【技术实现步骤摘要】
本申请属于化学工程领域，涉及一种单次柱层析分离纯化橄榄苦苷的方法。
技术介绍
1、橄榄苦苷，是一种天然植物提取物，主要来源油橄榄树叶中。橄榄苦苷是一种无毒的具有天然裂环烯醚萜苷骨架的多酚化合物。研究表明橄榄苦苷具有抗炎，抗真菌，抗病毒，抗氧化，以及抗癌和降血糖等多种作用。其抗氧化能力能减轻低密度脂蛋白的氧化程度，预防冠心病，动脉粥样硬化的发生；还能够保持皮肤细胞的生存力促进胶元蛋白的新陈代谢-促进胶元蛋白合成。目前逐渐应用于医药、保健食品、化妆品等行业且应用前景广阔。
2、目前橄榄苦苷的提取纯化方法有大孔吸附树脂法、柱层析法、重结晶。但需要两种或两种以上的纯化方法结合使用，才能获得纯度较高的橄榄苦苷，工艺较为繁琐复杂。而且纯度仍很难达到90％，并且收率较低，不适合工业化生产。
3、目前需要一种效率高、工艺相对简单的分离纯化橄榄苦苷的方法，且能够保证提取的橄榄苦苷纯度高，收率也高的效果。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，提供了一种单次柱层析分离纯化橄榄苦苷的方法。该方法只需要一次柱层析可获得橄榄苦苷纯度90％以上，收率(橄榄苦苷/橄榄叶粉末)达25-32％。
2、本申请具体的技术方案如下：
3、本申请提供了一种单次柱层析分离纯化橄榄苦苷的方法，包括：
4、步骤一、提取：将橄榄叶粉末装入到无纺布茶叶包，浸泡、提取，获得提取液；
5、步骤二、制备浸膏：将提取液减压抽滤后进行旋转蒸发，获得残留液，控干至含水量小于或
6、步骤三、拌样：将浸膏溶解后加入硅胶，旋转蒸发除去溶剂；
7、步骤四、装柱：将硅胶装入层析柱中；
8、步骤五、洗脱：用洗脱剂对层析柱进行梯度洗脱；
9、步骤六、收集：收集hplc含量大于90％的层析液，获得收集液；
10、步骤七、浓缩：将收集液合并、旋转蒸发，获得浓缩后的残留液，干燥，获得橄榄苦苷；
11、步骤八、回收溶剂：将旋转蒸发后收集的液体加入一定量的去离子水后，进行分液、干燥、常压蒸馏。
12、可选的，步骤一中，浸泡溶液为浓度75-85％甲醇水溶液或乙醇水溶液；提取方法包括超声提取。
13、可选的，加入的甲醇水溶液或乙醇水溶液与橄榄叶粉末质量的体积质量比(ml/g)为(20-30)：1；
14、可选的，超声提取条件：超声频率为50-100w，温度为30-50℃，提取0.5-1h。
15、可选的，步骤二中，旋转蒸发的温度为30-50℃；并将残留液通过如下任一种方法进行控干：
16、(1)残留液用共沸带水溶剂进行共沸带水除去溶剂，然后油泵拉干；
17、(2)残留液在30-50℃下用隔膜泵或油泵旋转蒸发至干；
18、(3)将残留液中加入去离子水，残留液和去离子水体积比为1/2-1/5，进行冷冻干燥，干燥6-12h。
19、可选的，所使用的共沸带水溶剂为无水乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇、异丁醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、苯、甲苯、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种。
20、可选的，步骤三中，将浸膏用甲醇或乙醇溶解；30-50℃旋转蒸发。
21、可选的，所用甲醇或乙醇与浸膏体积比为(1-2)：1，所用硅胶为100-400目，硅胶添加重量为橄榄叶粉末重量的0.8-1.2倍。
22、可选的，步骤四装柱过程中，硅胶为300-400目硅胶，硅胶添加量为30-50倍橄榄叶粉末重量。
23、可选的，步骤四装柱过程中，层析柱直径与高度比为1/1.5-1/2.0，样品层与柱高比为1/30-1/60。
24、可选的，步骤五洗脱过程中的洗脱剂为乙酸乙酯、甲醇或乙醇、去离子水中的一种或多种的混合物；洗脱方法为梯度洗脱，洗脱剂的流动速度为5-100ml/min。
25、可选的，步骤八中加入的去离子水为收集得到的洗脱剂体积的15-30％，干燥剂为无水硫酸钠、无水硫酸镁、无水氯化钙。
26、本申请的有益效果包括但不限于：
27、1.本申请在分离纯化橄榄苦苷的过程中，通过对浸膏的干燥程度(含水量)进行控制(含水量不超过5％)，仅一次柱层析就实现了橄榄苦苷纯度达到90％以上，收率在25-32％范围内。当浸膏含水量超过5％时，后续产物的纯度和收率均有所降低。克服了现有技术中需要两种或两种以上的纯化方法结合使用，才能获得纯度较高的橄榄苦苷且纯度仍很难达到90％，并且收率较低的技术困难。
28、本领域技术人员可知晓的是，橄榄苦苷纯度达到90％以上是较为困难的，那怕是在此基础上提高0.1％也是很难达到的。本申请在保证橄榄苦苷纯度90％以上的同时还保证了相对较高的收率(30％左右)，且只需要一次柱层析可获得。达到了现有技术达不到的技术效果。
29、而通过控制浸膏的含水量在0-5％范围内这一技术手段来实现橄榄苦苷纯度和收率的提高是本领域技术人员所想不到的。
30、2.本申请只需要一次柱层析可获得纯度90％以上，收率(橄榄苦苷/橄榄叶粉末)为25-32％的橄榄苦苷，解决了现有提纯工艺复杂，收率低等问题；本方法工艺简单，成本低，适合用于工业化生产。
31、3.本申请柱层析使用的溶剂可回收重复利用。
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1.一种单次柱层析分离纯化橄榄苦苷的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一中，浸泡溶液为浓度75-85％甲醇水溶液或乙醇水溶液；提取方法包括超声提取。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，加入的甲醇水溶液或乙醇水溶液与橄榄叶粉末质量的体积质量比(mL/g)为(20-30)：1；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中，旋转蒸发的温度为30-50℃；并将残留液通过如下任一种方法进行控干：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所使用的共沸带水溶剂为无水乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇、异丁醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、苯、甲苯、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤三中，将浸膏用甲醇或乙醇溶解；30-50℃旋转蒸发。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所用甲醇或乙醇与浸膏体积质量比为(1-2)：1，所用硅胶为100-400目，硅胶添加重量为橄榄叶粉末重量的0.8-1.2倍。
8.根据权利要
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤五洗脱过程中的洗脱剂为乙酸乙酯、甲醇或乙醇、去离子水中的一种或多种的混合物；洗脱剂的流动速度为5-100mL/min。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法还包括步骤八：回收溶剂：将收集的洗脱剂中加入去离子水，分液、干燥、常压蒸馏，获得回收溶剂可重复利用；
...【技术特征摘要】
1.一种单次柱层析分离纯化橄榄苦苷的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一中，浸泡溶液为浓度75-85％甲醇水溶液或乙醇水溶液；提取方法包括超声提取。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，加入的甲醇水溶液或乙醇水溶液与橄榄叶粉末质量的体积质量比(ml/g)为(20-30)：1；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中，旋转蒸发的温度为30-50℃；并将残留液通过如下任一种方法进行控干：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所使用的共沸带水溶剂为无水乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇、异丁醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、苯、甲苯、正戊烷、正己烷、环己烷中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：梅华倩，张晔翔，亓丰伟，何秋琴，代洪雪，胡玥，
申请(专利权)人：山东花物堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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