一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，该方法包括将待测样品提取后上高效液相色谱仪进行检测的步骤，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为250～280nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C18色谱柱，流动相为缓冲液与乙腈的混合液，采用匀速洗脱，柱温为25～35℃。与现有技术相比，本发明专利技术能够一次完成六种维生素的含量测定，检测结果精确度高，操作过程更加安全简单，结果更加准确稳定。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法。
技术介绍
随着社会的发展和对营养需求的提高，市场上出现了越来越多的含复合维生素的产品，维生素过量补充也对身体不利，因此需要对产品中的维生素含量进行监控，这就需要一种快速测定的方法，高效液相色谱法是维生素含量测定的一种可行的方法。但目前该方法仅能实现对其中一两种成分进行检测，造成整个过程试剂消耗量较大，检测周期长，检测费用高，而且现有检测方法的准确性，灵敏度等较差。CN1582756A公开了一种孕妇营养素软胶囊，它由维生素C、烟酰胺、维生素E、泛酸、维生素B6、维生素B1、维生素B2、β-胡萝卜素、叶酸、维生素D2、维生素B12、无水磷酸氢钙、重质氧化镁等多种维生素和矿物质组成，目前只能分多次对其中的维生素类成分进行检测，尚无同时检测多种成分的文献报导。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中存在的缺陷，提供一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，同时提高检测的准确性和灵敏度。本专利技术所采用的技术方案如下：一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，所述维生素为叶酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C，该方法包括将待测样品提取后上高效液相色谱仪进行检测的步骤，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为250～280nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C18色谱柱，流动相为缓冲液与乙腈的混合液，采用匀速洗脱，柱温为25～35℃。优选地，所述待测样品提取方法是：取软胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入流动相，于45℃超声30min，冷却至室温，用流动相定容至刻度，摇匀后取10ml离心，上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。优选地，所述检测波长为260nm。优选地，所述流动相中缓冲液与乙腈的体积比为80～95∶20～5。进一步优选地，所述流动相中缓冲液与乙腈的体积比为90∶10。优选地，所述缓冲液含1～5mM离子对试剂和30～100mM缓冲盐，磷酸调节pH为2～4，所述离子对试剂选自四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵、戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠，优选庚烷磺酸钠；所述缓冲盐选自磷酸或醋酸的钠盐或钾盐。进一步优选地，所述缓冲液含2mM离子对试剂和50mM缓冲盐，磷酸调节pH为3。优选地，所述柱温为30℃。优选地，所述匀速洗脱的流速为0.5～2mL/min。本专利技术的有益效果是：1)本专利技术采用流动相作为提取液，弱酸保证溶液环境呈适宜酸性，使叶酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C在提取液中更稳定，有利于检测结果准确；并且，在进行高效液相检测时，采用离子对作为流动相，既能稳定维生素，又能够调节所述维生素在色谱柱内的保留时间和峰形，实现了叶酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C的有效分离与准确检测。特别是，当选用含有50mmol/L磷酸二氢钾溶液，2mmol/L庚烷磺酸钠的离子对溶液时，分离效果和检测准确度可以达到最优。2)本专利技术检测前处理中采用0.45μm及以下的滤膜过滤检测液，过滤效果好，有效保护柱子免受杂质影响，增长色谱柱的使用寿命。3)本专利技术的检测方法能够一次前处理完成六种维生素检测，且处理过程简单，检测结果精确度高。4)本专利技术检测时间短，操作过程更加安全简单，使用试剂量小，结果准确稳定。附图说明图1是实施例1中采用流动相提取后得到的液相色谱图。图2是实施例1中采用水提取后得到的液相色谱图。图3是实施例1中采用50％乙醇提取后得到的液相色谱图。图4是290nm检测波长得到的液相色谱图。图5是流动性A为含50mM磷酸氢二钠的缓冲盐溶液，磷酸调节pH至3得到的液相色谱图。图6是流动性A为含2mM庚烷磺酸钠的缓冲盐溶液，磷酸调节pH至3得到的液相色谱图。图7是流动性A为含2mM庚烷磺酸钠和50mM磷酸氢二钠的缓冲盐溶液，磷酸调节pH至5得到的液相色谱图。图8是流动性比例为90:20得到的高效液相色谱图。图9是柱温20℃得到的高效液相色谱图。图10是柱温40℃得到的高效液相色谱图。图11是标准品溶液的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细地说明。实施例1样品溶液制备方法的选择1.取胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入适量流动相，45℃超声30min，冷却至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀后取10ml离心，取上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。2.取胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入适量水，于45℃超声30min，冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀后取10ml离心，取上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。3.取胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入适量50％乙醇，于45℃超声30min，冷却至室温，用50％乙醇稀释至刻度，摇匀后取10ml离心，取上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。仪器：Waters2695/2998型高效液相色谱仪系列(Waters，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、PDA检测器、Empower3色谱工作站)将以上溶液进行高效液相色谱法检测，检测条件均如下所示：所用的色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶，硅胶的粒径为3-10μm；柱高为250mm，内径为4.6mm；进样量为10μL；流动相由体积比为90：10的缓冲液和乙腈组成；缓冲液含2mM庚烷磺酸钠和50mM磷酸氢二钠，其余为水，用磷酸调节pH至3.0；洗脱方式为匀速；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；检测波长为260nm；结果：如图1至图3所示；经用流动相提取后，与水和乙醇提取相比，能明显减少杂质，主峰处与杂质分离效果好，故优选流动相提取。实施例2检测波长的选择样品溶液制备：取胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入适量流动相，45℃超声30min，冷却至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀后取10ml离心，取上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。检测波长：260nm、290nm其它条件与实施例1相同。结果：从图1﹑图4可看出，波长为290nm时，维生素B1(17.652min)、维生素B1(18.539min)不能有效检出，且多出3.304min干扰维生素C测定；波长为260nm时，维生素C(2.830min)、烟酰胺(4.262min)、维生素B6(6.962min)、叶酸(14.438min)、维生素B2(17.652min)、维生素B1(18.539min)都能有效检出，且无其它干扰测定，故260nm是最合适检测波长。实施例3流动相的选择(1)A为含50mM磷酸氢二钠的缓冲盐溶液，用磷酸调节pH至3；B为乙腈(2)A为含2mM庚烷磺酸钠的缓冲盐溶液，用磷酸调节pH至3；B为乙腈(3)A为含2mM庚烷磺酸钠和50mM磷酸氢二钠的缓冲盐溶液，用磷酸调节pH至5.0；B为乙腈(4)A为含2mM庚烷磺酸钠和50mM磷酸氢二钠的缓冲盐溶液，用磷酸调节pH至3.0；B为乙腈流动相体积比为90：10；其它条件与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，其特征在于：所述维生素为叶酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C，该方法包括将待测样品提取后上高效液相色谱仪进行检测的步骤，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为250～280nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C18色谱柱，流动相为缓冲液与乙腈的混合液，采用匀速洗脱，柱温为25～35℃。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，其特征在于：所述维生素为叶酸、烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C，该方法包括将待测样品提取后上高效液相色谱仪进行检测的步骤，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为250～280nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C18色谱柱，流动相为缓冲液与乙腈的混合液，采用匀速洗脱，柱温为25～35℃。2.如权利要求1所述同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，其特征在于，所述待测样品提取方法是：取软胶囊内容物1g，置于50ml容量瓶中，加入流动相，于45℃超声30min，冷却至室温，用流动相定容至刻度，摇匀后取10ml离心，上清液用0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。3.如权利要求1所述同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，其特征在于：所述检测波长为260nm。4.如权利要求1所述同时检测营养素软胶囊中多种维生素含量的方法，其特征在于：所述流...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪继兵，赵小伟，欧阳康乐，
申请(专利权)人：福格森武汉生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42