ＣＩＫ细胞的冻存及复苏制造技术

ＣＩＫ细胞的冻存及复苏，本发明专利技术涉及冻存技术的一种新的应用。它是为了解决现有ＣＩＫ细胞诱导时间长，需要多次诱导和患者多次采血的问题，而首次提出了ＣＩＫ细胞的冻存及复苏。ＣＩＫ细胞的冻存及复苏通过以下步骤实现：一、ＣＩＫ细胞的冻存；二、ＣＩＫ细胞的复苏。本发明专利技术中复苏的细胞存活率为９５～９９％，利用冻存技术保存了ＣＩＫ细胞并使它的杀伤活性和增殖率得到保持，ＣＩＫ细胞冻存后可以根据需要随时复苏，复苏时间仅需要１～２天，避免了临床使用ＣＩＫ细胞需要多次诱导的麻烦和多次采血给患者造成的痛苦，节省了每次诱导所需要的大量的诱导因子和培养液，降低了成本，利用本发明专利技术可长期保存ＣＩＫ细胞并且在长期保存后ＣＩＫ细胞杀伤活性不发生变化。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
ＣＩＫ细胞的冻存及复苏，其特征在于ＣＩＫ细胞的冻存及复苏通过以下步骤实现：一、ＣＩＫ细胞的冻存：ａ、取ＣＩＫ细胞放入离心管中，然后以１０００转／分钟的速度离心５分钟，取出上清液放于玻璃瓶中并于零下２０度冻存，视上清液完全冻结后，将装有上清液的玻璃瓶放于零下８０度的低温冰箱中冻存备用，ｂ、向离心管内的细胞中加入细胞冻存液，细胞冻存液是由ＡＩＭＷ和ＤＭＳＯ按照９∶１的体积比配制，然后将离心管内物质放于冻存管中，ｃ、按照温度下降速度为１０摄氏度／小时的速率将冻存管在４℃的温度下放置１小时后，再于零下２０℃放置２小时，然后放入零下８０℃冰箱过夜，最后放于液氮中冻存，即达到冻存ＣＩＫ细胞的目的。二、ＣＩＫ细胞的复苏：ｄ、取出步骤一ａ中冻存的上清液于４度冰箱中解冻，然后将上清液在２０００转／分钟的条件下离心５分钟，取上清液备用，得到经过离心处理的上清液，ｅ、将冻存的ＣＩＫ细胞放入３７～４０℃的温水中速融，然后将ＣＩＫ细胞加入到装有生理盐水的离心管中并以１０００转／分钟的速度离心５分钟，然后去上清液，ｆ、将ＣＩＫ细胞放入到步骤二ｄ中经过离心处理的上清液中，然后将细胞浓度稀释到１．０×１０↑［６］／ｍｌ后均分于六孔板中培养，根据每孔中细胞的量按６００Ｕ／ｍｌ和１００ｎｇ／ｍｌ的浓度加ＩＬ－２和ＣＤ３ｍＡｂ，于孵箱中培养，即达到ＣＩＫ细胞复苏的目的。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王志华，袁玉涛，
申请(专利权)人：哈尔滨医科大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]