一种TALE聚体库的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种TALE聚体库的构建方法，该方法通过TALE单体扩增、构建酶切连接产物、酶切连接产物扩增、BP反应后建立TALE聚体库。利用TALE聚体库，可以组装识别20-25bpTales模块，扩大识别区域。本发明专利技术的方法准确率高，灵活性和高通量，可以准确地高通量构建载体，大大节约成本。该方法可以扩大识别区域，准确地高通量构建载体，大大节约成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物学领域中的构建方法，特别是涉及一种TALE聚体库的构建方法。
技术介绍
TALEN(Transcription Activator-Like（TAL）Effector Nucleases)靶向基因敲除技术是一项崭新的分子生物学工具，是基因功能研究领域的一项重大技术突破。该技术利用TAL序列模块，构建针对任意核酸靶序列的重组核酸酶，可以实现在特异的位点打断目标基因，从而敲除该基因。TALE蛋白N端和C端分别是核定位信号(Nuclear localization signal,NLS)和转录激活结构域(Activation domain,AD),而中部则是介导其与DNA特异识别与结合的结构域。TALE蛋白的中部包含一段很长的、串联排列的重复序列，其序列重复的部分由长度为33～35个氨基酸残基的重复单位(或称重复单元)构成,在每个重复单位中,+12和+13位的氨基酸残基是实现靶向识别特异DNA碱基的关键位点,随靶点核苷酸序列的不同而异，被称作重复可变双残基(Repea本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种TALE聚体库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）TALE单体扩增：分别以pTALE‑NI，pTALE‑NG，pTALE‑NH，pTALE‑HD载体为模板，使用引物对TALE‑Fn/TALE‑Rn进行扩增，分别得到第一类至第十五类单体的混合物和第十六类单体N16，其中，所述n为1至16；（2）构建酶切连接产物：分别将所述第一类至第十五类单体进行酶切和连接，得到第一至第八酶切连接产物；（3）酶切连接产物扩增：分别以所述第一至第八酶切连接产物和第十六类单体N16为模板，使用引物对attB1‑F/attB1‑R进行扩增，分别得到第一类至第六类五聚体混合物、三聚体混合物、二聚体混合物和第十...

【技术特征摘要】
1.一种TALE聚体库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）TALE单体扩增：分别以pTALE-NI，pTALE-NG，pTALE-NH，pTALE-HD载
体为模板，使用引物对TALE-Fn/TALE-Rn进行扩增，分别得到第一类至第十五类
单体的混合物和第十六类单体N16，其中，所述n为1至16；
（2）构建酶切连接产物：分别将所述第一类至第十五类单体进行酶切和连
接，得到第一至第八酶切连接产物；
（3）酶切连接产物扩增：分别以所述第一至第八酶切连接产物和第十六类
单体N16为模板，使用引物对attB1-F/attB1-R进行扩增，分别得到第一类至第
六类五聚体混合物、三聚体混合物、二聚体混合物和第十六类单体N16扩增产物；
（4）TALE聚体克隆：分别将所述第一类、第二类、第三类、第四类、第五
类、第六类五聚体混合物、三聚体、二聚体混合物以及第十六类单体N16扩增产
物，与pDonr221载体（Kana+）进行BP反应，将BP反应产物进行转化并进行测序；
（5）TALE聚体库构建：根据确定的五聚体、三聚体、二聚体和单体序列信
息，得到第一类至第五类五聚体库、三聚体库、二聚体库和单体库。
2.根据权利要求1所述的TALE聚体库的构建方法，其特征在于，所述TALE
单体扩增包括如下步骤：
分别以pTALE-NI，pTALE-NG，pTALE-NH，pTALE-HD为模板，
使用引物对TALE-F1/TALE-R1，进行扩增，得到第一类单体的混合物，即
NI1，NG1，NH1和HD1；
使用TALE-F2/TALE-R2引物对进行扩增，得到第二类单体的混合物，即NI2，
NG2，NH2和HD2；
使用TALE-F3/TALE-R3引物对进行扩增，得到第三类单体的混合物，即NI3，
NG3，NH3和HD3；
使用TALE-F4/TALE-R4引物对进行扩增，得到第四类单体的混合物，即NI4，
NG4，NH4和HD4；
使用TALE-F5/TALE-R5引物对进行扩增，得到第五类单体的混合物，即NI5，

\tNG5，NH5和HD5；
使用TALE-F6/TALE-R1引物对进行扩增，得到第六类单体的混合物，即NI6，
NG6，NH6和HD6；
使用TALE-F5/TALE-R7引物对进行扩增，得到第七类单体的混合物，即NI7，
NG7，NH7和HD7；
使用TALE-F8/TALE-R1引物对进行扩增，得到第八类单体的混合物，即NI8，
NG8，NH8和HD8；
使用TALE-F5/TALE-R9引物对进行扩增，得到第九类单体的混合物，即NI9，
NG9，NH9和HD9；
使用TALE-F10/TALE-R1引物对进行扩增，得到第十类单体的混合物，即
NI10，NG10，NH10和HD10；
使用TALE-F5/TALE-R11引物对进行扩增，得到第十一类单体的混合物，即
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文忠，施金秀，张玮，蒙伟能，李春园，温华杰，
申请(专利权)人：赛业广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44