本发明专利技术涉及ｓｉＲＮＡ双链序列，具体为一种抑制ｃａｓｐａｓｅ－３基因表达的ｓｉＲＮＡ序列，解决现有技术中没有最适宜的抑制ｃａｓｐａｓｅ－３基因表达的ｓｉＲＮＡ序列的问题，该序列为ｓｉＲＮＡ１：正义链５’－ＧＧＧＡＡＡＣＡＵＵＣＡＧＡＡＡＣＵＵｔｔ－３’反义链５’－ＡＡＧＵＵＵＣＵＧＡＡＵＧＵＵＵＣＣＣｔｇ－３’；本发明专利技术所提供的ｓｉＲＮＡ双链序列可用于制备抑制神经细胞凋亡或治疗神经退行性疾病的药物。该ｓｉＲＮＡ双链序列通过某种方式进入到生物体内时，比任何手段更高效、特异的抑制疾病相关蛋白的表达，使有关疾病基因发生沉默，能对靶基因的表达进行有效敲除，达到治疗目的，其序列特异性及基因抑制作用的强大性是其他药物难以匹敌的。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及siRNA双链序列，具体为一种抑制caspase-3基因表达的siRNA 序列。技术背景RNA干扰(RNA interference, RNAi)现象是一种在进化上保守的抵御转基 因或外来病毒侵犯的防御机制，是一种序列特异性的转录后基因沉默 (post-transcriptional gene silencing, PTGS)。它已在许多不同种属的生物体中被发 现，并在生物体细胞之间进行传递，具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作 用。RNAi技术不仅能大大推进人类后基因组计划的发展，还能高通量地筛选药 物靶基因，促进基因治疗、新药开发等，为治疗癌症、遗传病等疾病开辟新的 途径。RNAi的研究与应用具有极其重要的理论和实际意义，将对医学生物学的 发展产生深远的影响。虽然RNA干扰技术的研究历程较短，但其发展速度却超乎人们的想象。在 过去的几年时间里RNAi作为一种新基因疗法被广泛的应用于病毒感染、癌症、 显性遗传病等医学研究中，开辟了"基因治疗(gene-specific therapeutics)"的新理 念，小干扰RNA (small interfering RNA， siRNA)甚至被称为"治病药物"。目前， 人们己经开始利用RNAi技术从基因组水平分析哺乳动物体内基因的功能，可 以更迅速地鉴定出许多与疾病相关的基因，使我们可以更好地研究生物体内基 因调控的网络系统，现在RNAi技术已经能够成功治愈哺乳动物细胞、器官及 活体的病变，预示着不久的将来，RNAi会成功用于人类疾病的治疗，使得 siRNA的"治病药物"的称号名副其实。公知，人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡则 是病理性的，有关细胞死亡过程的研究，近年来已成为生物学、医学研究的一 个热点，到目前为此，人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式，即细胞坏死 与细胞凋亡。目前的研究认为，细胞坏死是细胞接受刺激后的一种被动的细胞 死亡方式，而细胞凋亡则是一种主动的程序性的细胞死亡方式，它是细胞的一 种基本生物学现象，细胞凋亡是多基因严格控制的过程，这些基因在种属之间非常保守，如Bcl-2基因家族、caspase基因家族、癌基因等，随着分子生物学 技术的发展对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识，但是迄今为止凋亡过程确 切机制尚不完全清楚，而凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接 的关系，如神经退行性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等。如果能应用RNA干扰 技术特异性地阻抑凋亡相关基因的表达及其蛋白质水平，将可以有效沉默凋亡 相关基因，帮助细胞减少凋亡，增进细胞活力。因此，对凋亡相关基因的RNA 干扰的研究与应用具有极其重要的理论和实际意义，能有效地筛选药物耙基 因，促进基因治疗、新药开发等，为治疗神经退行性疾病等与细胞凋亡相关的 疾病开辟新的途径。使用RNAi治疗疾病的思路是根据病原体的致病基因序列以及生物体内与 疾病发生相关的基因序列，设计和制备与这些基因序列具有同源性的小干扰 RNA (siRNA),然后通过某种方式将siRNA转移到动物体内使有关疾病基因 发生沉默，从而达到治疗的目的。其优势在于只抑制疾病相关蛋白的表达，而 不损伤正常细胞功能，其序列特异性及基因抑制作用的强大性是其他药物难以 匹敌的。siRNA可用于治疗任何由于基因发生突变或过度表达引起的疾病，只 要确定了与疾病相关的靶点，即靶基因，就可以通过siRNA特异性地使靶基因 沉默，所以寻找最适宜的siRNA序列，对于RNA干扰的广泛应用至关重要。caspase基因家族是一类基因结构相似并参与细胞凋亡的一组基因，根据它 们对细胞凋亡结果的不同分为两类， 一类是抑制细胞凋亡的基因，另一类是促 进细胞凋亡基因，其中caspase-3基因是促进细胞凋亡的基因，其过度表达能加 速与该凋亡基因相关的疾病的细胞凋亡，因此对caspase-3 RNAi的研究与应用 具有极其重要的理论和实际意义。但是作用于caspase-3基因，即耙基因不同位 点的siRNA的作用效果差异很大，可能与siRNA的碱基分布、两端自由能大小 等有关，在siRNA沉默特定基因的实验中，为保证siRNA能有效降解耙基因， 一般需要针对靶基因设计合成多条不同序列的siRNA，再从中筛选出有效序列， 所以有效siRNA序列的设计筛选是该技术的关键点，到目前为止，还没有最适 宜的抑制caspase-3基因表达的siRNA序列。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有技术中还没有最适宜的抑制caspase-3基因表达的 siRNA序列的问题，提供一种抑制caspase-3基因表达的siRNA序列。本专利技术是采用如下技术方案实现的 一种抑制caspase-3基因表达的siRNA 序列，该序列为下述序列中的任意一条或一条以上siRNAl:正义链5，一GGGAAACAUUCAGAAACUUtt—3' 反义链5'—AAGUUUCUGAAUGUUUCCCtg—3，； SiRNA2:正义链5'—GGAGCAGUUUUGUUUGUGUtt—3， 反义链5，—ACACAAACAAAACUGCUCCtt—3，； SiRNA3:正义链5，—GGGUACUUUAAGACAUACUtt—3， 反义链5，一AGUAUGUCUUAAAGUACCCtc—3，。 上述序列中，最适宜的用于抑制caspase-3基因表达的siRNA序列为siRNAl: siRNAl:正义链5，—GGGAAACAUUCAGAAACUUtt—3， 反义链5'—AAGUUUCUGAAUGUUUCCCtg—3'。本专利技术所提供的抑制caspase-3基因表达的siRNA由正义链和反义链组成， 它的正义链序列和反义链序列均由21个核苷酸组成，序列的方向从左至右均为 5'端至3，端。自5，端的第1至第19位核苷酸均为核糖核苷酸，第20至第21位 的核苷酸均为脱氧核糖核苷酸。本专利技术针对caspase-3基因序列设计合成一组siRNA，筛选出三对caspase-3 siRNA (siRNAl、 siRNA2、 siRNA3)，经QRT-PCR及免疫组织化学法检测，可 以有效抑制caspase-3基因表达，从而显著降低caspase-3蛋白水平的表达，并 在神经母细胞瘤细胞上验证了设计合成并筛选出的caspase-3 siRNA对神经母细 胞瘤细胞的抑制作用，其中以caspase-3 siRNAl效果最佳。本专利技术所提供的 caspase-3 siRNA序列不但可以用于体外培养细胞的RNAi，也可以用于体内实 验。本专利技术所提供的siRNA双链序列可用于制备与caspase-3基因相关疾病的治 疗药物，如细胞凋亡相关疾病或退行性疾病的药物。该siRNA双链序列或由此 得到的药物通过某种方式进入到动物体或人体内吋，可以比以往任何手段更高 效、特异、方便的抑制疾病相关蛋白的表达，使有关疾病基因发生沉默，从而 达到治疗的目的，其优势在于不损伤正常细胞功能，其序列特异性及基因抑制 作用的强大性是其他药物难以匹敌的。本专利技术筛选出能高效抑制caspase-3基因 表达的siRNA序列，能对靶基因的表达进行有效敲除。 附图说明图1为bax siRNA转染细胞的光镜照片图2为bax本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抑制ｃａｓｐａｓｅ－３基因表达的ｓｉＲＮＡ序列，该序列为下述序列中的任意一条或一条以上： ｓｉＲＮＡ１：正义链５’－ＧＧＧＡＡＡＣＡＵＵＣＡＧＡＡＡＣＵＵｔｔ－３’ 反义链５’－ＡＡＧＵＵＵＣＵＧＡＡＵＧＵＵＵＣＣＣｔｇ－３’； ＳｉＲＮＡ２：正义链５’－ＧＧＡＧＣＡＧＵＵＵＵＧＵＵＵＧＵＧＵｔｔ－３’ 反义链５’－ＡＣＡＣＡＡＡＣＡＡＡＡＣＵＧＣＵＣＣｔｔ－３’； ＳｉＲＮＡ３：正义链５’－ＧＧＧＵＡＣＵＵＵＡＡＧＡＣＡＵＡＣＵｔｔ－３’ 反义链５’－ＡＧＵＡＵＧＵＣＵＵＡＡＡＧＵＡＣＣＣｔｃ－３’。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：牛侨，张勤丽，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]
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