使用了酶的蛋壳膜的溶解方法技术

本发明专利技术的课题是提供一种蛋壳膜溶解方法，其能够解决利用酸和/或碱的处理、利用蛋白质分解酶的现有处理方法所具有的问题中的至少一个，即，(1)需要粉末化、超声波处理、沸腾处理之类的前处理；(2)需要长时间的处理；(3)分解率低(约20％)。通过将蛋白质分解酶和还原剂联用，将蛋壳膜有效率地溶解。

Dissolution method of eggshell membrane using enzyme

The subject of the invention is to provide a method of eggshell membrane dissolved, it can be solved by acid and / or alkali treatment, the protein decomposition enzyme treatment method has the problems existing in the at least one, namely, (1) need powder, ultrasonic treatment, boiling pretreatment processing, (2;) processing requires a long time; (3) the decomposition rate is low (about 20%). The egg shell membrane is dissolved efficiently by combining the protease with the reductant.

【技术实现步骤摘要】
使用了酶的蛋壳膜的溶解方法本申请为专利申请201180040001.3(申请日：2011年8月12日，专利技术创造名称：使用了酶的蛋壳膜的溶解方法)的分案申请。
本专利技术涉及使用了酶的蛋壳膜的溶解方法。详细地说，涉及使用了蛋白质分解酶的蛋壳膜溶解方法及其用途。本申请基于2010年8月31日申请的日本专利申请第2010－195076号主张优先权，该专利申请的全部内容通过参照的方式援用于此。
技术介绍
鸡肉和鸡蛋在日本国内的消耗量巨大，据称一年分别达到220万吨、250万吨。在全世界的消耗量中，鸡肉约为8300万吨，鸡蛋约为5600万吨。另一方面，还大量排出非食用部分的羽毛和蛋壳膜。羽毛和蛋壳膜的90％以上由蛋白质构成，羽毛的主要成分是角蛋白，蛋壳膜的主要成分是胶原蛋白样蛋白质。已知均大量含有半胱氨酸(约10％)、其分解物具有抗氧化作用等多种生理功能。蛋壳膜在鸡蛋中包裹卵细胞(蛋黄)和蛋白，并与蛋壳一起将蛋黄和蛋白与外界物理性地隔离，保护鸡蛋免受有害的紫外线、氧和干燥。另外，还有防御病原菌、病毒等外来生物的感染的重要作用。此外，蛋壳膜中含有抗菌物质和溶菌酶、β－N－乙酰基氨基葡萄糖苷酶等抗菌酶。进而，据称蛋壳膜中含有其它特殊的蛋白质，其功能性备受关注。已知使用了蛋壳膜的各种功能物。例如，已知在烫发剂中为了保护毛发外皮层而加入蛋壳膜(日本特开2000－128744)，为了治疗创伤而在护创膏中加入蛋壳膜分解物(日本特开2003－225298)等。现状是大部分蛋壳膜未被利用而被废弃处理。作为其理由，可举出由于是难分解性而难以处理，没有有效率的溶解方法。目前主流的蛋壳膜处理技术是基于酸和碱处理的技术，但伴有茶褐色的着色、氨基酸分解所导致的发生异臭的问题。此外，还存在因过度反应导致的有用成分低收率化的问题。作为替代技术，研究了利用蛋白质分解酶(蛋白酶)进行的处理(例如参照专利文献1～4)，但存在如下问题：(1)需要粉末化、超声波处理、沸腾处理之类的前处理；(2)需要长时间的处理；(3)分解率低(约20％)。酶反应由于在比较温和的条件下进行，所以能够期待有效成分的高收率化，但由于上述问题而没有确立实用的技术。专利文献专利文献1：日本特开2008－118887号公报专利文献2：日本特开2008－061514号公报专利文献3：日本特开平09－040564号公报专利文献4：日本特开2008－007419号公报
技术实现思路
因此，本专利技术的课题在于提供一种能够解决以往的处理方法(利用酸、碱进行的处理，利用蛋白质分解酶进行的处理)所存在的上述问题中的至少一个问题的蛋壳膜溶解方法及其用途等。本专利技术人为了解决上述课题而反复进行了深入研究。其结果发现通过将蛋白质分解酶(蛋白酶)和还原剂联用、特别是在还原剂共存的条件下使蛋白质分解酶发生作用，能够使蛋壳膜极其有效率地溶解。令人惊讶的是，显示出还能够达到对于利用了酶的以往方法而言难以达到的完全溶解，并且在采用了酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的任一种的情况下，尽管在温和的pH条件下，也看到良好的溶解。经过进一步研究，成功地确定对溶解有效的各种条件。另一方面，研究了通过本方法得到的蛋壳膜溶解物的特性，结果确认了有用物质的存在，明确了该溶解物的利用价值高。主要基于以上成果，完成了以下本专利技术。[1]一种蛋壳膜溶解方法，其特征在于，将蛋白质分解酶和还原剂联用。[2]如[1]所述的蛋壳膜溶解方法，包括在还原剂共存的条件下使蛋白质分解酶作用于蛋壳膜的工序。[3]如[1]所述的蛋壳膜溶解方法，包括以下的工序(1)和(2)：(1)在溶剂中准备蛋壳膜的工序；(2)向所述溶剂添加还原剂和蛋白质分解酶，使之反应的工序。[4]如[3]所述的蛋壳膜溶解方法，其中，工序(2)的反应溶液的pH为4.5～9.5。[5]如[3]或[4]所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述还原剂的浓度为5mM～1M。[6]如[3]～[5]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，继续所述工序(2)的反应，直至确认不到固态物。[7]如[3]～[6]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，还包括以下的工序(3)：(3)将工序(2)后的溶液过滤，除去固态物的工序。[8]如[1]～[7]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶为碱性蛋白酶或中性蛋白酶。[9]如[1]～[7]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自丝氨酸内肽酶、半胱氨酸内肽酶、金属内肽酶、氨基肽酶以及天冬氨酸内肽酶中的一种以上的酶。[10]如[1]～[7]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自糜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、芽孢杆菌蛋白酶(bacillolysin)、茎菠萝蛋白酶、亮氨酰氨基肽酶、胃蛋白酶以及胰蛋白酶中的一种以上的酶。[11]如[1]～[7]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自BIOSORK、PROLEATHERFG－F、PAPAINW40、PROTEASEN、BROMELAINF、UMAMIZYMEG、THERMOASEY100、ProteAX、PROTEASES、SUMIZYMELP500、DESKINC、PROTINNY10、PROTINPC10、SUMIZYMEMP、PROTINAY以及蛋白酶K中的一种以上的酶。[12]如[1]～[11]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述还原剂是选自亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、L－半胱氨酸、N－乙酰基－L－半胱氨酸、2－巯基乙醇、谷胱甘肽以及DTT中的一种以上的还原剂。[13]如[1]～[11]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述还原剂为亚硫酸钠或亚硫酸氢钠。[14]如[1]所述的蛋壳膜溶解方法，包括以下的工序(1)和(2’)：(1)在溶剂中准备蛋壳膜的工序；(2’)向所述溶剂添加还原剂而使之反应后，除去还原剂，接着添加蛋白质分解酶，使之反应的工序。[15]一种蛋壳膜溶解剂，是将蛋白质分解酶和还原剂组合而成的。[16]如[15]所述的蛋壳膜溶解剂，其特征在于，含有蛋白质分解酶和还原剂。[17]如[15]所述的蛋壳膜溶解剂，其特征在于，是由含有蛋白质分解酶的第1构成组分、以及含有还原剂的第2构成组分构成的试剂盒。[18]一种蛋壳膜溶解物，是通过[1]～[13]中任一项所述的蛋壳膜溶解方法得到的。[19]如[18]所述的蛋壳膜溶解物，其中，含有选自溶菌酶、β－N－乙酰基氨基葡萄糖苷酶、透明质酸、硫酸软骨素以及硫酸皮肤素中的一种以上的成分。[20]如[18]所述的蛋壳膜溶解物，其中，显示选自抗氧化活性和血管紧张素转化酶抑制活性中的一种以上的活性。[21]一种蛋壳膜溶解物，是通过[14]所述的蛋壳膜溶解方法得到的。[22]如[21]所述的蛋壳膜溶解物，其中，含有赖氨酰氧化酶。[23]如[18]～[22]中任一项所述的蛋壳膜溶解物，其中，是蛋壳膜的完全溶解物。[24]一种组合物，含有[18]～[23]中任一项所述的蛋壳膜溶解物。[25]如[24]所述的组合物，其中，是医药品、准医药品(quasidrug)、食品或化妆品。[26]一种蛋壳膜有用成分的提取方法，包括以下的工序(i)和(ii)：(i)采用[1]～[13]中任一项所述的方法的溶解工序；(ii)将在所述溶解工本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋壳膜溶解方法，其特征在于，包括在浓度为10mM～1M的还原剂共存的条件下使蛋白质分解酶作用于蛋壳膜的工序，反应溶液的pH为6.0～9.5，反应时间为10分钟～24小时，所述蛋白质分解酶为碱性蛋白酶或中性蛋白酶，所述还原剂是选自亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、L－半胱氨酸、N－乙酰基－L－半胱氨酸、2－巯基乙醇、谷胱甘肽以及DTT中的一种以上的还原剂，将蛋白质分解酶和还原剂联用。

【技术特征摘要】
2010.08.31 JP 2010-1950761.一种蛋壳膜溶解方法，其特征在于，包括在浓度为10mM～1M的还原剂共存的条件下使蛋白质分解酶作用于蛋壳膜的工序，反应溶液的pH为6.0～9.5，反应时间为10分钟～24小时，所述蛋白质分解酶为碱性蛋白酶或中性蛋白酶，所述还原剂是选自亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、L－半胱氨酸、N－乙酰基－L－半胱氨酸、2－巯基乙醇、谷胱甘肽以及DTT中的一种以上的还原剂，将蛋白质分解酶和还原剂联用。2.如权利要求1所述的蛋壳膜溶解方法，其中，包括以下工序(1)和(2)：(1)在溶剂中准备蛋壳膜的工序；(2)向所述溶剂添加还原剂和蛋白质分解酶，使之反应的工序。3.如权利要求2所述的蛋壳膜溶解方法，其中，工序(2)的反应溶液的pH为4.5～9.5。4.如权利要求2或3所述的蛋壳膜溶解方法，其中，继续所述工序(2)的反应，直至确认不到固态物。5.如权利要求2～4中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，还包括以下的工序(3)：(3)将工序(2)后的溶液过滤、除去固态物的工序。6.如权利要求1～5中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自丝氨酸内肽酶、半胱氨酸内肽酶、金属内肽酶、氨基肽酶以及天冬氨酸内肽酶中的一种以上的酶。7.如权利要求1～5中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自糜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、芽孢杆菌蛋白酶、茎菠萝蛋白酶、亮氨酰氨基肽酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶中的一种以上的酶。8.如权利要求1～5中任一项所述的蛋壳膜溶解方法，其中，所述蛋白质分解酶是选自BIOSORK、PROLEATHERFG－F、PAPAINW40、PROTEASEN、BROMELAINF、UMAMIZYMEG、THERMOASEY100、ProteAX、PROTEASES、SUMIZYMELP500、...

【专利技术属性】
技术研发人员：田中俊一，
申请(专利权)人：天野酶制品株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP