一种PEG及PEG化药物的分析检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种PEG及PEG化药物的分析检测方法，使用液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱进行分析检测，将含有PEG及PEG化药物的待测物通过液相色谱分离，并建立TOF MS‑Swath连续可变窗口，分别设置TOF MS对应的碰撞能量和Swath对应的碰撞能量；通过设定连续可变的窗口使不同质荷比范围的带电离子依次进入碰撞室Q2，待测物经能量碰撞产生特异性碎片，通过对特异性碎片进行扫描分析对待测物进行检测。本发明专利技术建立一种可以同时兼顾母离子扫描和母离子分段进入碰撞室发生碰撞诱导解离获得特定碎片离子的技术方案，能够获得高分子聚合物前体离子在特定质荷比区间的分布，根据母离子和碎片离子同时完成PEG及PEG化药物的定性及定量分析。

A method for the analysis and detection of PEG and PEG drugs and its application

The invention discloses a method for analyzing and detecting PEG and PEG drug, using liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry analysis detection, containing PEG and PEG drug analyte separation by liquid chromatography, and the establishment of continuous variable window TOF MS Swath, collision energy corresponding to the collision energy Swath and TOF were set corresponding MS; by setting a continuously variable window charged ions of different mass range in order to enter the collision chamber Q2, analyte specific fragments by energy collision, scanning analysis of the analyte were detected by specific fragments of. The invention can establish a technical scheme of both parent ion scan and segmented into the parent ion collision chamber collision induced dissociation of specific fragment ions obtained, can obtain the polymer precursor ion in the specific mass distribution, according to the parent ion and fragment ions at the same time to complete the qualitative and quantitative analysis of PEG and PEG drug.

【技术实现步骤摘要】
一种PEG及PEG化药物的分析检测方法及其应用
本专利技术属于药物分析研究
，涉及到分析PEG及PEG化药物生物质谱方法。
技术介绍
近年来，为适应药物研发的需要，药物分析科学和技术得到了长足的发展。近年来，迅速发展的液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)为PEG化药物分析提供了可能的解决方案。同传统的免疫学、HPLC、比色法等相比，液相色谱串联质谱方法在准确度、精密度、选择性、灵敏度和定量动态范围等各方面均显示出较大优势。目前，对于PEG化小分子药物的质谱定量分析报道较少，其主要原因是PEG化的蛋白类药物可以采取蛋白质组学的方法选择酶解后的特征肽段进行定量分析；但对于PEG化小分子药物尚无有效的酶切手段将其水解为游离的药物分子。另外，PEG化药物的分子量分布范围较宽，即使相同聚合度的PEG分子量也不唯一，而基于MRM等扫描模式的LC-MS/MS手段只能对有限的和分子量确定的目标化合物进行定量分析，因此，对多组分多形态的高分子PEG化药物进行质谱分析存在着很大的挑战性。源内裂解技术在一级质谱中能给出丰富的离子碎片信息。利用解簇电压(DeclusteringPotential，DP)影响离子进入质谱的速度，锥孔的解簇电压越高，离子速度越快，离子损失越小，检测灵敏度越高。过高的锥孔电压会增加离子间的碰撞，引起源内裂解，产生碎片离子。这些碎片离子既可用于物质的定性，也可以用于MRM扫描模式同时监测母离子和碎片离子来实现定量分析。通过在离子源内加入较大能量解簇电压(DP)使PEG及PEG化药物发生源内裂解，生成特异性碎片离子，选择特异性的碎片离子进行监测，完成对PEG及PEG化药物的定量分析；但是，由于DP的能量较小，CIDinsource的碰撞效率有所限制，该方法并不适合某些结合能力较强的PEG化药物的分析，尤其是较难得到PEG化药物针对药物的特定碎片离子。当键合到小分子(<500)上的PEG分子量较大时(>10K)时,游离PEG与PEG化药物色谱行为非常接近，很难通过色谱分离，此时只是通过监测PEG特异性的碎片来完成PEG和PEG化药物的监测就不合适了；另外，由于DP的碰撞能量较小，该方法的灵敏度也有所限制。Massall技术能够在一定程度上提供PEG及PEG化药物的定量方法，但是由于Massall技术是使所有的带电粒子全部通过Q1进入碰撞室打碎成二级碎片，进入碰撞室的离子没有选择性，同时由于同一时刻进入碰撞室离子数目过多，会显著降低一级离子的裂解效率和传输效率，灵敏度和选择性均会受到限制，同时由于不能得到PEG或PEG化药物在不同质荷比范围内的色谱质谱峰响应分布情况，该方法应用于PEG或PEG化药物的定性分析能力有限。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，建立一种可以同时兼顾母离子扫描和母离子分段进入碰撞室发生碰撞诱导解离获得特定碎片离子的技术方案，能够获得高分子聚合物前体离子在特定质荷比区间的分布，根据母离子和碎片离子同时完成PEG及PEG化药物的定性及定量分析。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种PEG及PEG化药物的分析检测方法，使用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(LC-Q-Q-TOFMS)进行分析检测，将含有PEG及PEG化药物的待测物通过液相色谱分离，并建立TOFMS-Swath连续可变窗口，分别设置TOFMS对应的碰撞能量和Swath对应的碰撞能量；通过设定连续可变的窗口使不同质荷比范围的带电离子依次进入碰撞室Q2，待测物经能量碰撞产生特异性碎片，通过对特异性碎片进行扫描分析对待测物进行检测。进一步的，TOFMS对应的碰撞能量为10eV，Swath对应的碰撞能量为40eV。进一步的，Swath进行质荷比采集窗口的通道依次为500-600，600-700，700-800，800-900，900-1000，1000-1100，1100-1200，1200-1250。进一步的，选取的PEG特异性碎片离子为atm/z89.0611,133.0869,177.1102,221.1366,265.1622,309.1878,353.2108,397.2359，即2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个PEG单元。进一步的，待测物中检测目标为PEG550，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z500-700；待测物中检测目标为PEG750，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z400-800；待测物中检测目标为PEG2000，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-800；待测物中检测目标为PEG5000，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-800；待测物中检测目标为PEG2000-Dox，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-1000。一种PEG及PEG化阿霉素的分析检测方法，使用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱仪(LC-Q-Q-TOFMS)进行分析检测，将含有PEG及PEG化药物的待测物通过液相色谱分离，并建立TOFMS-Swath连续可变窗口，分别设置TOFMS对应的碰撞能量和Swath对应的碰撞能量；通过设定连续可变的窗口使不同质荷比范围的带电离子依次进入碰撞室Q2，待测物经能量碰撞产生特异性碎片，通过对特异性碎片进行扫描分析对待测物进行检测，其检测条件为：色谱条件为：高效液相色谱系统；色谱柱：300SBC18柱，150mm×4.6mmI.D.，5μm粒径；流动相：含体积百分数占0.1％甲酸的水和含体积百分数占0.1％甲酸的乙腈，梯度洗脱；柱温30～40℃；流速0.8～1.0ml/min；进样量50μl；质谱条件为：Q-Q-TOF型串联质谱仪，配有ESI离子化源和Analyst数据处理软件；离子源：ESI离子化源；正离子方式检测；离子喷射电压4500V；温度500℃；源内气体1：氮气压力50psi；气体2：氮气压力50psi；气帘气体：氮气压力25psi；TOFMS扫描模式，解簇电压(DP电压)：80V；碰撞能量(CE电压)：10eV；Swath扫描方式，解簇电压(DP电压)：80V；碰撞能量(CE电压)：40eV，CES15eV；Swath进行质荷比采集窗口的通道依次为500-600，600-700，700-800，800-900，900-1000，1000-1100，1100-1200，1200-1250。进一步的，选取的PEG特异性碎片离子atm/z89.0611,133.0869,177.1102,221.1366,265.1622,309.1878,353.2108,397.2359；阿霉素的特异性碎片离子atm/z321.0838，361.0785；PEG化阿霉素的特异性碎片离子atm/z365.0735。进一步的，测定生物样品中PEG及PEG化阿霉素在测定之前包括样品前处理和标准曲线制备步骤，取经由前处理后的上清液进行液相色谱-四极杆-飞行时间质谱分析，记录色谱图，将PEG、阿霉素和PEG化阿霉素峰面积代入标准曲线，求得PEG、阿霉素和PEG化阿霉素浓度。本研究首次提出了基于连续可变窗口采集技术的CIDIn-Quadrupole的LC-Q/Q/TOF串联质谱方法，利用四级杆飞行时间质谱(TripleTOF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：使用液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱进行分析检测，将含有PEG及PEG化药物的待测物通过液相色谱分离，并建立TOF MS‑Swath连续可变窗口，分别设置TOF MS对应的碰撞能量和 Swath对应的碰撞能量；通过设定连续可变的窗口使不同质荷比范围的带电离子依次进入碰撞室Q2，待测物经能量碰撞产生特异性碎片，通过对特异性碎片进行扫描分析对待测物进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：使用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱进行分析检测，将含有PEG及PEG化药物的待测物通过液相色谱分离，并建立TOFMS-Swath连续可变窗口，分别设置TOFMS对应的碰撞能量和Swath对应的碰撞能量；通过设定连续可变的窗口使不同质荷比范围的带电离子依次进入碰撞室Q2，待测物经能量碰撞产生特异性碎片，通过对特异性碎片进行扫描分析对待测物进行检测。2.根据权利要求1所述的PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：TOFMS对应的碰撞能量为10eV，Swath对应的碰撞能量为40eV。3.根据权利要求1所述的PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：Swath进行质荷比采集窗口的通道依次为500-600，600-700，700-800，800-900，900-1000，1000-1100，1100-1200，1200-1250。4.根据权利要求1所述的PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：选取的PEG特异性碎片离子为atm/z89.0611,133.0869,177.1102,221.1366,265.1622,309.1878,353.2108,397.2359，即2个，3个，4个，5个，6个，7个，8个，9个PEG单元。5.根据权利要求1所述的PEG及PEG化药物的分析检测方法，其特征在于：待测物中检测目标为PEG550，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z500-700；待测物中检测目标为PEG750，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z400-800；待测物中检测目标为PEG2000，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-800；待测物中检测目标为PEG5000，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-800；待测物中检测目标为PEG2000-Dox，其特定质荷比丰度最高的分布窗口为m/z600-1000。6.权利要求1所述PEG及PEG化药物的分析检测方法应用于生物样品中PEG及PEG化药物的检测。7.一种PEG及PEG化阿霉素的分析检测方法，其特征在于：使用液相色谱-四极杆-飞行时间质谱仪进行分析检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾景凯，尹磊，任天明，赵式樱，史美云，林文孩，景遐斌，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22