疫苗制造技术

本发明专利技术涉及奈瑟氏球菌疫苗组合物，它们的制备，和这种组合物在医学中的用途。更具体地，本发明专利技术涉及产生更适于产生奈瑟氏球菌，尤其是脑膜炎球菌的外膜泡囊（或疱）疫苗的新的工程化脑膜炎球菌菌株的方法。还基于新的ＬＯＳ亚单位或脑膜炎球菌外膜泡囊（或疱）疫苗的用途描述了有利的方法和疫苗产物，该ＬＯＳ亚单位或脑膜炎球菌外膜泡囊（或疱）疫苗可更安全和更有效地用于人受试者中。具体地，描述了基因下调的组合，如：ＰｏｒＡ和ＯｐＡ、ＰｏｒＡ和ＯｐＣ、ＯｐＡ和ＯｐＣ、ＰｏｒＡ和ＯｐＡ和ＯｐＣ。备选地或额外地，表明ｌｇｔＢ↑［－］是为了有效和安全地在奈瑟氏球菌疫苗组合物中使用Ｌ３和／或Ｌ２　　ＬＯＳ的最佳突变。还描述了来自ｌｇｔＢ↑［－］和荚膜多糖缺陷的脑膜炎球菌突变株的疱疫苗；还描述了制备疱制剂的有利方法，其中ＬＯＳ将作为重要抗原保留。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及奈瑟氏球菌疫苗组合物、它们的生产和这些组合物在医学中的用途。更具体地，本专利技术涉及产生更适于产生奈瑟氏球菌，尤其是脑膜炎球菌的外膜泡囊(或疱)疫苗的新的工程化脑膜炎球菌菌株的方法。还基于新的LOS亚单位或脑膜炎球菌外膜泡囊(或疱)疫苗的用途描述了有利的方法和疫苗产物，该LOS亚单位或脑膜炎球菌外膜泡囊(或疱)疫苗可更安全和更有效地用于人受试者中。
技术介绍
脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)(脑膜炎球菌)是经常从人上呼吸道分离的革兰氏阴性细菌。其可导致严重的侵入性细菌疾病如菌血症和脑膜炎。脑膜炎球菌疾病的发病率显示出地区的、季节的和年度的差异(Schwartz，B.，Moore，P.S.，Broome，C.V.；Clin.Microbiol.Rev.2(增刊)，S18-S24，1989)。该细菌通常根据其荚膜多糖的血清群分类。气候温和的国家中的多数疾病是由于血清群B菌株并且这些疾病的发病率为1-10/100,000/年总人口——有时达到更高值(Kaczmarski，E.B.(1997)，Commun.Dis.Rep.Rev.7R55-9，1995；Scholten，R.J.P.M.，Bijlmer，H.A.，Poolman，J.T.等Clin.Infect.Dis.16237-246，1993；Cruz，C.，Pavez，G.，Aguilar，E.，等Epidemiol.Infect.105119-126，1990)。血清群A脑膜炎球菌占优势的流行病(主要在中非)有时达到高达1000/100,000/年的发病率水平(Schwartz，B.，Moore，P.S.，Broome，C.V.Clin.Microbiol.Rev.2(增刊)，S18-S24，1989)。总体上脑膜炎球菌疾病的几乎所有病例都由血清群A、B、C、W-135和Y脑膜炎球菌导致，且四价A、C、W-135和Y荚膜多糖疫苗是可得到的(Armand，J.，Arminjon，F.，Mynard，M.C.，Lafaix，C.，J.Biol.Stand.10335-339，1982)。在过去几十年中许多欧洲国家内脑膜炎奈瑟氏球菌感染的频率已经上升。这归因于由于社会活动(例如，游泳池、戏院，等)增加导致的传播的增加。分离出对一些标准抗生素较不敏感或具有抗性的脑膜炎奈瑟氏球菌菌株已不罕见。该现象已经产生了对该生物的新的抗菌剂、疫苗、药物筛选方法和诊断试验的未满足的医学需求和需要。现今通过将现有的多糖疫苗化学缀合到载体蛋白改良这些疫苗(Lieberman，J.M.，Chiu，S.S.，Wong，V.K.，等JAMA 2751499-1503，1996)。然后，没有得到血清群B疫苗。已经发现该血清群B荚膜多糖是非免疫原性的——最可能是因为其与宿主组分有结构类似性(Wyle，F.A.，Artenstein，M.S.，Brandt，M.L.等J.Infect.Dis.126514-522，1972；Finne，J.M.，Leinonen，M.，Mkel，P.M.Lancet ii.355-357，1983)。因此努力集中在试图开发从外膜泡囊(或疱)或从它们纯化的蛋白组分得到的血清群B疫苗。备选地，用于疫苗开发的脑膜炎球菌抗原是脑膜炎球菌脂寡糖(LOS)。这些是结合外膜的糖脂，它们缺少O侧链而与肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的脂多糖类(LPS)不同，并从而像LPS的粗糙形式(Griffiss等，Rev Infect Dis 1988；10S287-295)。LOS的寡糖部分内的异质性导致不同脑膜炎球菌菌株之间的结构和抗原多样性(Griffiss等，Inf.Immun.1987；551792-1800)。这已被用于将菌株细分成12种免疫型(immunotype)(Scholtan等，J Med Microbiol 1994，41236-243)。免疫性L3、L7和L9在免疫学上相同并且结构类似(或甚至相同)并因此被指定为L3、7、9(或者，为了本说明书的目的，通称为“L3”)。脑膜炎球菌LOS L3、7、9(L3)、L2和L5可以通过唾液酸化，或者通过加入胞嘧啶核苷-5’-一磷酸-N-乙酰基神经氨酸而被修饰。尽管L2、L4和L6 LOS在免疫学上可区分，它们在结构上类似并且对于此处提到的L2，在本专利技术范围内可以任选被L4或L6代替。已经表明LOS的抗体在实验大鼠中保护大鼠抵抗感染并且有助于感染脑膜炎奈瑟氏球菌的儿童中的杀细菌活性(Griffiss等，J Infect Dis 1984；15071-79)。然而，与LOS用于脑膜炎球菌疫苗相关的一个问题是其毒性(由于其脂质A部分)。LOS还存在于脑膜炎球菌疱的表面上。许多年来的努力主要集中于开发基于脑膜炎球菌外膜泡囊(疱)的疫苗(de Moraes，J.C.，Perkins，B.，Camargo，M.C.等，Lancet 3401074-1078，1992；Bjune，G.，Hoiby，E.A.Gronnesby，J.K.等，3381093-1096，1991)。这些疫苗的优点是包括处于正确折叠构象的几种整合外膜蛋白，当施用于宿主时它们可引起保护性免疫应答。此外，奈瑟氏球菌菌株(包括脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B-menB)分泌足够量的外膜疱而可以进行它们的工业规模上的生产。然而，更通常通过包含以0.5％去污剂(例如，脱氧胆酸盐)提取细菌细胞的方法制备疱(例如EP 11243)。尽管由于上述LOS毒性(也称为内毒素)而希望使用该提取方法，但是该方法也具有从疫苗除去大多数LOS抗原的作用。使用LOS作为疫苗抗原的另一个问题是12种LPS免疫型以各种糖类结构存在(M.P.Jennings等l，Microbiology 1999，145，3013-3021；Mol Microbiol 2002，43931-43)。针对一种免疫型产生的抗体不能识别不同的免疫型。尽管努力集中于产生LOS免疫型的寡糖部分的一般的“核心”区(例如，WO 94/08021)，但是抗修饰的LOS产生的抗体的杀细菌活性丧失了。从而，疫苗可能需要具有不同免疫型的许多LOS组分以达到有效。使用LOS(也称作LPS或脂多糖)作为人疫苗的抗原的另一个问题是它们携带与人的糖类结构(例如，人红细胞上)相似的糖类结构，从而对它们的使用造成安全问题。然后由于LOS抗原的杀细菌效力的结构敏感性，改变LOS结构是有问题的。本专利技术给出了改善一个或多个上面的问题的方法，并给出了基于脑膜炎球菌LOS，尤其存在于外膜泡囊上时的LOS作为保护性抗原制备新疫苗的方法。专利技术描述本说明书中提到的出版物和专利或专利申请中公开的主题和信息在此处被并入作为参考。“脂寡糖”(或“LOS”)也可指“脂多糖”或“LPS”。专利技术人意欲让这里的术语“包含”在每种情况下可以任选被术语“由…组成”代替。本专利技术人已经发现缩短LOS寡糖结构导致丧失可以引起杀细菌免疫应答的表位。替代地，本专利技术人已经发现为了在疫苗制剂中最有效使用LOS，LOS寡糖结构必须尽可能多的保留，但是仅仅2种LOS抗原的组合可以产生普遍有效的奈瑟氏球菌(优选脑膜炎球菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
奈瑟氏球菌疱制剂，其来自具有Ｌ２　　ＬＯＳ免疫型的奈瑟氏球菌菌株或者具有Ｌ３　　ＬＯＳ免疫型的奈瑟氏球菌菌株并且其中菌株为ｌｇｔＢ↑［－］；或者奈瑟氏球菌疱制剂，其包含来自具有Ｌ２　　ＬＯＳ免疫型的奈瑟氏球菌菌株和具有Ｌ３　　ＬＯＳ免疫型的奈瑟氏球菌菌株的疱的组合，任选其中每种菌株为ｌｇｔＢ↑［－］。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：R比曼斯，P德诺埃，C费龙，C戈拉，J普尔曼，V魏南茨，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]