一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保护剂制造技术

本发明专利技术公开了一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa‑1冻干保护剂，该冻干保护剂的组成为：50~60 g/L脱脂奶粉，20~30 g/L魔芋粉，30~40 g/L蔗糖，20~30 g/L谷氨酸钠，30~40g/L硫代硫酸钠，20~30 g/L微晶纤维素，10~20 g/LTris。与现有技术中的冻干保护剂相比，本发明专利技术针对特定的鼠伤寒沙门氏菌噬菌体（

【技术实现步骤摘要】
一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保护剂
本专利技术涉及一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(Salmonellatyphimuriumphage)ΦSa-1冻干保护剂，属于微生物发酵工业

技术介绍
鼠伤寒沙门氏菌具有广泛的宿主，是危害人类和动物的重要肠道致病菌，每年的感染量约占沙门氏菌感染量的1/5，造成了严重的经济损失。随着经济发展和人们对动物性食品安全问题广泛关注，噬菌体作为一种天然绿色、安全有效的抗生素替代品，具有广阔的应用前景。为此，申请人前期研究了一株具有鼠伤寒沙门氏菌防治效果的噬菌体ФSa-1，已于2017年4月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2017217，记载在专利CN107099511A，该噬菌体ФSa-1以鼠伤寒沙门氏菌为宿主菌，对小鼠抗伤寒沙门氏菌感染有良好的防治效果，具有较好的耐热性和pH耐受性，研发出的具有优异性能的噬菌体ФSa-1对防治鼠伤寒沙门氏菌具有十分重要的意义。该噬菌体ΦSa-1可以被制备成饲料添加剂、饮用水添加剂、饲料、饮用水、清洁剂或消毒剂各种形式的产品，能够在较广的温度范围和pH条件下对鼠伤寒沙门氏菌进行杀灭。然而，如何将该噬菌体ФSa-1进行有效保存一直是困扰该申请人的主要问题。目前冷冻干燥是保持微生物、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个普遍的方法。但是在冷冻干燥过程中，冷冻和干燥不可避免地会造成部分微生物细胞的损伤、死亡，及某些蛋白分子的钝化。一直以来我国生产的噬菌体制剂以液体形式保存，效价低，活力较差，噬菌体制剂几乎全部依赖于进口，成本也随之提高。冻干保护剂的应用使噬菌体悬液形成干粉方便运输、销售和使用，具有重大的实际应用价值。保护剂又称稳定剂，是指冷冻干燥过程中除抗原物质以外的添加物，是为保护或降低在冷冻干燥和保存过程中微生物或蛋白质的生物活性与抗原活性的损失、变化程度，加稀释液后迅速溶解，最大程度恢复原有性状的一类物质。现有技术中公开了多种噬菌体保护剂，但并非每种保护剂对所有微生物都有保护作用，由于微生物结构和大小的差异，不同的微生物即使采用相同保护剂所取得的效果也不同。如CN105950567A公开了一种噬菌体的冻干粉胶囊保存方法，其中的噬菌体保存保护剂，包括以下组分：脱脂奶粉5-12份、聚乙二醇2-8份、藻蛋白粉0.2-0.6份、谷氨酸钠0.3-0.8份、羧甲基纤维素0.3-0.5份、膨润土0.08-0.15、氢氧化铝胶0.03-0.18份、棉子糖0.3-1.2份、硫酸镁0.1-0.6份、氯化钙0.6-1.2份、硫酸钠0.3-0.8份、甘露醇0.5-1.2份、磷酸氢二钾0.03-0.2份、磷酸二氢钠0.05-0.3份、甘油0.02-0.08份、二甲基亚砜0.01-0.04份和水100份。CN105950475A公开了一种噬菌体的冻干保存方法，其中的噬菌体保存保护剂，包括以下组分：脱脂乳6-18份、硅藻土0.3-0.8份、糖醇2-5份、DEAE-葡聚糖0.8-1.5份、阿拉伯胶0.01-0.16份、牛血清白蛋白0.7-1.2份、麦芽糖糊精0.05-0.3份、蜂蜜0.01-0.08份、棉子糖0.8-1.6份、磷酸铝0.03-0.06份、氯化钠0.01-0.04份、硫酸镁0.3-0.7份、氯化钙0.6-1.2份、甘油1-3份、阿拉西A0.05-0.12份和水100份。CN106065399公开了一种噬菌体保存保护剂，包括以下组分：脱脂奶粉5-12份、蛋白胨3-5份、蔗糖0.5-1.2份、海藻糖0.8-1.5份、香菇多糖1-1.6份、硫酸镁0.2-0.5份、氯化钙0.6-1.2份、硫酸钠0.6-0.8份、明胶0.05-0.2份、甘露醇0.8-1.2份、聚乙烯吡咯烷酮0.1-0.3份等。然而针对特定的噬菌体ФSa-1(该噬菌体具有呈正多面体的头部结构，没有尾部，头部直径约65nm)，上述噬菌体保护剂仍然无法满足冻干保护后噬菌体ФSa-1仍具有较好的耐热性和pH耐受性特性的要求。因此，亟需一种针对该噬菌体的新型保护方法或保护剂，使用该保护方法或保护剂后，该噬菌体ФSa-1能够最大程度的存活，同时，具有其较好的耐热性和pH耐受性，并且还能在饲料领域、饮用水领域等具有较广泛的应用前景。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术人前期经过试验研究和分析，发现现有技术中的冻干保护剂无法实现噬菌体ФSa-1的有效冻干保护；针对此，本专利技术人进一步对该噬菌体ФSa-1进行研究分析，发现该噬菌体ФSa-1头部的衣壳蛋白和其包裹的核酸与现有的噬菌体有一定的差异性，导致其理化性质与现有的噬菌体并不相同，这说明所需要冻干保护的噬菌体ФSa-1具有一定的特殊性；针对该噬菌体ФSa-1的自身特性，本专利技术经过一系列的研究和分析得到一种适合噬菌体ФSa-1的冻干保护剂及其制备方法。具体的，本专利技术公开了如下所述的技术方案：本专利技术的第一个方面，提供一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保护剂，该冻干保护剂是由以下质量份的原料组成：脱脂奶粉50～60份，魔芋粉20～30份，蔗糖30～40份，谷氨酸钠20～30份，硫代硫酸钠30～40份，微晶纤维素20～30份，Tris10～20份。本专利技术的第二个方面，提供了一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保护剂的制备方法，所述方法包括：将脱脂奶粉、魔芋粉、谷氨酸钠、硫代硫酸钠、微晶纤维素和Tris按照设定质量比例混合均匀，即可得到该冻干保护剂。本专利技术的第三个方面，提供上述冻干保护剂在鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保存中的应用。本专利技术的第四个方面，提供一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1的保存方法，所述方法包括使用上述冻干保护剂。本专利技术还保护通过上述保存方法制备得到的鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1产品。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有如下技术效果：(1)与现有技术中的冻干保护剂相比，本专利技术针对特定的鼠伤寒沙门氏菌噬菌体(Salmonellatyphimuriumphage)ΦSa-1筛选优化得到使得冻干粉中的噬菌体存活率较高的冻干保护剂，存活率高达75％。(2)与现有技术中的冻干保护剂相比，冻干保护剂优化配方保护的噬菌体冻干粉对pH和热有更强的耐受性能。(3)本专利技术的噬菌体ФSa-1冻干粉可以被制备成饲料添加剂、饮用水添加剂、饲料、饮用水、清洁剂或消毒剂各种形式的产品，能够在较广的温度范围和pH条件下对鼠伤寒沙门氏菌进行杀灭。(4)本专利技术的噬菌体ФSa-1冻干粉保存时间极大的延长，且利于运输。附图说明构成本专利技术的一部分说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1：噬菌体ФSa-1液体稳定性试验。图2：噬菌体ФSa-1冻干粉贮存稳定性试验。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa‑1冻干保护剂，其特征是，该冻干保护剂是由以下质量份的原料组成：脱脂奶粉50~60份，魔芋粉20~30份，蔗糖30~40份，谷氨酸钠20~30份，硫代硫酸钠30~40份，微晶纤维素20~30份，Tris10~20份。

【技术特征摘要】
1.一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1冻干保护剂，其特征是，该冻干保护剂是由以下质量份的原料组成：脱脂奶粉50~60份，魔芋粉20~30份，蔗糖30~40份，谷氨酸钠20~30份，硫代硫酸钠30~40份，微晶纤维素20~30份，Tris10~20份。2.如权利要求1所述的冻干保护剂，其特征是，该冻干保护剂的组成为：脱脂奶粉50~60份，魔芋粉20~21份，蔗糖30~40份，谷氨酸钠20~22份，硫代硫酸钠35~38份，微晶纤维素20~22份，Tris10~12份。3.如权利要求2所述的冻干保护剂，其特征是，该冻干保护剂的组成为：脱脂奶粉51.9份，魔芋粉20.3份，蔗糖39.8份，谷氨酸钠21.0份，硫代硫酸钠37.0份，微晶纤维素21.6份，Tris10份。4.如权利要求1~3中任一项所述的冻干保护剂，其特征是：所述鼠伤寒沙门氏菌噬菌体ФSa-1在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为：CCTCCNO：M2017217，保藏日期为2017年4月28日，保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。5.权利要求1~4中任一项所述的鼠伤寒沙门...

【专利技术属性】
技术研发人员：单宝龙，陈雷，王春凤，谷巍，徐海燕，刘秀侠，姜延龙，王红，李金敏，赵影，陈玉春，高绪娜，郭婷婷，辛国芹，董佩佩，汪祥燕，于佳民，赵倩，曾佳佳，亓秀晔，
申请(专利权)人：山东宝来利来生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37