【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，尤其涉及一种ec半抗原及其制备方法、人工抗原、酶联免疫试剂盒与检测方法。
技术介绍
1、酒醅、酒糟主要由高粱、玉米、稻谷、小麦等混合而成，是酒类产品发酵和生产过程中产生的副产物。近年来，随着酒类行业的蓬勃发展，这类副产品的产量也相应增加。由于其营养价值高、产量大、价格相对低廉，被广泛应用于动物饲料、工农业生产等多种领域。但是，由于酒类产品生产过程中的原料多样性、生产工艺特性等，易产生氨基甲酸乙酯污染，从而造成一定健康危害和经济损失。
2、氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,ec)又称尿烷(urethane)，化学式为c3h7no2(cas号为no.51-79-6)，相对分子质量约为89.09，无色无味，广泛存在于发酵食品(如酱油、腐乳、泡菜等)和酒类中。ec易溶解于水和醇类溶剂，沸点182℃～184℃，熔点48℃～50℃，常温常压下较稳定。ec有多种生成途径，易产生于食品发酵和贮藏过程中，主要由氨甲酰类化合物(尿素、瓜氨酸、氨甲酰磷酸、焦碳酸二乙酯等)和乙醇反应形成。此外，氰化物也是ec合成的重要前体物质。历史上ec曾被用于麻醉剂，治疗肿瘤、止痛和镇静药物的共溶剂等，但自1943年发现其具有潜在的致癌性起，关于其危害的研究陆续开展进行，多项研究表明ec具有致癌、致畸和致突变作用。2007年，ec被国际癌症研究所(international agencyforresearch on cancer，iarc)将其等级由“group 2b”提升到“group 2a”类，属于“很可能对人类致
3、目前，检测食品和饲料中的氨基甲酸乙酯的传统方法主要包括气相色谱-质谱法(gc-ms)、高效液相色谱法(hplc)和超高效液相色谱-串联质谱检测法(hplc-ms/ms)。上述仪器检测方法虽然具有较好的重复性和准确度，但是操作过程复杂，需要较为昂贵的检测设备，并且对检测人员的专业操作技能有一定要求，不适用于大样品量的现场快速检测。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种氨基甲酸乙酯半抗原、人工抗原及其应用，高灵敏度的检测氨基甲酸乙酯，快速、简便。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、一种氨基甲酸乙酯半抗原，所述氨基甲酸乙酯半抗原的结构如式(1)所示：
4、
5、本专利技术的另一目的在于提供所述氨基甲酸乙酯半抗原的制备方法，包括如下步骤：
6、将溴甲酸乙酯、2-(2-萘基)-2-氨基乙酸、氢氧化钠在酸性溶液中混合，进行取代反应。
7、优选的，所述溴甲酸乙酯、氢氧化钠与2-(2-萘基)-2-氨基乙酸的摩尔比为(1.5-2.5):1:(1.5-2.5)。
8、本专利技术的另一目的在于提供一种氨基甲酸乙酯人工抗原，由所述氨基甲酸乙酯半抗原与载体蛋白经羧基偶联制得。
9、优选的，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、谷胱甘肽s转移酶或多价抗原肽中的任意一种。
10、本专利技术的另一目的在于提供一种氨基甲酸乙酯特异性抗体的制备方法，用所述氨基甲酸乙酯人工抗原免疫动物，使机体产生特异性针对氨基甲酸乙酯的抗体。
11、本专利技术的另一目的在于提供所述半抗原或所述人工抗原或所述氨基甲酸乙酯特异性抗体的制备方法制备的抗体在检测氨基甲酸乙酯中的应用。
12、本专利技术的另一目的在于提供一种氨基甲酸乙酯检测试剂盒，包括经所述氨基甲酸乙酯特异性抗体的制备方法制备的氨基甲酸乙酯特异性抗体，包被所述人工抗原的酶标版。
13、优选的，所述制备氨基甲酸乙酯特异性抗体的人工抗原偶联的载体蛋白为第一载体蛋白，所述酶标版包被的人工抗原偶联的载体蛋白为第二载体蛋白，所述第一载体蛋白与第二载体蛋白种类不同。
14、优选的，所述氨基甲酸乙酯检测试剂盒还包括酶标记物抗体工作液、氨基甲酸乙酯标准品工作液、样品稀释液、底物显色液。
15、相对于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
16、本专利技术提供了一种氨基甲酸乙酯半抗原，本专利技术的氨基甲酸乙酯半抗原在最大程度地保留了氨基甲酸乙酯官能团结构特征、不影响其本身的抗原决定簇结构的同时，还能够增强其与大分子载体蛋白偶联的能力。本专利技术的氨基甲酸乙酯半抗原独特的结构可避免大分子载体蛋白对其产生屏蔽效应，与载体蛋白偶联后能够使抗原决定簇完全外露，从而产生良好的免疫原性。利用本专利技术所述的氨基甲酸乙酯半抗原制备而成的氨基甲酸乙酯试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。
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1.一种氨基甲酸乙酯半抗原，其特征在于，所述氨基甲酸乙酯半抗原的结构如式(1)所示：
2.权利要求1所述的氨基甲酸乙酯半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的氨基甲酸乙酯半抗原的制备方法，其特征在于，所述溴甲酸乙酯、氢氧化钠与2-(2-萘基)-2-氨基乙酸的摩尔比为(1.5-2.5):1:(1.5-2.5)。
4.一种氨基甲酸乙酯人工抗原，其特征在于，权利要求1所述氨基甲酸乙酯半抗原或权利要求2或3所述制备方法获得的氨基甲酸乙酯半抗原，与载体蛋白经羧基偶联制得。
5.根据权利要求4所述的氨基甲酸乙酯人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、谷胱甘肽S转移酶或多价抗原肽中的任意一种。
6.一种氨基甲酸乙酯特异性抗体的制备方法，其特征在于，用权利要求4或5的氨基甲酸乙酯人工抗原免疫动物，使机体产生特异性针对氨基甲酸乙酯的抗体。
7.权利要求1所述半抗原或权利要求2或3所述方法制备的半抗原或权利要求4或5所述人工抗原或权利
8.一种氨基甲酸乙酯检测试剂盒，其特征在于，包括经权利要求6所述方法制备的氨基甲酸乙酯特异性抗体，包被权利要求4或5所述人工抗原的酶标板。
9.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述制备氨基甲酸乙酯特异性抗体的人工抗原偶联的载体蛋白为第一载体蛋白，所述酶标版包被的人工抗原偶联的载体蛋白为第二载体蛋白，所述第一载体蛋白与第二载体蛋白种类不同。
10.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，还包括酶标记物抗体工作液、氨基甲酸乙酯标准品工作液、样品稀释液、底物显色液。
...【技术特征摘要】
1.一种氨基甲酸乙酯半抗原，其特征在于，所述氨基甲酸乙酯半抗原的结构如式(1)所示：
2.权利要求1所述的氨基甲酸乙酯半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的氨基甲酸乙酯半抗原的制备方法，其特征在于，所述溴甲酸乙酯、氢氧化钠与2-(2-萘基)-2-氨基乙酸的摩尔比为(1.5-2.5):1:(1.5-2.5)。
4.一种氨基甲酸乙酯人工抗原，其特征在于，权利要求1所述氨基甲酸乙酯半抗原或权利要求2或3所述制备方法获得的氨基甲酸乙酯半抗原，与载体蛋白经羧基偶联制得。
5.根据权利要求4所述的氨基甲酸乙酯人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、谷胱甘肽s转移酶或多价抗原肽中的任意一种。
6.一种氨基甲酸乙酯特异性抗体的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王紫菲，沈益忠，骆鹏杰，刘卿，王秋曦，吴永宁，
申请(专利权)人：国家食品安全风险评估中心，
类型：发明
国别省市：
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