猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒及检测方法，试剂盒包括特异性引物和探针，引物序列如下：上游引物：5'‑ACGTCGTAAGACCCAGCATC‑3'；下游引物：5'‑CCCACCTGAAAGTTGCTCTC‑3'；探针的序列为：5'‑FAM‑GTATGGCTGATCCTCGCATCATGGC‑BHQ1‑3'；扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段648bp，本发明专利技术建立的TaqMan实时荧光定量PCR对PDCoV的最低检测限度为26.6copies/μL，而对猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及口蹄疫病毒的检测结果均为阴性；本发明专利技术检测PDCoV的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、批间和批内重复性好。利用本发明专利技术对194份临床猪粪便样品进行检测，结果显示PDCoV阳性率为22.1％，高出常规RT‑PCR对该临床猪粪便样品检测的阳性率11.9％近1倍。

TaqMan fluorescent quantitative PCR kit and detection method for swine delt coronavirus

The invention discloses a pig delta coronavirus TaqMan fluorescence quantitative PCR reagent kit and detection method and kit including specific primers and probes and primer sequences are as follows: the upstream primer: 5'ACGTCGTAAGACCCAGCATC 3'; 5': CCCACCTGAAAGTTGCTCTC primer 3'; probe sequence: 5'FAM GTATGGCTGATCCTCGCATCATGGC BHQ1 3'; amplification of a fragment of 648bp gene of porcine coronavirus Delta TaqMan, real-time fluorescence quantitative PCR the lowest detection limit of PDCoV is 26.6copies/ L, and of transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhea virus, porcine kobuvirus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus and detection of foot-and-mouth disease virus were negative; the detection method of PDCoV TaqMan probe real-time fluorescence quantitative PCR has high specificity and sensitivity, inter and intra batch weight The recharacter is good. To detect 194 clinical samples of swine fecal samples by means of the invention, the results showed that the positive rate of PDCoV was 22.1%, higher than the conventional RT PCR on the clinical detection of pig fecal samples of 11.9% positive rate of nearly 1 times.

【技术实现步骤摘要】
猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒及检测方法
本专利技术属于病毒的分子生物学检测
，尤其涉及一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒及检测方法。
技术介绍
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)，又称猪丁型冠状病毒，主要是感染猪的整段小肠，引起肠炎并伴有腹泻和呕吐，乳猪发病率和死亡率高达50％-100％。目前，国内外对于猪德尔塔冠状病毒的检测方法主要是ELISA方法、RT-PCR及荧光定量PCR检测方法，由于PDCoV与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)的临床发病情况比较相似，因此增加了PDCoV的检测鉴定难度。在众多的PDCoV检测方法中，由于RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性，因而其成为当今检测PDCoV研究的主要手段之一，但常规的RT-PCR对PDCoV的阳性检出率较低，检测的特异性和灵敏性还不能够满足PDCoV的临床样品诊断，因此，在常规的RT-PCR基础上，建立一种特异性强、灵敏性高，同时PDCoV的阳性检出率提高的检测方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含引物和探针；所述引物的序列为：上游引物：5'‑ACGTCGTAAGACCCAGCATC‑3'；下游引物：5'‑CCCACCTGAAAGTTGCTCTC‑3'；所述探针的序列为：5'‑FAM‑GTATGGCTGATCCTCGCATCATGGC‑BHQ1‑3'；扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段648bp。

【技术特征摘要】
1.一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含引物和探针；所述引物的序列为：上游引物：5'-ACGTCGTAAGACCCAGCATC-3'；下游引物：5'-CCCACCTGAAAGTTGCTCTC-3'；所述探针的序列为：5'-FAM-GTATGGCTGATCCTCGCATCATGGC-BHQ1-3'；扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段648bp。2.根据权利要求1所述猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR试剂盒，其特征在，所述引物的浓度为0.75μmol/L，所述探针的浓度为0.2μmol/L。3.一种猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新生，张永光，王永录，方玉珍，周鹏，肖帅，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62