一种羚羊角的检测方法技术

一种羚羊角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱‑质谱联用技术(HPLC‑MS)进行羚羊角检测的步骤，其中，以羚羊角对照药材为对照品，以m/z 860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对，该检测方法操作步骤简单，专属性强，准确度高，可重复性好，使得羚羊角在临床疗效和安全性等方面也更有保障。

A method for the detection of antelope horn

A detection method of antelope horn, which is characterized in that the detection methods include using high performance liquid chromatography mass spectrometry (HPLC MS) for detection steps, antelope horn, antelope horn to control medicine as control sample to m/z 860.8 + 0.5 (double charge) - 417 + 0.5 (single charge) and m/z860.8 (0.5 + 1082.5 + 0.5, double charge) (single charge) as the detection method of ion detection, simple operation, strong specificity, high accuracy, good repeatability, the antelope horn in clinical efficacy and safety aspects are more secure.

【技术实现步骤摘要】
一种羚羊角的检测方法
本专利技术涉及一种羚羊角的检测方法。
技术介绍
羚羊角为牛科动物赛加羚羊SaigatataricaLinnaeus的角，主要产地为新疆天山北伊犁，其具有平肝熄风、清肝明目、散血解毒之功效，但是现行检测羚羊角的方法存在缺陷：对羚羊角的性状进行观察的方法，该方法准确度非常低。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有羚羊角检测方法的缺点，提供了一种准确度高、可行性好、重现性好的羚羊角的检测方法。本专利技术提供一种羚羊角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行羚羊角检测的步骤，其中，以羚羊角对照药材为对照品，以m/z860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。优选地，上述检测方法中，所述高效液相色谱的条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，流动相A选自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，优选自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；流动相B选自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一种，优选为0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，进行梯度洗脱；更优选地，上述检测方法中，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A95％→80％，B5％→20％；25～40分钟，A80％→50％，B20％→50％；40～41分钟，A50％→1％，B50％→99％；41～45分钟，A1％→1％，B99％→99％。优选地，上述检测方法中，所述质谱采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测。优选地，上述检测方法包括将所述羚羊角进行酶解的步骤。更优选地，上述酶解包括向羚羊角中依次加入尿素，DTT，IAA和酶的步骤。更进一步优选地，上述酶解包括如下步骤：向羚羊角中加入尿素，再加DTT，60±5℃加热30±5min，冷却，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加碱稀释至10ml，加酶于37℃反应12h以上。优选地，上述检测方法中，所述酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一种，更优选胰蛋白酶。优选地，上述检测方法中，所述碱为碳酸氢铵(NH4HCO3)。优选地，上述检测方法包括如下步骤：(1)将羚羊角按所述的酶解的步骤制得供试品溶液；(2)取羚羊角对照药材按所述的酶解的步骤制得对照品溶液；(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱-质谱联用仪测定，以m/z860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。更优选地，上述检测方法包括如下步骤：(1)将羚羊角粉碎，取羚羊角粉末10mg，加8M尿素1ml，加入1M的DTT10μl，60℃加热30min，冷却，加入1M的IAA30μl，黑暗静置30min，加入浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液稀释至10ml，加入由浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液配制得到的浓度为1μg/μl的胰蛋白酶溶液20μl，37℃反应12h以上，得酶解溶液，取适量酶解溶液过0.22μm的滤膜，续滤液置进样瓶中，制得供试品溶液；(2)取羚羊角对照药材，按步骤(1)的方法制得对照品溶液；(3)照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)和质谱法(中国药典2010年版二部附录ⅨJ)，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪测定，其中，高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，色谱柱内径为2.1mm，长度为100mm，粒径1.8μm，柱温40℃，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A95％→80％，B5％→20％；25～40分钟，A80％→50％，B20％→50％；40～41分钟，A50％→1％，B50％→99％；41～45分钟，A1％→1％，B99％→99％；流速为0.3ml/min；质谱的条件为采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测，毛细管电压为4kV，锥孔电压为40V，除溶剂温度为450℃，除溶剂气体为600L/h，离子源温度为120℃，以m/z860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z860.8±0.5(双电荷)→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。本专利技术中对粉碎方法没有特别的限定，一般在碎断样品后，用电动粉碎机或研钵粉碎成细粉。本专利技术还提供上述羚羊角的检测方法在羚羊角药材鉴别中的应用。本专利技术的羚羊角的检测方法操作步骤简单，专属性强，准确度高，可重复性好，使得羚羊角在临床疗效和安全性等方面也更有保障。附图说明图1是实施例1羚羊角样品(A)和羚羊角对照药材(B)的色谱图。图2是羚羊角对照药材(A)、水牛角对照药材(B)、山羊角对照药材(C)、牛角对照药材(D)的EIC色谱图，检测离子为m/z860.8(双电荷)→417(单电荷)。图3是羚羊角对照药材(A)、水牛角对照药材(B)、山羊角对照药材(C)、牛角对照药材(D)的EIC色谱图，检测离子为m/z860.8(双电荷)→1082.5(单电荷)。图4是含0.5(mg/100ml)羚羊角对照药材的EIC色谱图，其中A的检测离子为860.8(双电荷)→417(单电荷)，B的检测离子为m/z860.8(双电荷)→1082.5(单电荷)。图5是含1.0(mg/100ml)羚羊角对照药材的EIC色谱图，其中A的检测离子为860.8(双电荷)→417(单电荷)，B的检测离子为m/z860.8(双电荷)→1082.5(单电荷)。图6是含1.5(mg/100ml)羚羊角对照药材的EIC色谱图，其中A的检测离子为860.8(双电荷)→417(单电荷)，B的检测离子为m/z860.8(双电荷)→1082.5(单电荷)。图7是本专利技术羚羊角检测方法重复性实验的EIC色谱图，检测离子为860.8(双电荷)→417(单电荷)。图8是本专利技术羚羊角检测方法重复性实验的EIC色谱图，检测离子为m/z860.8(双电荷)→1082.5(单电荷)。图9是本专利技术羚羊角检测方法在不同检测器下的色谱图，其中，A为四级杆-飞行时间质谱(Q-TOF)，B为离子阱质谱(Iontrap)，C为串联四级杆质谱(QQQ)。图10是对比例2羚羊角对照药材(A)和水牛角对照药材(B)的EIC色谱图，检测离子为m/z536.2825(双电荷)。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术进行详细说明。应当理解的是，此处实施例仅用于示例性对本专利技术进行说明，并不用于对本专利技术进行限制。实施例1(1)将羚羊角粉碎，取羚羊角粉末10mg，加8M尿素1ml，再加1M的DTT10μl，水浴60℃加热30min，放冷，加入1M的IAA30μl，黑暗静置30min，加入浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液稀释至10ml，加入由浓度为0.01g/ml的NH4HCO3溶液配制的浓度为1μg/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羚羊角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱‑质谱联用技术(HPLC‑MS)进行羚羊角检测的步骤，其中，以羚羊角对照药材为对照品，以m/z 860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z 860.8(双电荷)±0.5→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。

【技术特征摘要】
1.一种羚羊角的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行羚羊角检测的步骤，其中，以羚羊角对照药材为对照品，以m/z860.8±0.5(双电荷)→417±0.5(单电荷)和m/z860.8(双电荷)±0.5→1082.5±0.5(单电荷)作为检测离子对。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，流动相A选自甲酸、乙酸、甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，优选自0.1％(v/v)甲酸的水溶液或0.1％(v/v)乙酸的水溶液；流动相B选自乙腈、甲醇或甲酸的乙腈溶液中的至少一种，优选为0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，进行梯度洗脱；优选地，所述高效液相色谱的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以0.1％(v/v)甲酸的水溶液为流动相A，以0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱：0～25分钟，A95％→80％，B5％→20％；25～40分钟，A80％→50％，B20％→50％；40～41分钟，A50％→1％，B50％→99％；41～45分钟，A1％→1％，B99％→99％。3.根据权利要求1-2中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述质谱采用质谱检测器，电喷雾正离子模式(ESI+)，进行多反应监测。4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括将所述羚羊角进行酶解的步骤。5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述酶解包括向羚羊角中依次加入尿素，二硫苏糖醇(DTT)，碘乙酰胺(IAA)和酶的步骤；优选地，所述酶解包括如下步骤：向羚羊角中加入尿素，再加入DTT，60±5℃加热30±5min，冷却，加入IAA，黑暗中放置30±5min，加碱稀释至10ml，加酶于37℃反应12h以上。6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的至少一种，优选胰蛋白酶。7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述碱为碳酸氢铵(NH4HCO3)。8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏锋，程显隆，张倩倩，李明华，马双成，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11