TMB双组份显色液及具有其的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供的一种TMB双组份显色液，包括TMB储液以及TMB底物缓冲液，所述TMB储液的溶剂为水；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.18～0.22g，柠檬酸1.52～2.28g，甘油40～60mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.18～0.22g，维生素C 0.80～1.20g。TMB储液以TMB的盐酸盐形成作为显色剂，配置而成的TMB储液能够以水溶液的形式存在。维生素C能够提高TMB的稳定性，在将TMB储液与TMB底物缓冲液混合室容易混合均匀，降低批次间差异；维生素C提高TMB的稳定性，确保混合后有效显色成分含量，提高了显色过程中的灵敏度。

TMB double component chromogenic solution and its kit

The invention provides a TMB two-component color liquid, including TMB liquid storage and TMB substrate buffer, the TMB liquid solvent is water; each 1000mL of the TMB reservoir containing two sodium citrate EDTA 0.18 ~ 0.22g, 1.52 ~ 2.28g, 40 ~ four 60mL glycerol and methyl diphenyl amine acid salt 0.18 ~ 0.22g, 0.80 ~ 1.20g vitamin C. The TMB reservoir is formed as a chromogenic agent with the formation of TMB hydrochloride, and the configuration of TMB liquid can be in the form of aqueous solution. Vitamin C can improve the stability of TMB. In the mixing chamber of TMB buffer and TMB substrate buffer, it is easy to mix evenly, reduce the difference between batches. Vitamin C improves the stability of TMB, ensures the effective color component content after mixing, and improves the sensitivity in color rendering process.

【技术实现步骤摘要】
TMB双组份显色液及具有其的试剂盒
本专利技术涉及酶联免疫法，特别是涉及一种TMB双组份显色液及具有其的试剂盒。
技术介绍
酶联免疫吸附检测方法(ELISA)具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点。ELISA虽然有多种，但是各种方法都离不开酶结合物和显色剂。在ELISA试剂中应用最广泛的酶是辣根过氧化物酶(HRP)，相应的显色剂最为常用的是3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-TetramethylBenzidine，TMB)，显色后产生蓝色物质，加入终止液终止显色反应，溶液从蓝色变为黄色，颜色强度与抗体含量呈正比。检测过程中，用酶标仪在450nm/630nm波长进行读数，记录结果，根据所得的吸光度值数据，与对照品进行比较，从而判断待测样本中抗体的水平。TMB具有高效、无毒、不致癌、稳定性佳等特点，为ELISA检测中常用的显色底物。ELISA试剂盒有单组份TMB显色液和双组份TMB显色液。单组份TMB显色液稳定性差，保存时间短，大部分保存时间在3～6个月，且显色背景高，均一性不好。双组份TMB显色液将过氧化物与TMB分开两瓶，分别作为TMB底物缓冲液和TMB储液，具有稳定、灵敏的特点。但是TMB常用有机溶剂溶解，一方面使用时安全性低，容易刺激皮肤，另一方面TMB底物缓冲液与TMB储液混合时容易混合不均，造成批量差异及降低灵敏度。
技术实现思路
基于此，有必要针对传统地双组份TMB显色液安全性低，易混合不均匀，降低反应灵敏度的问题，提供一种TMB双组份显色液及具有其的试剂盒。本专利技术提供的一种TMB双组份显色液，所述显色液包括TMB储液以及TMB底物缓冲液，所述TMB储液的溶剂为水；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.18～0.22g，柠檬酸1.52～2.28g，甘油40～60mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.18～0.22g，维生素C0.80～1.20g。在其中的一个实施例中，所述TMB底物缓冲液的溶剂为水；每1000mL所述TMB底物缓冲液含有过氧化物0.48～0.72g，柠檬酸7.52～11.28g，十二水磷酸氢二钠14.88～22.32g。在其中的一个实施例中，所述过氧化物为过氧化脲。在其中的一个实施例中，每1000mL所述TMB底物缓冲液含有过氧化物0.60g，柠檬酸9.40g，十二水磷酸氢二钠18.60g；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.20g，柠檬酸1.90g，甘油50mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.20g，维生素C1.0g。在其中的一个实施例中，所述TMB底物缓冲液以及所述TMB储液的溶剂为双蒸水。在其中的一个实施例中，使用时所述TMB底物缓冲液与所述TMB储液的混合比为1:0.9～0.9:1。在其中的一个实施例中，使用时所述TMB底物缓冲液与所述TMB储液的混合比为1:1。在其中的一个实施例中，所述TMB储液的pH为1.5～2.5。在其中的一个实施例中，所述TMB底物缓冲液与所述TMB储液混合后的pH为3.5～4.5。本专利技术还提供一种酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的显色液。上述TMB双组份显色液，TMB储液以TMB的盐酸盐形成作为显色剂，配置而成的TMB储液能够以水溶液的形式存在。维生素C能够提高TMB的稳定性，在将TMB储液与TMB底物缓冲液混合室容易混合均匀，降低批次间差异；进一步的，维生素C提高TMB的稳定性，确保混合后有效显色成分含量，并且维生素C自身不会对检测造成影响，提高了显色过程中的灵敏度。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例，对本专利技术的TMB双组份显色液及具有其的试剂盒进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供了一种TMB双组份显色液，显色液包括TMB储液以及TMB底物缓冲液。其中，TMB储液的溶剂为水，每1000mLTMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.18～0.22g，柠檬酸1.52～2.28g，甘油40～60mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.18～0.22g，维生素C0.80～1.20g。TMB储液以TMB的盐酸盐形成作为显色剂，配置而成的TMB储液能够以水性溶液的形式存在。维生素C能够提高TMB的稳定性，在将TMB储液与TMB底物缓冲液混合室容易混合均匀，降低批次间差异；进一步的，维生素C提高TMB的稳定性，确保混合后有效显色成分含量，并且维生素C自身不会对检测造成影响，提高了显色过程中的灵敏度。进一步地，通过添加维生素C以及乙二胺四乙酸二钠，能够对添加终止液后TMB具有强稳定作用，从而延长读数时间，克服现有的读数时间过晚结果不准确的缺陷，从而能够提高同批次检测的样本量。可选地，每1000mLTMB底物缓冲液含有过氧化物0.48～0.72g，柠檬酸7.52～11.28g，十二水磷酸氢二钠14.88～22.32g。TMB底物缓冲液也是水性溶液，进一步使TMB储液与TMB底物缓冲液更易混合均匀，避免了因混合不均匀导致批次间差异。作为一种可选实施方式，所述过氧化物为过氧化脲。过氧化脲活性氧含量高，在水中的溶解度大，水溶液pH值近中性，稳定性好，能够提高TMB底物缓冲液的储存期限，并且上述浓度的过氧化脲在酶的作用下稳定释放O2与TMB反应，提高检测的稳定性。作为一种可选实施方式，每1000mL所述TMB底物缓冲液含有过氧化物0.60g，柠檬酸9.40g，十二水磷酸氢二钠18.60g；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.20g，柠檬酸1.90g，甘油50mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.20g，维生素C1.0g。作为一种可选实施方式，TMB底物缓冲液以及TMB储液的溶剂为双蒸水。双蒸水中除去了水中溶解的氧气，能够提高TMB双组份显色液的检测的准确度。作为一种可选实施方式，使用时TMB底物缓冲液与TMB储液的混合比为1:0.9～0.9:1。本专利技术的TMB底物缓冲液与TMB储液的混合比在该范围内均能得到较好的满足测定精度的测试结果。进一步可选地，使用时TMB底物缓冲液与TMB储液的混合比为1:1。通过上述TMB底物缓冲液以TMB储液的配方，使使用时TMB底物缓冲液与TMB储液的混合比为1:1，等体积混合即可，能够避免分别量取不同体积的TMB底物缓冲液和TMB储液容易造成混淆，从而减少混合二者时产生误操作的可能性。作为一种可选实施方式，TMB储液的pH为1.5～2.5，使TMB储液的pH为1.5～2.5，能够使TMB在维生素C的作用下进一步提高其稳定性，提高TMB储液的保存期限。更优地，TMB储液的pH为2。作为一种可选实施方式，TMB底物缓冲液与TMB储液混合后的pH为3.5～4.5，使混合后的显色液保持pH为3.5～4.5，能够使混合后的显色液继续在维生素C以及乙二胺四乙酸二钠的作用下保持稳定，提高混合后显色液的灵敏性。更优地，TMB底物缓冲液与TMB储液混合后的pH为4。本专利技术的第二大方面提供的一种酶联免疫试剂盒，试剂盒包括如上所述的显色液。由于上述显色液具有上述技术效果，具有上述显色液的试剂盒也应具有同样的技术效果，在此不再详细介绍。以下通过对比实验进一步验证本专利技术提供的显色液的效果。实施例1称取乙二胺四乙酸二钠0.20g本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种TMB双组份显色液，其特征在于，所述显色液包括TMB储液以及TMB底物缓冲液，所述TMB储液的溶剂为水；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.18～0.22g，柠檬酸1.52～2.28g，甘油40～60mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.18～0.22g，维生素C0.80～1.20g。

【技术特征摘要】
1.一种TMB双组份显色液，其特征在于，所述显色液包括TMB储液以及TMB底物缓冲液，所述TMB储液的溶剂为水；每1000mL所述TMB储液含有乙二胺四乙酸二钠0.18～0.22g，柠檬酸1.52～2.28g，甘油40～60mL，四甲基联苯胺盐酸盐0.18～0.22g，维生素C0.80～1.20g。2.根据权利要求1所述的TMB双组份显色液，其特征在于，所述TMB底物缓冲液的溶剂为水；每1000mL所述TMB底物缓冲液含有过氧化物0.48～0.72g，柠檬酸7.52～11.28g，十二水磷酸氢二钠14.88～22.32g。3.根据权利要求2所述的TMB双组份显色液，其特征在于，所述过氧化物为过氧化脲。4.根据权利要求3所述的TMB双组份显色液，其特征在于，每1000mL所述TMB底物缓冲液含有过氧化物0.60g，柠檬酸9.40g，十二水磷酸氢二钠18.60g；每1000mL所述TM...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆鹏杰，王华丽，陈霞，赵云峰，李敬光，蒋双勤，李湖中，
申请(专利权)人：国家食品安全风险评估中心，中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京,11