抗人膜类型ADAM28抗体制造技术

本发明专利技术提供由SEQ ID NO:2代表的氨基酸序列中第524个至第659个氨基酸的区域中的表位处特异性结合人膜锚定型ADAM28的活性的抗体。本发明专利技术还提供了用于递送药物至可以表达人膜类型ADAM28的细胞或组织的药物递送介质，所述药物递送介质包含抗体。

Anti human membrane type ADAM28 antibody

The present invention provides antibodies by the amino acid sequence of SEQ ID NO:2 represents 524th to 659th amino acids in the region at the epitope specific binding to membrane anchored ADAM28 activity. The invention also provides a drug delivery medium for delivering drugs to cells or tissues that can express human membrane type ADAM28, and the drug delivery medium contains antibodies.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗人膜类型ADAM28抗体[
]本专利技术涉及抗人膜锚定型ADAM28抗体及其用途。[
技术介绍
]导弹疗法，其包括将抗肿瘤化合物诸如化疗剂、放射性同位素、毒素等结合至针对特异性表达于癌细胞中的抗原的单克隆抗体，并选择性将其递送至靶标已进入实践阶段。在导弹疗法中，期望抗肿瘤化合物的副作用降低，因为可以选择性攻击癌组织同时抑制正常细胞摄入抗肿瘤化合物。作为靶向癌症的导弹疗法中所用的抗体，KADCYLA（曲妥珠单抗Emtansine）等是已知的。由于存在多种癌细胞，因此希望拥有许多可用于导弹疗法的抗体的变种以能够应对靶癌细胞的抗原表达模式。ADAM蛋白（ADAM：解聚素和金属蛋白酶）是参与跨膜蛋白的胞外域脱落、细胞粘附和浸润的多功能性蛋白（非专利文献1、2）。人基因组含有25个ADAM（包括四个假基因），且21种的ADAM包括13种展示蛋白水解活性的蛋白水解ADAM以及8种非蛋白水解ADAM（非专利文献1、3）。蛋白水解ADAM具有基质金属蛋白酶（MMP）的金属蛋白酶结构域，并且典型的蛋白水解ADAM蛋白包含前肽、金属蛋白酶、解聚素样、富含半胱氨酸、表皮生长因子样、跨膜和胞质结构域（非专利文献3-9）。许多蛋白水解ADAM（包括ADAM8、ADAM9、ADAM12、ADAM15、ADAM17、ADAM9和ADAM28）在人癌症中过表达并且与肿瘤生长和进展相关（非专利文献5、9）。本专利技术人的前期研究已表明ADAM28（也称为ADAM金属蛋白酶结构域28）在人非小细胞肺癌和乳腺癌中大量表达（非专利文献12、13），所述ADAM28具有两个可选的同种型，包括原型膜锚定形式（ADAM28m）和短的分泌形式（ADAM28s）（非专利文献5、10、11）。通过原位杂交和免疫组织化学，本专利技术人已证实ADAM28主要表达于包含在癌组织中的癌细胞内，并且ADAM28mRNA表达水平与乳腺癌的细胞增殖（非专利文献13）和非小细胞肺癌中的癌细胞的增殖和浸润（非专利文献12）相关。在平行研究中，本专利技术人显示非小细胞肺癌患者中的血清ADAM28水平实质上随肿瘤进展、淋巴结转移和癌复发而增加（非专利文献14）。这些数据暗示ADAM28参与特别是人癌症中的细胞增殖和转移。本专利技术人已证实ADAM28通过选择性消化IGF-I/IGFBP-3复合体中的IGF结合蛋白-3(IGFBP-3)经胰岛素样生长因子I（IGF-I）的生物利用率增加而促进癌细胞增殖（非专利文献13）和通过消化乳腺癌中的结缔组织生长因子而促进血管发生（非专利文献15）。本专利技术人获得了抗人ADAM28抗体，其显示针对癌细胞的优异的增殖抑制作用和癌转移抑制作用（专利文献1）。[文献列表][专利文献][专利文献1]WO2014/073292A1[非专利文献][非专利文献1]MolAspectsMed.2008;29(5):258-289[非专利文献2]SeminCellDevBiol.2009;20(2):138-145[非专利文献3]PatholInt.2010;60(7):477-496[非专利文献4]GenesDev.2003;17(1):7-30[非专利文献5]CancerSci.2007;98(5):621-628[非专利文献6]NatRevMolCellBiol.2005;6(1):32-43[非专利文献7]Kelley’sTextbookofRheumatology.8thed.Philadelphia,PA:ElsevierSaunders;2009:115-134[非专利文献8]CurrOpinCellBiol.2003;15(5):598-606[非专利文献9]NatRevCancer.2008;8(12):929-941[非专利文献10]JBiolChem.1999;274(41):29251-29259[非专利文献11]CurrPharmDes.2009;15(20):2349-2358[非专利文献12]IntJCancer.2006;118(2):263-273[非专利文献13]CancerRes.2006;66(20):9913-9920[非专利文献14]IntJCancer.2010;127(8):1844-1856[非专利文献15]BiochemBiophysResCommun.2010;402(4):651-657。[专利技术概述][本专利技术待解决问题]本专利技术人研究了之前获得的抗ADAM28抗体（专利文献1）在导弹疗法中的有用性。结果是，证实抗人ADAM28抗体结合表达膜锚定型ADAM28（ADAM28m）的癌细胞并且可用于导弹疗法中作为递送抗肿瘤化合物至癌细胞的载体，而表达膜锚定型ADAM28的癌细胞在许多情况下也同时表达分泌型ADAM28（ADAM28s），并且该分泌型ADAM28与膜锚定型ADAM28竞争结合抗ADAM28抗体，并且可以抑制抗ADAM28抗体与癌细胞的结合。包含抗ADAM28抗体和抗肿瘤化合物的缀合物与血流中的分泌型ADAM28的结合不仅使得缀合物无法递送抗肿瘤化合物至靶癌细胞，而且还产生了诱导副作用的风险，因为抗肿瘤化合物被掺入到正常细胞中。本专利技术的目标是提供可用于表达膜锚定型ADAM28的癌细胞的导弹疗法的抗ADAM28抗体。[解决问题的方法]本专利技术人已经进行了大量研究尝试解决上述问题并且通过用对于人膜锚定型ADAM28特异性的结构域的重组蛋白免疫小鼠、从免疫的淋巴细胞中建立杂交瘤并选择特异性与免疫原反应的克隆而成功建立了这样的单克隆抗体，所述抗体特异性结合人膜锚定型ADAM28，且不结合人分泌型ADAM28。所获得的单克隆抗体对人膜锚定型ADAM28具有高结合活性，并且可用作靶向表达人膜锚定型ADAM28的癌细胞的导弹疗法中的递送媒介物。本专利技术人基于以上发现已进一步研究并完成本专利技术。即，本专利技术涉及以下内容。[1]抗体，其具有在SEQIDNO:2中显示的氨基酸序列中第524个至第659个氨基酸的区域中的表位处特异性结合人膜锚定型ADAM28的活性。[2][1]的抗体，其中所述表位在SEQIDNO:2中显示的氨基酸序列中的第536个至第543个氨基酸的区域中。[3][1]或[2]的抗体，其不具有结合人分泌型ADAM28的活性。[4][1]-[3]的抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中（1）所述轻链可变区包含含有SEQIDNO:5中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:6中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:7中显示的氨基酸序列的CDR3，和所述重链可变区包含含有SEQIDNO:8中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:9中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:10中显示的氨基酸序列的CDR3，或（2）所述轻链可变区包含含有SEQIDNO:5中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:6中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:7中显示的氨基酸序列的CDR3，和所述重链可变区包含含有SEQIDNO:8中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:9中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:10中显示的氨基酸序列的CDR3，除了选自SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体，其具有在SEQ ID NO: 2中显示的氨基酸序列中第524个至第659个氨基酸的区域中的表位处特异性结合人膜锚定型ADAM28的活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.06 JP 2015-0452441.一种抗体，其具有在SEQIDNO:2中显示的氨基酸序列中第524个至第659个氨基酸的区域中的表位处特异性结合人膜锚定型ADAM28的活性。2.权利要求1的抗体，其中所述表位在SEQIDNO:2中显示的氨基酸序列中的第536个至第543个氨基酸的区域中。3.权利要求1或2的抗体，其不具有结合人分泌型ADAM28的活性。4.权利要求1-3中任一项的抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中（1）所述轻链可变区包含含有SEQIDNO:5中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:6中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:7中显示的氨基酸序列的CDR3，和所述重链可变区包含含有SEQIDNO:8中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:9中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:10中显示的氨基酸序列的CDR3，或（2）所述轻链可变区包含含有SEQIDNO:5中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:6中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:7中显示的氨基酸序列的CDR3，和所述重链可变区包含含有SEQIDNO:8中显示的氨基酸序列的CDR1、含有SEQIDNO:9中显示的氨基酸序列的CDR2和含有SEQIDNO:10中显示的氨基酸序列的CDR3，除了选自SEQIDNOs:5、6和7中显示的氨基酸序列的至少一个氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1-3个氨基酸，和/或选自SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫越阳，古城周久，望月早月，下田将之，冈田保典，
申请(专利权)人：基因先端领域株式会社，学校法人庆应义塾，
类型：发明
国别省市：日本,JP