疫苗制造技术

本发明专利技术涉及衍生自恶性疟虫的环子孢子蛋白（ＣＳ蛋白）的抗原与药学上可接受的佐剂联合在制备药物中的用途，其中所述环子孢子蛋白被表达于疟疾感染的红细胞前期，所述药物用于为婴幼儿预防接种抵抗疟疾。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疫苗本专利技术涉及疟疾抗原的新用途，用以赋予对疟疾的免疫性。本专利技术特别地涉及来自恶性疟虫(P.falciparum)的环子孢子蛋白(CS蛋白)或其片段，用以为婴幼儿赋予对虐疾的免疫性。疟疾是全球主要的健康问题之一。在20世纪，经济和社会的发展，加之抗疟活动的开展，使得疟疾从全球大部分地区得以根除，疟疾的影响范围从全球面积的50％减少到27％。虽然如此，若考虑到人口增长，预计在2010年，世界人口的半数，大约35亿人将生存在疟疾传播的区域1。目前的估计表明，每年将会有超过100万人死于疟疾，仅仅非洲地区的经济损失就非常惊人，每年至少达到几十亿美金左右2。这些数据表明全球疟疾危机非常严重，成为世界卫生组织亟待解决的问题。从全球出现的对现有可用的、曾经高效药物的抗药性的出现，到健康系统的削弱和机能不全导致的资源匮乏等等，此危机的原因是多种多样的。如果不能发现控制此疾病的方法，那么全球改善健康状况和提高儿童存活率、降低贫困、促进安全感、强化易感人群的努力就将功亏一篑。本病最严重的类型之一是由原生寄生虫类恶性疟虫(Plasmodiumfalciparum)导致的，这是由疟疾导致死亡的主因。疟虫(Plasmodium)的生命周期是复杂的，需要两个宿主，人和蚊子来完成。人类的感染是由引入叮咬的、已被感染的蚊子唾液中的子孢子(sporozoite)而启动的。子孢子转移到肝脏，并在那里感染肝细胞，在此分化和繁殖，通过细胞内的红细胞外发育期，进入裂殖子阶段，在此阶段感染红细胞(RBC)以启动无性繁殖血液阶段的循环复制。RBC内的许多裂殖子分化到有性阶段配子细胞后，被蚊子摄入，在蚊子中肠内经过一系列阶段发育成为子孢子后迁移至唾液腺，至此此循环结束。疟虫子孢子阶段被确定为疟疾疫苗的可能靶点。采用灭活(辐射后)子孢子进行免疫，已经显示诱导了针对实验性人类疟疾的保护作用(Am.J，Trop.Med.Hyg24：297-402，1975)。但是，实际上和逻辑上，还不可能基于此方法、应用辐射后子孢子制造用于民众的疟疾疫苗。已知子孢子主要的表面蛋白是环子孢子蛋白(CS蛋白)。认为该蛋白在子孢子从最初通过蚊子感染的部位进入到循环、由此迁移至肝脏的过程中，参与子孢子的运动性和侵袭性。疟虫类的CS蛋白的特点是具有中心重复结构域(重复区)，侧面与非重复氨基(N端)和羧基(C端)片段相连。恶性疟虫的CS蛋白具有高度保守的中心重复区。一些团体已经提出基于各种形式或者部分的CS蛋白的亚基疫苗。这些疫苗中的两种仅仅基于中心重复序列，20世纪80年代早期就已经经过临床检测，其中之一为合成肽，另一为重组蛋白(BallouetalLancet：June6(1987)：1277和HerringtonetalNature328：257(1987))。这些疫苗成功激发了抗子孢子反应。但是，反应程度令人失望，有些疫苗根本不发生任何反应。此外，后续注射后并没有出现“加速”抗体水平，体外淋巴细胞繁殖实验结果表明多数志愿者的T细胞没有识别免疫显性重复序列。进而，这两种疫苗的效力非常之微，只有一名被免疫的志愿者未患上寄生虫血症。这些疫苗因此而未能继续得到开发。WO93/10152和WO98/05355公开了衍生自恶性疟虫CS蛋白的疫苗，明确利用该专利所述方法朝着抗恶性疟虫的预防接种有了一些进展，类似内容也可见于Heppneret等文章(2005，Vaccine23，2243-50.)。对于多种柱，例如NF54株，克隆3D7，来自恶性疟虫的CS蛋白已经被克隆、表达并且测序(Caspers等，Mol.Biochem.Parasitol.35，185-190，1989)。来自株3D7的蛋白特征为具有中心免疫显性重复区域，包括四肽Asn-Ala-Asn-Pro重复40次，但有四个次要重复序列Asn-Val-Asp-Pro散布其中。其他株中，主要和次要重复区域的数量不同，其相对位置也不同。这种中心蛋白两侧N和C端蛋白由非重复性氨基酸序列构成，被称为为CS蛋白的非重复部分。GlaxoSmithKlineBiologicals的RTS，S疟疾疫苗是基于CS蛋白的，在1987年就在开发了，目前是正被研究的最先进的疟疾疫苗候选物4。该疫苗特异性地靶向恶性疟虫的红细胞前期，并且在未感染疟疾()的成年志愿者中提供抵抗恶性疟虫子孢子感染的保护，并且在半免疫(semi-immune)成年人中提供抵抗天然暴露的保护，其中所述恶性疟虫子孢子是通过实验室培养的受感染的蚊子递送的5，6。RTS，S/AS02A(RTS，S结合佐剂系统)被用于接下来的第一阶段研究，研究在冈比亚被感染的年龄在6～11和1～5岁的儿童之间展开，确定该疫苗是安全、耐受良好和具有免疫原性的7。接着，在第一阶段研究中选定儿科疫苗，针对莫桑比克1～4岁儿童进行，研究表明疫苗是安全、耐受良好和具有免疫原性的8。专利WO2006/029887公开了利用RTS，S治疗1到4岁儿童恶性疟疾。世界卫生组织临床指导手册(见实用手册《恶性疟疾世卫组织管理》第二版，2002，http://mosquito.who.int/docs/hbsm.pdf)中描述了恶性疟疾(severemalaria)。根据世卫组织的针对恶性疟疾的定义分级，恶性疟疾是指儿童病情严重、高死亡风险。高风险可被认为是大约30％或更大。在026莫桑比克1-4岁儿童临床研究中，该疫苗对抗感染的总效力为45％左右，这是通过在相关儿童血液中开始检测到寄生虫的时间的延迟而进行测量的。临床疾病保护百分比为大约35％，恶性疟疾的保护百分比为大约50％。该效力的持续时间大约18个月。(Alonso等，Lancet：204，364，第1411-1420页205，和Lancet366第2012-2018页)在026试验中没有证据表明年龄和一般疫苗对非严重临床疟疾病的效力有联系，暗示效力并不会随着年龄的增加而显著变化。但是，进行进一步的探测研究分析以评估在年轻人群中的疫苗效力，其中所述年轻人群具有患有疟疾的风险。有趣的是，这种辅助性分析似乎暗示在该试验中，针对恶性疟疾的效力在年轻的孩子中可能更高。通过该分析没有暗示抗感染的保护或者一般效力(generalefficacy)，即推迟临床疟疾症状的产生，通常在年轻人群中会更好。根据专利技术者的理解，许多原因造成了仅有一种疟疾疫苗用于不足1岁的婴幼儿，包括包含新佐剂的实验配方的潜在毒性问题和/或婴幼儿免疫系统不成熟的理论，因此所述疫苗不能提供对疟疾感染的有效保护。在疟疾配方中使用的强佐剂，如包括QS21和/或MPL一般不用于儿科疫苗。取而代之，婴幼儿疫苗通常用较老的铝盐佐剂。但是，冈比亚进行的试验将疟疾疫苗SPf66用于6到11个月的婴幼儿。(Alonso等，ParasiteImmunology，1997：19：579-581)在坦桑尼亚疟疾肆虐的区域，SPf66对1到4岁首次感染疟疾的儿童显示了31％的保护。然而当在6到11个月婴幼儿中测试时，结果似乎说明临床疟疾在接种SPf66疫苗的儿童中的发病率高于那些接种灭活脊髓灰质炎疫苗配方的对照组婴幼儿。接种高剂量SPf66的婴幼儿其疗效最显著。近期一项临床试验(此处称为038研究)是针对那些10周大，第一本文档来自技高网...

【技术保护点】
衍生自恶性疟虫的环子孢子蛋白（ＣＳ蛋白）的抗原与药学上可接受的佐剂联合在制备药物中的用途，其中所述环子孢子蛋白被表达于疟疾感染的红细胞前期，所述药物用于为婴幼儿预防接种抵抗疟疾。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-8-13 60/955445;US 2007-8-22 60/957338;US 21.衍生自恶性疟虫(Plasmodiumfalciparum)的环子孢子蛋白的抗原与包括3D-MPL和QS21的药学上可接受的佐剂联合在制备药物中的用途，其中所述环子孢子蛋白被表达于疟疾感染的红细胞前期，所述药物用于为婴幼儿预防接种抵抗疟疾，其中目标人群为小于1岁的婴幼儿，其中3D-MPL和QS21二者均以每剂量25μg存在，所述剂量的最终体积为0.5ml，以及所述衍生自恶性疟虫(Plasmodiumfalciparum)的环子孢子蛋白的抗原为多肽RTS和S的混合颗粒形式，其中所述RTS为由下列构成的融合蛋白：蛋氨酸残基；3个氨基酸，MetAla...

【专利技术属性】
技术研发人员：WR巴罗，JD科亨，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]