一种由噬菌体表达的单链变异片段抗体库制造技术
A single chain variant fragment antibody library expressed by phage
This disclosure is a by the expression of phage scFv library, which comprises a plurality of single stranded fragments by phage expression variation, characterized in that the single mutation fragment: (1) with regular structure specific; (2) the complementarity determining aromatic residues with specific regional distribution; and (3) the complementarity determining region having a specific sequence. The single chain variant fragment antibody library can be used to effectively prepare different antibodies that can be combined with different antigens. According to this, the present content provides a method for preparing different antibodies against different antigens in order to meet the needs of experimental research and / or clinical application in real time.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种由噬菌体表达的单链变异片段抗体库
本揭示内容是关于包含不同抗体片段的抗体库。更具体来说，本揭示内容是关于一种由噬菌体表达的单链变异片段(phage-displayedsingle-chainvariablefragment,scFv)抗体库及其用途。
技术介绍
抗体亦称为免疫球蛋白，其由免疫系统中负责辨识及中和外来物质(例如细菌及病毒)的浆细胞(plasmacell)所制造的一种大分子量的Y型蛋白。抗体可辨识一般称作抗原的外来标的物中的特定部位。抗体Y型结构的端点分别包含一抗原结合位置(paratope)，可专一性地结合至抗原上特定的抗原决定位置(epitope)，藉以使抗原与抗体二结构可准确地结合在一起。利用此种结合机制，一抗体可标定一微生物或一受感染的细胞，进而协助免疫系统其他成份进行后续的攻击，或是直接中和该标的物(举例来说，阻断一微生物用以侵入个体或存活的部分)。人体体液免疫系统(humoralimmunesystem)最主要的功能即是产生抗体。抗体通常是由基本结构单元所组成；一般来说，抗体具有二条分子量较大的重链及二条分子量较小的轻链。已知有五种重链...
【技术保护点】
一种由噬菌体表达的单链变异片段抗体库，包含复数个由噬菌体表达的scFv，其中各该些由噬菌体表达的scFv皆包含一第一重链互补性决定区域、一第二重链CDR、一第三重链CDR、一第一轻链CDR、一第二轻链CDR及一第三轻链CDR，其中，各该CDR‑H1、CDR‑L2及CDR‑L3具有一第一型的正则结构，且各该CDR‑H2及CDR‑L1具有一第二型的CS；以及各该CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3、CDR‑L1、CDR‑L2及CDR‑L3中芳香族残基的分布与一天然抗体的对应CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3、CDR‑L1、CDR‑L2及CDR‑L3中芳香族残基的分布相似。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.24 US 62/120,3521.一种由噬菌体表达的单链变异片段抗体库，包含复数个由噬菌体表达的scFv，其中各该些由噬菌体表达的scFv皆包含一第一重链互补性决定区域、一第二重链CDR、一第三重链CDR、一第一轻链CDR、一第二轻链CDR及一第三轻链CDR，其中，各该CDR-H1、CDR-L2及CDR-L3具有一第一型的正则结构，且各该CDR-H2及CDR-L1具有一第二型的CS；以及各该CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中芳香族残基的分布与一天然抗体的对应CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中芳香族残基的分布相似。2.如权利要求1所述的由噬菌体表达的scFv抗体库，其特征在于，该CDR-L1是由一包含SEQIDNO：2-10中任一核酸序列的第一编码序列编码而成，该CDR-L2是由一包含SEQIDNO：11-14中任一核酸序列的第二编码序列编码而成，该CDR-L3是由一包含SEQIDNO：15-22中任一核酸序列的第三编码序列编码而成，该CDR-H1是由一包含SEQIDNO：23-26中任一核酸序列的第四编码序列编码而成，该CDR-H2是由一包含SEQIDNO：27-28中任一核酸序列的第五编码序列编码而成，且该CDR-H3是由一包含SEQIDNO：29-106中任一核酸序列的第六编码序列编码而成。3.如权利要求1所述的由噬菌体表达的scFv抗体库，其特征在于，该噬菌体是一M13噬菌体或一T7噬菌体。4.如权利要求1所述的由噬菌体表达的scFv抗体库，其特征在于，在该些由噬菌体表达的scFv中，至少一由噬菌体表达的scFv对一蛋白抗原具有专一性，其中该蛋白抗原选自由第二型的人类表皮生长因子受体、麦芽糖结合蛋白质、牛血清白蛋白、人类血清白蛋白、溶菌酶、白介素-1β、流感病毒的血球凝集素、流感病毒的核蛋白、血管内皮生长因子、第一型的表皮生长因子受体、第三型表皮生长因子受体、高血糖素受体、人类脱氧核糖核酸水解酶、第一型的程序性死亡配体、第三型唾液酸结合免疫球蛋白相似凝集素、免疫球蛋白G的结晶片段区域及利妥昔所组成的群组。5.一种用以制备权利要求1的由噬菌体表达的scFv抗体库的方法，包含：(1)合成一第一核酸序列，其包含分别用以编码一免疫球蛋白基因的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的一第一、一第二、一第三、一第四、一第五及一第六编码序列；(2)将该第一核酸序列插入一第一噬菌粒载体中；(3)以定位点突变方法分别修饰该第一、第二及第三编码序列以制备一变异轻链抗体库，其包含一第一组由噬菌体表达的scFv，其中各scFv分别具有经修饰的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3；以及以定位点突变方法分别修饰该第四、第五及第六编码序列以制备一变异重链抗体库，其包含一第二组由噬菌体表达的scFv，其中各scFv分别具有经修饰的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；(4)利用一蛋白L来筛选该VL抗体库，由该VL抗体库挑选一第三组由噬菌体表达的scFv；且利用一蛋白A来筛选该VH抗体库，由该VH抗体库挑选一第四组由噬菌体表达的scFv；(5)由对应的噬菌体中扩增复数个第二核酸序列，其用以编码经修饰的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3，且由对应的噬菌体中扩增复数个第三核酸序列，其用以编码经修饰的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3；以及(6)将该些第二及第三核酸序列插入一第二噬菌粒载体以制备权利要求1的由噬菌体表达的scFv抗体库。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，该第一、第二及第三编码序列是分别以SEQIDNO：107-115、116-119及120-127的核酸序列进行修饰，且该第四、第五及第六编码序列是分别以SEQIDNO：128-131、132-133及134-211的核酸序列进行修饰。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤(3)前更包含一步骤，其是将该免疫球蛋白基因的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中芳香族残基的分布与一天然抗体的对应CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中芳香族残基的分布进行比对。8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)的该免疫球蛋白基因用以编码一对VEGF具有专一性的抗体。9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，该第一及第二噬菌粒载体皆是源自M13噬菌体。10.一种利用权利要求1的由噬菌体表达的scFv抗体库制备一重组抗体的方法，其中该重组抗体对一蛋白抗原具有结合亲和性及专一性；该方法包含：(1)以该蛋白抗原筛选权利要求1的由噬菌体表达的scFv抗体库；(2)挑选复数个噬菌体，其中该些噬菌体会分别表达对该蛋白抗原具有结合亲和性及专一性的scFv；(3)使步骤(2)挑选的该些噬菌体分别表达可溶形式的scFv；(4)由步骤(3)的scFv中挑选一对该蛋白抗原具有高结合亲和性及专一性的可溶形式scFv；(5)由会表达步骤(4)的可溶形式scFv的噬菌体中萃取一噬菌粒DNA；(6)以步骤(5)的噬菌粒DNA作为模版，利用聚合酶连...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨安綏，陈鸿森，陈英谦，董昭萍，侯信成，余忠銘，杨淇凯，邱奕凯，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71
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