甲壳类水产品中4‑己基间苯二酚的HPLC‑MS/MS检测方法技术

本发明专利技术涉及化学物质检测技术领域，具体而言，涉及一种甲壳类水产品中4‑己基间苯二酚的HPLC‑MS/MS检测方法，包括：使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4‑己基间苯二酚，提取液旋转蒸发至近干后用二氯甲烷溶解，固相萃取柱净化，用流动相溶解，通过高效液相色谱质谱联用系统进行检测。本发明专利技术建立了合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法，确保分析测定时样品基质干扰最少；并对色谱质谱条件进行优化，最终确定了外标法定量。本方法的定量限为4μg/kg，在各个浓度的加标回收率均在70％以上。

【技术实现步骤摘要】
甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法
本专利技术涉及化学物质检测
，具体而言，涉及一种甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法。
技术介绍
南美白对虾(PenaeusvannameiBoone)，学名凡纳滨对虾。我国有很多地区养殖南美白对虾，其中杭州市南美白对虾养殖面积2013年为10.3万亩，2013年全市南美白对虾总产量达到3.4万吨，是杭州市最大宗、支柱性水产养殖产品之一。南美白对虾含有蛋白质、微量元素及生理活性等丰富营养物质，其特有呈味物质所产生的口味与人们的最佳味觉非常吻合，味道鲜美，但甲壳类极易黑变。其在捕获后，由于体内的多酚氧化酶(PPO)加速其一系列生化反应，在壳体上产生黑色素沉淀，即形成黑点。壳上的黑点严重影响外观，同时也制约着它的商品价值。多酚氧化酶天然地存在甲壳内和甲壳下面的组织中，这种酶在冷冻、冰贮和解冻期间仍然保持着活性。目前国内一般使用焦亚硫酸钠抑制其黑变，但是在使用过程中极易造成SO2超标，严重影响加工制品的质量和安全性。对于虾蟹等甲壳类黑变抑制剂，欧洲和美国使用4－己基间苯二酚(4-Hexylresorcinol，以下简称4-HR)复合物来作为抑制剂，其可有效的抑制海水甲壳类体内多酚氧化酶的活性，同时起到保鲜的效果，而且在允许使用的范围内被认为是一种对人体安全性的添加剂。4-己基间苯二酚美国辉瑞公司最早研发出主要成分为4-HR的、应用于虾类保鲜防黑变的产品“虾鲜宝”；我省也有企业已经在国内首先开始生产销售主要成份为4-HR的虾类防黑变保鲜剂。欧盟、美国等国家和地区对4-HR在虾肉中残留有限量规定，使用此标准因其检出限低可以有效的检出虾肉中低含量的4-HR，从而能有效控制虾产品质量和安全性。国内外报道检测4-HR检测方法的文献主要有高效液相色谱法和气相色谱法两种。查阅到Liquidchromatographicdeterminationoftheprocessingaid4-hexylresorcinolinshrimp(JOfAnalChem.1991Nov-Dec；74(6):1003-5)，Determinationof4-hexylresorcinolinshrimpbyliquidchromatographywithfluorescencedetection.(J.AOACInt.2000Jan-Feb；83(1):241-4)，Determinationof4-hexylresorcinolincrabmeat.(JAOACInt.1998Mar-Apr；81(2):488-91.)和高效液相色谱荧光检测法测定虾中的4-己基间苯二酚等文献。但以上方法都存在一定的不足。气相色谱(GC-FID)检出限不能完成满足标准的需要，液相色谱荧光检测法在检出限上可以满足要求，但是由于其定性的能力不足，所以在某种程度上存在着一定的缺陷。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法，所述的方法灵敏度和准确度稿，精密度好。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：本专利技术涉及一种甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法，包括：使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4-己基间苯二酚，提取液旋转蒸发至近干后用二氯甲烷溶解，固相萃取柱净化，用流动相溶解，通过高效液相色谱质谱联用系统进行检测。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术以液相色谱串联质谱为工具，系统的研究了4-HR的检测方法。高效液相色谱法稳定性高，重现性好，而且液相色谱仪在食品安全检测实验室已经普及。本专利技术建立了合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法，确保分析测定时样品基质干扰最少；并对色谱质谱条件进行优化，最终确定了外标法定量。本方法的定量限为4μg/kg，在各个浓度的加标回收率均在70％以上，完全可以满足GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定的4-HR在虾中1mg/kg的残留限量的要求。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为1.0μg/kg南美白对虾样品加标色谱图；图2为4.0μg/kg南美白对虾样品加标色谱图。具体实施方式本专利技术涉及一种甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法，包括：使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4-己基间苯二酚，提取液旋转蒸发至近干后用二氯甲烷溶解，固相萃取柱净化，用流动相溶解，通过高效液相色谱质谱联用系统进行检测。优选的，如上所述的方法，所述甲壳类水产品包括虾、蟹。优选的，如上所述的方法，所述乙腈和二氯甲烷的混合溶液中乙腈和二氯甲烷的体积比为7:(2～4)；更优选的，所述乙腈和二氯甲烷的混合溶液中乙腈和二氯甲烷的体积比为7:3；优选的，所述使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4-己基间苯二酚的具体步骤包括：将所述检测样品与乙腈和二氯甲烷的混合溶液按1g：9mL～11mL的比例进行混合，更优选1g：10mL；匀浆超声处理后离心，得到上清液；再重复上述步骤1次，合并提取液。优选的，如上所述的方法，所述固相萃取柱为氨基固相萃取柱；更优选的，所述氨基固相萃取柱由硅胶键合氨丙基得到。优选的，如上所述的方法，所述的氨基固相萃取柱在使用前用水溶性有机溶剂活化；更优选的，所述的水溶性有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲酸、丙酮、氨水甲醇溶液中的一种或多种；更优选的，所述水溶性有机溶剂选自甲醇和丙酮的混和溶液。优选的，如上所述的方法，所述的氨基固相萃取柱所用的洗脱液为非极性有机溶剂；更优选的，所述非极性有机溶剂为正己烷。优选的，如上所述的方法，所述高效液相色谱所用的色谱柱为C18液相色谱柱；更优选的，所述C18液相色谱柱的内径和长度为1.5mm～3.0mm×50mm～100mm；更优选的，所述C18液相色谱柱的内径和长度为2.1mm×75mm。优选的，如上所述的方法，所述C18液相色谱柱的柱温为35℃～40℃；柱温也可以选择36℃、37℃、38℃或39℃。优选的，如上所述的方法，进行所述高效液相色谱时，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱；流动相A为1.5～2.5mmol/L的乙酸铵水，流动相B为甲醇。优选的，如上所述的方法，所述梯度洗脱的程序为：0～3.5min时，流动相A5～15vt％，流动相B85～95vt％进行洗脱；3.5～3.6min时，逐渐增加流动相A的比例，减小流动相B的比例，至流动相A35～45vt％，流动相B55～65vt％后继续洗脱1.2～1.6min；优选的，0～3.5min时，流动相A10vt％，流动相B90vt％进行洗脱；3.5～3.6min时，逐渐增加流动相A的比例，减小流动相B的比例，至流动相A40vt％，流动相B60vt％后继续洗脱1.4min；优选的，流速为0.3～0.5mL/min，更优选0.4mL/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲壳类水产品中4‑己基间苯二酚的HPLC‑MS/MS检测方法，其特征在于，包括：使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4‑己基间苯二酚，提取液旋转蒸发至近干后用二氯甲烷溶解，固相萃取柱净化，用流动相溶解，通过高效液相色谱质谱联用系统进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种甲壳类水产品中4-己基间苯二酚的HPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，包括：使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4-己基间苯二酚，提取液旋转蒸发至近干后用二氯甲烷溶解，固相萃取柱净化，用流动相溶解，通过高效液相色谱质谱联用系统进行检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙腈和二氯甲烷的混合溶液中乙腈和二氯甲烷的体积比为7:(2～4)；优选的，所述使用乙腈和二氯甲烷的混合溶液提取待检测样品中残留的4-己基间苯二酚的具体步骤包括：将所述检测样品与乙腈和二氯甲烷的混合溶液按1g：9mL～11mL的比例进行混合，匀浆超声处理后离心，得到上清液；再重复上述步骤1次，合并提取液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相萃取柱为氨基固相萃取柱；优选的，所述氨基固相萃取柱由硅胶键合氨丙基得到。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的氨基固相萃取柱在使用前用水溶性有机溶剂活化；优选的，所述的水溶性有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈、甲酸、丙酮、氨水甲醇溶液中的一种或多种；优选的，所述水溶性有机溶剂选自甲醇和丙酮的混和溶液。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的氨基固相萃取柱所用的洗脱液为非极性有机溶剂；优选的，所述非极性有机溶剂为正己烷。6.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶素丹，郝云彬，阙斐，陈岭，冯文婕，
申请(专利权)人：浙江经贸职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33