一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法，所述测定方法包括如下步骤：(1)将交联透明质酸或其盐在透明质酸酶的作用下发生酶解反应，生成寡糖和二糖；(2)用液相色谱联合紫外吸收，分离和检测所述寡糖和二糖，得到吸光度‑保留时间色谱图，分别测定所述寡糖和二糖的色谱峰面积；(3)

【技术实现步骤摘要】
一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法
本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法。
技术介绍
透明质酸(HA)是由葡糖醛酸和乙酰基氨基葡糖双糖单位重复连接组成的链状聚阴离子黏多糖，它是构成玻璃体、皮肤、关节滑液和软骨组织的重要成分，参与多种细胞活动和生理过程。由于HA具有良好的保湿性、润滑性、黏弹性、非免疫原性以及对药物吸收的促进作用，因此在临床上得到了广泛应用。但是天然的HA存在水溶性强、在组织中易扩散和被酶降解、体内存留时间短等缺点，而经修饰和交联后得到的HA衍生物则可弥补这些缺陷。一些交联HA产品已被成功应用于预防术后粘连、治疗骨关节炎、软组织填充、组织工程和药物控释。交联透明质酸钠是交联透明质酸钠上糖环活性基团与交联剂在一定条件下反应，交联形成的凝胶大分子，也称为交联玻璃酸钠凝胶，是交联HA衍生物的一种。交联反应是大分子包含空间多位点的复杂反应。交联透明质酸钠的理化性质与交联度的大小密切相关。因此，交联度是控制交联透明质酸钠产品质量的指标之一。目前，对于交联HA凝胶或交联透明质酸钠凝胶中交联剂残留量这一指标已有一定研究。如CN1056本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：(1)将交联透明质酸或其盐在透明质酸酶的作用下发生酶解反应，生成寡糖和二糖；(2)用液相色谱联合紫外吸收，分离和检测所述寡糖和二糖，得到吸光度‑保留时间色谱图，分别测定所述寡糖和二糖的色谱峰面积；(3)根据公式

【技术特征摘要】
1.一种交联透明质酸或其盐的交联度的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：(1)将交联透明质酸或其盐在透明质酸酶的作用下发生酶解反应，生成寡糖和二糖；(2)用液相色谱联合紫外吸收，分离和检测所述寡糖和二糖，得到吸光度-保留时间色谱图，分别测定所述寡糖和二糖的色谱峰面积；(3)根据公式计算交联度，其中A1为所述寡糖的色谱峰面积，A2为所述二糖的色谱峰面积。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述酶解反应的温度为10-45℃，时间为5-24h。3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，所述酶解反应是在磷酸盐缓冲液中进行；优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为1-10mmol/L，pH为4.5-8.0；优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为5mmol/L，pH为6.0。4.根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于，所述交联透明质酸或其盐与所述的磷酸盐缓冲液的质量体积比为0.1-0.4g/mL。5.根据权利要求1-4任一项所述的测定方法，其特征在于，所述透明质酸酶的添加量为1×102-1×104IU/g底物。6.根据权利要求1-5任一项所述的测定方法，其特征在于，在所述酶解反应结束后还对反应液进行纯化操作；优选地，所述纯化操作为：将反应液离心，取上清液过0.22μm的滤膜。7.根据权利要求1-6任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兆利，郑琳松，刘珊，程庆有，
申请(专利权)人：上海景峰制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31