抗昆虫的转基因植物以及用于改善δ—内毒素抵抗目标昆虫活性的方法技术

公开了一种增加苏云金杆菌δ－内毒素抗鞘翅目昆虫的活力的方法，同时还公开了突变编码该多肽的核酸以及在表达该基因的转基因植物中提高昆虫抗性的方法。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
抗昆虫的转基因植物以及用于改善s-内毒素抵抗目标昆虫活性的方法本申请是申请日为1998年12月17日，申请号为98813713. 5，专利技术 名称为"抗昆虫的转基因植物以及用于改善S-内毒素抵抗目标昆虫活 性的方法"的专利技术专利申请的分案申请。 1. 0专利技术背景 1. l专利
本专利技术涉及的是用于生产通过基因工程方法获得的重组S-内毒 素的方法，其中所述的内毒素来源于苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis )， 在控制南部谷类食根昆虫(Diabrotica undecimpunctata howardi Barber) 以及西部食根昆虫(Diabrotica virgifera virgifera LeConte)中有用。 1. 2相关工艺的描述几乎所有的田间作物、植物、以及商业性耕种区域都很容易受到 一种或多种有害昆虫的攻击。特别成问题的是鞘翅类和鳞翅类昆虫。 例如，蔬菜和海甘蓝作物，如朝鲜蕨、大头菜、芝麻菜、韭菜、,斧、 扁豆、豆子、莴苣(如头、叶子、长叶莴苣)、甜菜根、球状驱虫苋、 暗绿叶黄体芋、绿花椰菜、甜瓜(如香瓜、西瓜、crenshaw、蜜瓜、 哈密瓜)、牙甘蓝、巻心菜、朝鲜蕨cardoni、胡萝卜、napa、花椰菜、 环秋葵、洋葱、芹菜、欧芹、鸡豌豆、荷兰防风草、菊苣、豌豆、大 白菜、胡椒、羽衣甘蓝、土豆、黄瓜、南瓜、葫声、萝卜、干的球茎 洋葱、芜菁甘蓝、茄子、婆罗门参、escarole、青葱、菊苣、大豆、 大蒜、菠菜、绿色洋葱、南瓜、绿色食品、制糖甜菜、甜土豆、芜菁、 唐莴苣、山奎、番茄、橄榄类蔬菜、芜菁、以及对一种或多种以下有 害昆虫的群袭敏感的各种不同的种类紫花苜蓿尺蠖、粘虫、甜菜粘 虫、朝鲜蓟羽蛾、甘蓝对虫、甘蓝尺蠖、甘蓝结网毛虫、谷类earworm、 芽菜啃叶虫、交叉条紋的甘蓝蠕虫、欧洲玉米蛀虫、菱形斑紋蛾、绿 cloverworm、进口甘蓝蠕虫、甜瓜蠕虫、杂食巻叶虫* (leaf rol ler)、 pickleworm、 rindworm复合物、盐碱地毛虫、大豆圏环虫*、烟草坊 虫、番茄果虫、番茄天蛾幼虫、番茄寸白虫、藜豆毛虫、以及黄条紋 粘虫。类似地，牧草以及干草作物，如苜蓿、牧草以及青贮的饲料通 常都会受到如粘虫、牛肉粘虫、苜蓿毛虫、欧洲酷蝇幼虫* (skipper)、 各种不同的尺蠖和织网毛虫、以及黄条紋粘虫等害虫的攻击。水果以及爬藤类作物，如苹果、杏树、櫻桃、油桃、桃树、梨树、 李树、梅子树、温柏杏树、栗子树、榛子树、大胡桃、阿月浑子树、 核桃、柑橘、黑莓、越橘、杂交草莓博伊森树莓、酸果蔓、黑加仑、罗甘莓、覆盆子、草莓、drapes、垮梨、香蕉、猕猴桃、柿子、石榴、 菠萝、热带水果，经常容易受到以下害虫的攻击并落叶achema天蛾、 amorbia、轱虫、柑橘夜蛾、香蕉酷蝇幼虫、黑头安火虫、越橘巻叶 虫、尺蠖、櫻桃果虫、柑橘夜蛾、酸果蔓girdler、东部帐篷毛虫、 秋季织网毛虫、秋季织网毛虫、榛树巻叶虫、榛树织网毛虫、果树巻 叶虫、葡萄果蛾、葡萄叶蝉(leaffolder)、葡萄啃叶虫(grapeleaf skeletonizer)、 绿色果虫、gu咖osos-batrachedra commosae、 吉 普赛蛀虫、山胡杉&shuckworm、天蛾幼虫、巻叶虫、navel柑橘毛虫、 斜条紋巻叶虫、杂食性巻叶虫、柑橘巻叶蛾、orangedog、东方果蛾、 流行性巻叶虫、桃树小枝蛀虫、大胡桃坚果鞘蛾幼虫、红条紋巻叶虫、 红色隆背毛虫、粗皮夜蛾、盐碱地毛虫、尺蠖、帐篷毛虫、thecla-thecia basillides、烟草坊虫、巻叶蛾、成蔟状的苹果蚜蛾、杂色 巻叶蛾、胡桃毛虫、西部帐篷毛虫、以及黄条紋粘虫.田间作物，如芸薹/油菜籽、月见草、牧场草、玉米(田地、甜的、 爆米花)、棉花、蛇麻草、加州希蒙得木(jojoba)、花生、稻谷、红 花、细粮(大麦、燕麦、黑麦、小麦等)、高粱、大豆、向曰葵、以及 烟草通常都是以下昆虫侵染的目标，包括粘虫、亚洲以及其它的玉 米蛀虫、条紋向曰葵蛾、甜菜粕虫、棉铃虫、甘蓝闺环虫、玉米食根 虫(包括南部和西部的种类)、棉叶穿孔虫、菱形斑紋蛾、欧洲玉米蛀 虫、绿色cloverworm、 headmoth、 headworm、进口的甘蓝毛虫、團环 虫(包括Anaca即todes种属)、斜条紋巻叶虫、杂食性leaftier、 podworm、 podworm、盐碱地毛虫、西南部玉米蛀虫、大豆尺蠖、斑 点夜蛾、向曰葵蛾、烟草蚜虫、烟草天蛾幼虫、藜豆毛虫。苗床植物(bedding plants)、花、观赏植物、蔬菜、以及盆栽经 常是许多害虫的食物，例如粘虫、杜鹃花蛾、甜菜粘虫、菱形花紋蛾、 ellomoth(天蛾幼虫)，佛罗里达蕨类毛虫、caterpillar. Iomoth、 尺蠖、夹竹桃蛾、杂食性叶蝉(leafroller )、杂食性尺蠖以及烟草 奸虫，森林、水果、观赏植物、结坚果的树以及灌木和其它的园圃树种通常容易受到各种不同的昆虫的攻击，如结草虫、黑头蚜虫、棕尾蛾、 加州橡树蛾、道格拉斯杉树蛾、榆树、尺蠖、秋季织网毛虫、果树叶蝉、绿色条紋枫树毛虫(mapleworin)、舞度蛾、短叶松芽巻蛾、含羞 草结网毛虫、松树蝶、红色隆背毛虫、鞍背次蛾、鞍突"(saddle prominent)次蛾、春秋尺蠖、云杉巻叶蛾、天幕毛虫、巻叶蛾、以及 西部丛蛾，同样地，草皮通常会受到诸如粘虫、草碎织网毛虫、以及 热带草皮织网毛虫的攻击。因为具有商业利益的作物通常会受到昆虫的攻击，所以在许多情 况中需要有对环境敏感的方法来控制或根除昆虫的侵袭。对于那些寻 求通过使用生态友好的组合物来控制昆虫种群的农民、园丁、栽培 者、以及商业和住宅区域而言,情况更是如此.近几年发展的使用最为广泛的rf境敏感杀虫配方是由来源于苏 云金芽孢杆菌的微生物农药组成的。苏云金芽孢杆菌是一种格兰氏阳 性细菌，它产生的结晶态蛋白或包含体对特定的昆虫目和种属具有特 定的毒性。已经发现有许多不同的苏云金芽胞杆菌菌抹可以产生杀虫 的结晶态蛋白。 一些组合物，包括可以产生杀虫蛋白的苏云金芽胞杆 菌，已经可以通过商业途径获得并用作环境可接受的杀虫剂，因为它 们对特定的目标昆虫具有相当的毒性而对植物以及其它的非目标生 物体是无害的， 1. 2. 18-内毒素S-内毒素被用于控制范围广泛的吃叶毛虫和甲虫，以及蚊子。这 些蛋白样的准孢子(parasporal)晶体(也称为杀虫晶体蛋白、晶体蛋 白、Bt包含体、晶状包含体、包含体、以及Bt毒素)是由苏云金芽 胞杆菌生产的杀虫蛋白的一个很大的集合，它们在被易受感染的昆虫 宿主摄取之后产生毒性.在过去的十年间，对苏云金芽胞杆菌毒素的 结构和功能的研究涵盖了所有的主要毒素类别.虽然这些毒素在具体 的结构和功能上存在区别，但是它们被认为在结构和功能上具有普遍 的类似性。基于对苏云金芽胞杆菌毒素的知识的积累，已经建立了苏 云金芽胞杆菌毒素的普遍性的作用模式，包括由昆虫摄取、在中肠 (包括胃和小肠)溶解、由于对于消化酶的抗性而导致的有时候部分消 化实际上"激活"了毒素，结合到中肠细胞，在昆虫细胞中形成一个 孢子，以及细胞动态平本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种修饰的苏云金芽胞杆菌Ｃｒｙ３Ｂｂ＊多肽，其在序列编号：９８的Ｃｒｙ３Ｂｂ＊多肽的一级序列的环区β１、α８中包含被一个或多个疏水性更强的氨基酸替代的一个或多个氨基酸，其中一个或多个氨基酸替代选自：Ｓｅｒ３１１被丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或苏氨酸替代，Ａｓｎ３１３被精氨酸、组氨酸、苏氨酸或缬氨酸替代，以及Ｇｌｕ３１７被丙氨酸、天冬酰胺、赖氨酸或缬氨酸替代。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：L恩格利斯，SM布鲁索克，TM马尔瓦，JW布赖森，CA库勒斯扎，FS瓦尔特斯，SL斯拉廷，MA冯特尔施，C罗马诺，
申请(专利权)人：孟山都技术有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]