一种肠道病毒分型检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种肠道病毒分型检测试剂盒，所述肠道病毒分型包括肠道病毒及其多个亚型：EV71、CVAl6、CVA6、CVA10、CVA2、CVA5、CVA4、CVA9、CVA12、Echo6、Echo9、Echo30、CVB2、CVB3、CVB4。本发明专利技术运用一步法多重实时荧光RT‑PCR，采用EV及其多个亚型病毒高度特异的引物和荧光标记探针，通过一个PCR八连管同时反应，标本中同时检测出是否有肠道病毒存在，并同时进行主要肠道病毒型别的分型鉴定。本方法比单重荧光PCR方法更便捷迅速、节约成本。病毒检测分型准确，可用于肠道病毒引起暴发疫情的实验室应急快速筛查分型、供临床诊断及手足口病的流行病学的研究。

An enterovirus typing detection kit

The invention provides an enterovirus typing test kit, which includes enterovirus and its multiple subtypes: EV71, CVAl6, CVA6, CVA10, CVA2, CVA5, CVA4, CVA9, CVA12, Echo6, Echo9, Echo6, CVA9, x, etc. The invention adopts one-step multiplex real-time RT PCR, using primers and fluorescent probe EV and multiple virus subtype highly specific, while the reaction through a PCR eighth tube, were also detected whether intestinal virus exists, and at the same time the main intestinal virus genotype typing. This method is more convenient and faster and cost saving than single fluorescence PCR method. Virus detection is accurate and can be used for laboratory emergency rapid screening typing, clinical diagnosis and epidemiological study of hand foot mouth disease caused by enterovirus outbreak.

【技术实现步骤摘要】
一种肠道病毒分型检测试剂盒
本专利技术属生物
，涉及实时荧光RT-PCR检测试剂盒，具体涉及一种一步法多重实时荧光RT-PCR在一个PCR八连管内检测患者标本中肠道病毒以及多个肠道病毒亚型的核酸检测方法，可应用于肠道病毒引起暴发疫情的实验室应急诊断、肠道病毒快速筛查分型、临床诊断及手足口病的流行病学的研究。
技术介绍
肠道病毒(Enterovirus,EV)属于小RNA病毒科肠道病毒属。目前国际病毒分类委员会(ICTV)将其分为EV-A、EV-B、EV-C、EV-D、EV-E、EV-F、EV-G、EV-H、EV-J、RV-A、RV-B、RV-C共12个种www.picornaviridae.com(ICTVMasterSpeciesList2015)，其中能够感染人的肠道病毒主要有EV-A(21型)、EV-B(59型)、EV-C(23型)、EV-D(4型)，型别高达百余种。人类肠道病毒(humanenterovirus,HEV)可导致多种疾病，如手足口病、脑炎、无菌性脑膜炎、急性弛缓性麻痹、呼吸系统疾病、肠胃炎等。手足口病(hand，footandmouthdisease，HF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠道病毒分型检测试剂盒,所述肠道病毒分型包括肠道病毒及其多个亚型：EV71、CVAl6、CVA6、CVA10、CVA2、CVA5、CVA4、CVA9、CVA12、Echo6、Echo9、Echo30、CVB2、CVB3、CVB4，其特征在于，该试剂盒包含肠道病毒分型检测混合液、酶混合液、EV阳性对照品、阴性对照品、内标溶液，其中肠道病毒分型检测混合液装载于编码为①‑⑧的八连管内，其中八连管的每个管内含有PCR反应缓冲液和引物探针混合液，编号①‑⑧的八连管内有不同的引物探针混合液，分别为：①EV+Rnase P、②EV71+CVA16+CVA6、③CVA10+CVA2+CVA5、④CVA4+...

【技术特征摘要】
1.一种肠道病毒分型检测试剂盒,所述肠道病毒分型包括肠道病毒及其多个亚型：EV71、CVAl6、CVA6、CVA10、CVA2、CVA5、CVA4、CVA9、CVA12、Echo6、Echo9、Echo30、CVB2、CVB3、CVB4，其特征在于，该试剂盒包含肠道病毒分型检测混合液、酶混合液、EV阳性对照品、阴性对照品、内标溶液，其中肠道病毒分型检测混合液装载于编码为①-⑧的八连管内，其中八连管的每个管内含有PCR反应缓冲液和引物探针混合液，编号①-⑧的八连管内有不同的引物探针混合液，分别为：①EV+RnaseP、②EV71+CVA16+CVA6、③CVA10+CVA2+CVA5、④CVA4+CVA9+CVA12、⑤Echo6+Echo9+Echo30、⑥CVB2+CVB3+CVB4、⑦EV+RnaseP、⑧EV+RnaseP，其中⑦用于检测阴性对照品，⑧用于检测EV阳性对照品；酶混合液含耐热TaqDNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶；引物探针混合液中各组上游引物和下游引物以及相应的不同荧光标记的探针序列如下：上游引物EV-F:5’-CCCTGAATGCGGCTAATCC-3’，下游引物EV-R:5’-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’，特异性探针EV-P:5’-ROX-AACCGACTACTTTGGGTGTCCGTGTTTC-BHQ2-3’，上游引物EV71-F:5’-GAGYATGATYGARACACGCTG-3’，下游引物EV71-R:5’-CGCTCTRCTRAAGAARCTATC-3’，特异性探针EV71-P:5’-FAM-AACTCGCACAGTACRGCTGARACCAC-BHQ1-3’，上游引物CVA16-F:5’-CCCAATGGYGAGYTAGTCCCC-3’，下游引物CVA16-R:5’-GTTGGTRGCWGTYTGCCAAGC-3’，特异性探针CVA16-P:5’-HEX-AGTAYATGTATGTCCCRCCAGGGGCT-BHQ1-3’，上游引物CVA6-F:5’-AARCCRGATAGYAGGAAATC-3’，下游引物CVA6-R:5’-GGGGTGGATCACTCAATTTTG-3’，特异性探针CVA6-P:5’-ROX-CAATGGCAGACTGCYACYAAYCCGTCG–BHQ2-3’，上游引物CVA10-F:5’-GAGACTGGACGYGTRCCA-3’，下游引物CVA10-R:5’-GGGTYTCAATCATGTTYTCATCTG-3’，特异性探针CVA10-P:5’-FAM-CAGAGACRGGTGCCACWTCTAAYGCC-BHQ1-3’，上游引物CVA2-F:5’-AGTCGRCCAGTGTCTCAYTCA-3’下游引物CVA2-R：5’-TACACGCCCRGTCTCAATGG-3’特异性探针CVA2-P:5’-HEX-AACAGCTGCWAACACCCAGGTRAGCC-BHQ1-3’上游引物CVA5-F:5’-AAGCGGCGGAGACAGGAG-3’下游引物CVA5-R:5’-CCATGCCTGTTGACCACACA-3’特异性探针CVA5-P:5’-ROX-CAAAYGCCACCGAYGARAGCATGA-BHQ2-3’上游引物CVA4-F:5’-GGRTTYTCAAACTGGGATATTG-3’下游引物CVA4-R:5’-CGCATRTATGTRAATGCYTCAAG-3’特异性探针CVA4-P:5’-FAM-CATTATGGCRTTTGTGCAAYTGCG-BHQ1-3’上游引物CVA9-F:5’-CCYAGYATYTTCTGGACRGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑜，谢国良，崔大伟，楼滨，郑书发，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33