一种肉苁蓉多肽的提取方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种肉苁蓉多肽的提取方法及用途，由以下步骤组成：将肉苁蓉粉碎，加入溶剂提取，滤过后将滤渣烘干，烘干的滤渣用水提取2次，滤过后合并滤液，调节pH值至6.5~7.5，然后加入复合蛋白酶酶解2~4小时，将酶解液于90℃灭活后，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液浓缩至浸膏，向浸膏中加入95%乙醇沉淀多糖，过滤后将滤液浓缩，烘干，得到肉苁蓉多肽提取物。本发明专利技术提供的制备方法具有使用溶剂简单、可回收利用，生产成本低、操作简便等特点，适合肉苁蓉多肽的工业化生产。所得肉苁蓉多肽提取物可用于制备保健食品，具有补充体力、消除疲劳的功效。

A method for extracting the polypeptide from cistanche and its use

The invention discloses a method for extraction of Cistanche polypeptide and uses thereof, comprising the following steps: adding Cistanche crushing, solvent extraction, filtration after drying the residue, the residue of dried water extract 2 times, the filtrate after filtration, adjusting the pH value to 6.5~7.5, then adding compound protease 2~4 hours, the enzymolysis liquid at 90 DEG C after inactivation, with MWCO of nanofiltration 10000Da, filtrate concentrating, adding to the extract in 95% ethanol precipitation of polysaccharides, after filtering, concentrating, drying, Cistanche polypeptide extract. The preparation method provided by the invention has the advantages of simple solvent, recyclability, low production cost and simple operation, and is suitable for industrialized production of Cistanche deserticola polypeptide. The polypeptides extract of Cistanche can be used in the preparation of health food, and it has the effect of supplementation and fatigue.

【技术实现步骤摘要】
一种肉苁蓉多肽的提取方法及用途
本专利技术属于生物技术和植物提取领域，具体的涉及一种肉苁蓉多肽的提取方法，以及该肉苁蓉多肽在保健品方面的用途。
技术介绍
肉苁蓉(HerbaCistanches)为列当科肉苁蓉属植物，为补肾壮阳、润肠通便之要药。始载于《神农本草经》，被列为上品，具有“沙漠人参”之称。目前已分离鉴定的肉苁蓉化学成分主要有苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木质素类、氨基酸、糖类等。现代药理研究证明肉苁蓉还具有抗疲劳、抗衰老、增强机体免疫力等作用，且没有发现不良反应。近年来，以肉苁蓉为原料的保健品大有兴起之势，肉苁蓉在营养保健方面具有很大的开发利用价值。研究发现植物蛋白质的酶解产物中存在一些具有较高生物活性的短肽，如抗氧化肽、免疫促进肽等，这些生物活性肽的研究为蛋白质资源的利用提供了新的机遇，也为新功能性食品的开发提供了新的途径，是当前食品科学领域引人注目的研究方向之一。中国专利CN104263790A公开了“一种肉苁蓉多肽提取物、制备方法及其用途”，该专利技术主要利用肉苁蓉渣，经烘干粉碎，再经过碱溶酸沉法处理，酶解，超滤纯化，最终得到分子量为500~10000Da的肉苁蓉多肽。但是该专利在提取多肽时，使用碱性溶液在pH值为9的环境下浸提，易导致蛋白质失活，造成肉苁蓉多肽的损失，没有明确提到肉苁蓉多肽的得率。肉苁蓉中含有丰富的可溶性蛋白，本专利利用现代中药提取技术，将肉苁蓉蛋白质酶解制备生物活性肽并进行功效性应用开发。本工艺操作简便，时间短，适合于工业生产。得到的肉苁蓉多肽分子量小，纯度高，利于人体吸收，具有补充体力、消除疲劳等功效。本专利技术可以提高肉苁蓉的利用价值，增加其产品的附加值，产生巨大的经济效益，对于进一步拓宽肉苁蓉的应用领域具有重要意义。
技术实现思路
专利技术目的：提供一种新的肉苁蓉多肽的制备方法，该方法能有效地将肉苁蓉蛋白酶解成具有一定生物活性且更利于人体吸收的小分子多肽，提高其保健价值，实现肉苁蓉的高值化利用。技术方案：一种肉苁蓉多肽的提取方法，包括以下步骤：（1）取肉苁蓉，将其粉碎，用一定量的溶剂在适宜温度下提取1h，过滤，将滤渣烘干；（2）向滤渣中加入一定量的水，在一定温度下提取2次，每次1h，滤过合并滤液；（3）用一定浓度的碱溶液调节步骤（3）得到的滤液的pH值；（4）向滤液中加入一定量的复合蛋白酶，在适宜温度下恒温搅拌酶解，得到酶解液；（5）将酶解液置于90℃水浴灭活10min，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液减压浓缩至浸膏；（6）向浸膏中加入9倍重量的95%乙醇，静置沉淀，除去多糖沉淀；（7）将滤液浓缩，烘干，得到肉苁蓉多肽提取物。上述步骤（1）中，溶剂为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚中的任意一种，优选乙醇；溶剂与肉苁蓉的重量比为（4~8）:1；提取温度为40~90℃。本步骤的目的在于除去非极性杂质，减少后续纯化过程中的干扰杂质，提取所用的溶剂可回收再利用，减少成本，减少环境污染。上述步骤（2）中，水与肉苁蓉的重量比为（8~12）:1；提取温度为85~95℃。上述步骤（3）中，碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠或者氨水的水溶液中的任意一种；碱溶液浓度为0.1~2mol/L；调节pH值至6.5~7.5。上述步骤（4）中，复合蛋白酶为菠萝蛋白酶和中性蛋白酶两种酶的混合物，两种蛋白酶质量比为1:0.5~3，优选为1:1~2，最优选1:1.5。蛋白酶包括胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶等，本专利技术选择菠萝蛋白酶和中性蛋白酶两种酶的混合物并确定1:0.5~3的比例，主要是通过对水解过程的水解度的测定，发现与其他酶相比，用量接近的情况下，1:0.5~3比例的菠萝蛋白酶和中性蛋白酶的水解度最佳，且用量、成本优于其他酶。上述步骤（4）中，复合蛋白酶用量为肉苁蓉重量的0.5%~2.0%。虽然随着蛋白酶用量的增加，水解度也渐渐增加，但用量超过2.0%时，水解度增加很少，因此，复合蛋白酶用量为肉苁蓉的0.5%~2.0%。上述步骤（4）中，酶解温度为35~60℃，酶解时间为2~4h。上述步骤（5）中，采用的纳滤膜浓缩，是以压力为推动力的膜分离技术之一。通过膜表面的微孔筛选可截留分子量为10000Da分子量的多肽，过滤去除小分子其他成分，从而实现多肽成分的浓缩和纯化效果，且具有无需加热，能耗低及操作压力低等优点。有益效果：本专利技术先用溶剂提取，有效除去肉苁蓉中会抑制酶活性的因子和各种小分子杂质，再使用两种蛋白酶共同酶解，使蛋白质酶解更加充分，酶解完成后，水提醇沉除去提取液中的多糖，提高了多肽的得率。本工艺操作简便，时间短，适合工业生产。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例1：（1）取1kg肉苁蓉，将其粉碎；（2）用4kg乙醇于70℃提取1h，过滤，将滤渣烘干；（3）向滤渣中加入8kg水，于90℃提取2次，每次1h，滤过合并滤液；（4）用1mol/LNaOH溶液调节步骤（3）得到的滤液的pH值至6.5；（5）加入4g菠萝蛋白酶和2gAS1398中性蛋白酶，于35℃恒温搅拌酶解4h，得到酶解液；（6）将步骤（5）得到的酶解液于90℃水浴10min使酶灭活，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液减压浓缩至浸膏；（7）向步骤（6）得到的浸膏中加入9倍重量的95%乙醇，静置沉淀，除去多糖沉淀；（8）将滤液在70℃，0.02Mpa的条件下浓缩至干，得到肉苁蓉多肽提取物，得率为1.254%。多肽含量测定多肽含量测定采用分光光度法，使用紫外分光光度计，分析方法是首先绘制对照品的吸收标准曲线，将待测的样品稀释至一定浓度，测定其吸光度，利用标准曲线计算得到多肽的含量。标准曲线制备：精密称取酪氨酸对照品适量，制成浓度为5mg/ml的对照品贮备液。取上述对照品贮备液分别置于5个10ml的量瓶中，加5%TCA制成浓度分别为0.0mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的酪氨酸标准溶液。然后分别取6.0ml标准溶液，加入4.0ml双缩脲试剂（1%硫酸铜溶液+10%NaOH溶液），于漩涡混合仪上混合均匀，静置10min，2000r/min离心10min，取上清液于238nm下测定OD值（以第一管做空白对照）。以多肽的浓度为横坐标X(mg/ml)，OD值为纵坐标Y，制作标准曲线。得回归方程为Y＝0.0297X+0.0257，R2＝0.9996。多肽含量的测定：按照以上方法测定待测溶液中多肽吸光度A，由回归方程即可求得质量浓度。取待测肉苁蓉多肽提取物，制成浓度为0.2mg/ml溶液。取样品溶液1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算得到样品中的多肽含量为62.13%。实施例2：（1）取1kg肉苁蓉，将其粉碎；（2）用5kg乙酸乙酯于50℃提取1h，过滤，将滤渣烘干；（3）向滤渣中加入10kg水，于90℃提取2次，每次1h，滤过合并滤液；（4）用1mol/LNaOH溶液调节步骤（3）得到的滤液的pH值至7.5；（5）加入6g菠萝蛋白酶和6gAS1398中性蛋白酶，于60℃恒温搅拌酶解2h，得到酶解液；（6）将步骤（5）得到的酶解液于90℃水浴10min使酶灭活，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液减压本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肉苁蓉多肽的制备方法及用途，其特征在于，包括以下步骤：（1）取肉苁蓉，将其粉碎，用一定量的溶剂在适宜温度下提取1h，过滤，将滤渣烘干；（2）向滤渣中加入一定量的水，在一定温度下提取2次，每次1h，滤过合并滤液；（3）用一定浓度的碱溶液调节步骤（3）得到的滤液的pH值；（4）向滤液中加入一定量的复合蛋白酶，在适宜温度下恒温搅拌酶解，得到酶解液；（5）将酶解液置于90℃水浴灭活10min，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液减压浓缩至浸膏；（6）向浸膏中加入9倍重量的95%乙醇，静置沉淀，除去多糖沉淀；（7）将滤液浓缩，烘干，得到肉苁蓉多肽提取物。

【技术特征摘要】
1.一种肉苁蓉多肽的制备方法及用途，其特征在于，包括以下步骤：（1）取肉苁蓉，将其粉碎，用一定量的溶剂在适宜温度下提取1h，过滤，将滤渣烘干；（2）向滤渣中加入一定量的水，在一定温度下提取2次，每次1h，滤过合并滤液；（3）用一定浓度的碱溶液调节步骤（3）得到的滤液的pH值；（4）向滤液中加入一定量的复合蛋白酶，在适宜温度下恒温搅拌酶解，得到酶解液；（5）将酶解液置于90℃水浴灭活10min，用截留分子量为10000Da的纳滤膜过滤，滤液减压浓缩至浸膏；（6）向浸膏中加入9倍重量的95%乙醇，静置沉淀，除去多糖沉淀；（7）将滤液浓缩，烘干，得到肉苁蓉多肽提取物。2.根据权利要求1所述一种肉苁蓉多肽的制备方法及用途，其特征在于：步骤（1）中所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚中的一种；所述溶剂与肉苁蓉的重量比为（4~8）:1；所述提取温度为40~90℃。3.根据权利要求1所述一种肉苁蓉多肽的制备方法及用途，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏元刚，杨永安，朱灵，赵佳炜，钟慧，徐玉凌，
申请(专利权)人：亿利耐雀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32