述器官或 组织中产生局部的免疫应答，以便产生针对所述器官或组织特异性疾病或状况的系统性免疫应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：RD舒利克，DM帕多尔，A雅因，
申请(专利权)人：约翰斯霍普金斯医学院，
类型：发明
国别省市：US[美国]