光交联树脂聚乙烯醇苯乙烯吡啶的合成方法技术

一种ＰＶＡ－ＳｂＱ的合成及对乙酰胆碱酯酶的固定。解决现有技术存在乙酰胆碱酯酶的活力回收率低、活性保持期短的问题。ＰＶＡ－ＳｂＱ的合成是以对苯二甲醛、γ－甲基吡啶为原料经沸水浴回流后，加酸除去剩余对苯二甲醛并将滤液调至中性收集黄色沉淀，与硫酸二甲酯反应后得到ＳｂＱ，与ＰＶＡ溶液混合在微酸性条件下搅拌得ＰＶＡ－ＳｂＱ。对乙酰胆碱酯酶的固定是以ＰＶＡ－ＳｂＱ的磷酸缓冲液为固定液，加入乙酰胆碱酯酶粉混合均匀；吸取２０μＬ于９６孔酶标板的板孔中，紫外灯下聚合后将酶标板移入４℃冰箱中放置隔夜，待孔中缓冲液干燥后即可将酶固定住。与其它方法相比，本发明专利技术简单易行，经固定化以后的乙酰胆碱酯酶不易渗出、酶的活性保存期可被延长至半年以上，而且酶的活力回收率与其它方法相比有较大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及光交联树脂PVA-SbQ的合成及对乙酰胆碱酯酶的固定化

技术介绍
目前已有多种技术被应用到乙酰胆碱酯酶的固定化中，主要有吸附法、包埋法、和交联法等。吸附法的最大优点是不需试剂，只需很小的活化和清洗步骤，而且对酶的损坏要比其他化学方法小。但这种方法对pH改变、温度、离子强度和底物有很大的敏感性，因此使用这种方法要求的条件比较高，而且使用此法酶容易浸出因而酶层的活性下降较快。交联法虽然可将乙酰胆碱酯酶固定的较牢固，但是由于此法需使用双功能试剂，最常用的如戊二醛，它本身可使酶变性失去活性，所以导致酶的活力回收一般都比较低。聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PVA-SbQ)作为一种优良的酶固定化试剂目前在国外得到较广泛的应用，尤其在检测农药残留的生物传感技术中它作为乙酰胆碱酯酶的固定化试剂倍受推崇。光交联树脂聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PVA-SbQ)在紫外光的照射下可迅速聚合，并且聚合过程中不会对乙酰胆碱酯酶造成伤害，所以此法的酶活力回收率较高而且酶的固定牢固。但是目前国内外应用的PVA-SbQ大多是日本公司(TOYO GOSEI CO.LTD)提供的，目前国内尚未见到该产品。我们通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种光交联树脂ＰＶＡ－ＳｂＱ的合成方法，其特征是该方法包括：－分别取０．２～０．４Ｍ对苯二甲醛、０．１～０．２Ｍγ－甲基吡啶、２５～３０ｍＬ醋酸酐、１０～１２ｍＬ冰醋酸混合均匀，沸水浴加热回流６～８小时；－向上述溶液中加入３００ｍＬ１．０ＭＨＣｌ静置１～２小时，过滤除去沉淀物；－滤液加热至３０～４０℃，用苯萃取，弃去苯溶液，用ＮａＯＨ将滤液调至中性；－过滤收集黄色沉淀，水洗凉干即得到对甲酰苯乙烯吡啶，滤渣溶于８０～９０℃乙酸乙酯中，不溶物过滤除去。－加入硫酸二甲酯５０ｍＬ，放置隔夜，过滤；－收集滤渣即得１－甲基－２－（对甲酰苯乙烯基）吡啶甲硫酸盐（ＳｂＱ），分别用甲醇和丙酮洗涤，Ｐ↓［２］Ｏ↓...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄永春，刘红梅，傅学起，
申请(专利权)人：农业部环境保护科研监测所，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]