具有抗癌作用的反义寡核苷酸制造技术

提供了一种具有抗癌作用，例如抑制癌细胞生长及治疗或预防癌症等作用的反义寡核苷酸，以及一种包含该反义寡核苷酸的癌细胞生长抑制剂和治疗或预防癌症的制剂。一种针对信号识别颗粒（ＳＲＰ）７ＳＬＲＮＡ中４７到５１位核苷酸序列的反义寡核苷酸，一种包含该反义寡核苷酸的癌细胞生长抑制剂，及一种包含该反义寡核苷酸的癌症治疗或预防制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种具有抗癌作用，例如抑制癌细胞生长的作用，及治疗或预防癌症等作用的反义寡核苷酸，以及包含该反义寡核苷酸的癌细胞生长抑制剂及治疗或预防癌症的制剂。
技术介绍
信号识别颗粒(SRPs)参与动物细胞中分泌性蛋白的合成。整个SRP的沉降系数是11S，由7SL RNA和6种蛋白质组成。分泌性蛋白的合成从其mRNA结合到自由核糖体上开始。核糖体是蛋白合成的场所，由rRNA和多种核糖体蛋白组成。在真核生物中，整个核糖体的沉降系数是80S，进一步可分为沉降系数分别是60S和40S的两个颗粒，前者含有5S、5.8S和28S的rRNAs各一分子，而后者含有一分子18S rRNA的分子。SRP可识别延伸到核糖体外面的分泌性蛋白前体的N-末端或N-末端附近由疏水性氨基酸序列组成的信号肽，并与之结合成蛋白/核糖体复合物。从而终止随后的蛋白质翻译过程。SRP将复合物转运到内质网膜上，并与存在于内质网胞质侧的SRP受体蛋白结合。当SRP-结合复合物结合到膜上时，翻译的抑制作用被取消，从而使SRP解离，而将核糖体固定在膜上。然后继续进行翻译，使多肽链穿过膜，从而产生成熟的分泌性蛋白。另一方面，在真核细胞的细胞核中，不仅mRNA等参与如上所述的蛋白质翻译过程，而且一组约100到300个碱基长度的称作小核RNAs的RNAs也被合成出来。通常，它们与蛋白质结合而成为核糖核蛋白。例如，已知称作U1、U2、U3、U4、U5或U6的RNAs是小核RNAs。对于小核RNAs的功能，已发现U1、U2、U4、U5和U6参与mRNA前体的拼接过程，但其它功能还不清楚。虽然对小核RNAs的功能还有很多方面了解的不清楚，但已报道U5RNA可通过转染使培养的细胞发生癌化作用(参见非专利文献1)。而且也发现将poly(A)加到核苷酸序列为SEQ ID NO2的U5 RNA二级结构的第一个茎的3’末端的、依赖于RNA聚合酶II进行转录的转录物(转化RNA)，也同样具有癌化作用(参见非专利文献2)。该癌化作用依赖于转化RNA中的特定核苷酸序列(SEQ ID NO3)。在用兔网织红细胞提取物进行蛋白合成的实验中，转化RNA可抑制分泌性蛋白的合成(参见非专利文献3)。具有SEQ ID NO4所示核苷酸序列的寡脱氧核苷酸(ODN)在兔网织红细胞提取物中也抑制分泌性蛋白的合成。另外，也发现ODN中特定部分的核苷酸序列(SEQ IDNO5)可与核糖体28S RNA结合。另一方面，已报道ODN的反义寡脱氧核苷酸(反义ODN；SEQ ID NO6)可与SRP中的7SL RNA结合，并可降低分泌性蛋白合成的抑制作用(导致分泌性蛋白合成的增加)，而且反义ODN中特定部分的核苷酸序列(SEQ ID NO7)可与7SL RNA中48到51位的核苷酸序列(SEQ ID NO8)结合(参见附图说明图1)。这些报道表明U5 RNA中的核苷酸序列具有癌化作用和抑制分泌性蛋白合成的新功能，而针对U5 RNA中推测参与癌化或类似作用的核苷酸部分的反义ODN则具有抑制U5 RNA癌化及类似作用的功能，但仍不清楚哪个元件是必需的，并足以抑制U5 RNA的癌化及类似作用。非专利文献1Mol.Cell Biol.，9，4345-4356(1989)非专利文献2Mol.Carcinog.20，175-188(1997)非专利文献3J.Biol.Chem.274(22)，15786-15796(1999)
技术实现思路
本专利技术要解决的问题本专利技术的目的是提供一种具有抗癌作用，例如抑制癌细胞生长及治疗或预防癌症等疾病的反义寡核苷酸，以及含有该反义寡核苷酸的癌细胞生长抑制剂和治疗或预防癌症的制剂。技术方案如上所述，已表明针对U5 RNA中推测参与癌化及类似作用的核苷酸序列部分的反义ODN具有抑制U5 RNA癌化及类似作用的功能，但仍不清楚哪个元件是必需的，并足以抑制U5 RNA的癌化及类似作用。因此，本专利技术人进行了深入研究，并首次发现针对信号识别颗粒(SRP)的7SL RNA中47到51位核苷酸序列的反义寡核苷酸，对抑制U5 RNA的癌化及类似作用具有出人意料的显著效果，从而完成了本专利技术。特别地，基于阐明U5 RNA和来源于U5 RNA的转化RNA的癌化作用相关的原始功能，本专利技术要寻找并揭示一种以拮抗方式作用，从而显示致死作用，即抑制人癌细胞生长等作用的物质。本专利技术提供一种反义寡核苷酸，其针对信号识别颗粒(SRP)7SL RNA中47到51位核苷酸序列，上述中所述的反义寡核苷酸，其包含如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列，一种癌细胞生长抑制剂，其包含上述或中定义的反义寡核苷酸，一种癌症治疗或预防制剂，其包含上述或中定义的反义寡核苷酸，上述中所述的治疗或预防制剂，其中反义寡核苷酸存在于脂质体中，上述或中所述的治疗或预防制剂，其中反义寡核苷酸连接到载体上，及一种用上述或中所述的反义寡核苷酸生产上述中定义的癌细胞生长抑制剂或上述到中任何一个定义的治疗或预防制剂的方法。本专利技术的有益效果本专利技术的反义寡核苷酸可用于抑制癌细胞生长或杀死癌细胞，减轻或改善癌症症状，治疗或预防癌症等。附图的简要描述是来源于兔细胞SRP的7SL RNA的结构示意图。图中的数字表明碱基位置(除3’和5’之外)。是实施例中制备的反义寡核苷酸1到5对人癌细胞生长的影响的图表。是寡核苷酸3对人癌细胞生长浓度依赖性影响的图表。是寡核苷酸1到5对人癌细胞中细胞DNA合成的影响的图表。是寡核苷酸3对人癌细胞死亡的影响的图表。是以剂量为20μg/g(体重)进行静脉内注射的情况下，寡核苷酸3对鼠体重增加的影响的图表。专利技术的优选实施方案在本专利技术中，“核苷酸”包括DNA和RNA。“反义寡核苷酸”是指具有互补于特定核苷酸序列(以下称为有意序列)的核苷酸序列并能与有意序列杂交的寡核苷酸。对应于本专利技术中的反义寡核苷酸的有意序列是SRP 7SL RNA中47到51位的核苷酸序列。图1所示的是来源于兔细胞SRP的7SL RNA的结构示意图。作为7SL RNA的核苷酸序列，已知有来源于多种动物细胞的核苷酸序列。例如，上述来源于兔细胞的核苷酸序列在J.Biol.Chem.274(22)，15786-15796(1999)中有描述，来源于人细胞的SRP7SL RNA的核苷酸序列在Ullu，E.，和Wiener，A.M.，EMBO J.，3，3303-3310(1984)中有描述。来源于其它动物的7SL RNA的核苷酸序列在例如Larzen，N.，和Zwieb，C.，Nucleic Acids Res.，19，209-215(1991)中有描述。至少来源于哺乳动物细胞的核苷酸序列在7SL RNA中47到51位具有相同的核苷酸序列。本专利技术的反义寡核苷酸具有抗癌作用，例如抑制癌细胞生长的作用，治疗或预防癌症的作用等。特别地，包含SEQ ID NO1所示的核苷酸序列的反义寡核苷酸是有作用的。对癌细胞生长的抑制作用也包括杀死癌细胞的作用。推测本专利技术的反义寡核苷酸的任何作用都是基于对U5 RNA癌化及类似作用的抑制作用。此处本专利技术的反义寡核苷酸对癌细胞生长的抑制作用可通过下述实施例中描述的方法进行验证。合成本专利技术中的反义寡核苷酸的方法没有特别限定，可使用已知的寡核苷酸合成仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种反义寡核苷酸，其针对信号识别颗粒（ＳＲＰ）７ＳＬＲＮＡ中４７到５１位核苷酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：滨田胜友，
申请(专利权)人：有限会社琉球信誉，
类型：发明
国别省市：JP[日本]