一种基于I‑B型CRISPR‑Cas系统基因cas3的基因编辑方法技术方案

本发明专利技术公开了一种基于维吉尼亚链霉菌IBL14染色体中的I‑B型CRISPR‑Cas系统的基因

A method of I B CRISPR editor gene Cas3 gene based on Cas system

The invention discloses a I type B CRISPR Cas system Virginia Streptomyces IBL14 in chromosome based gene

【技术实现步骤摘要】
一种基于I-B型CRISPR-Cas系统基因cas3的基因编辑方法
本专利技术涉及生物
的基因编辑技术，确切地说是一种基于I-B型CRISPR-Cas系统基因cas3的基因编辑方法。
技术介绍
CRISPR-Cas系统广泛存在于古细菌和细菌基因组中。当前已发现的CRISPR-Cas系统分为两类六型：1类为多Cas蛋白进行干涉，包括I、III和IV型；2类为单一Cas蛋白进行干涉，包括II、V和VI型；I至VI型分别以Cas3,Cas9，Cas10,undetermined,Cpf1和C2c2为标志蛋白(P.Mohanraju,K.S.Makarova,B.Zetsche,F.Zhang,E.V.Koonin,J.vanderOost,DiverseevolutionaryrootsandmechanisticvariationsoftheCRISPR-Cassystems.Science2016,(353)5147)。其中，I型最为广泛，约占已鉴定的60％以上。遗憾的是：I型CRISPR-Cas系统虽有诸多发现，但未见可应用于基因编辑的报道。特别是：通过DNA导向进行基因编辑未本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于I‑B型CRISPR‑Cas系统基因cas3的基因编辑方法，其特征在于：包括维吉尼亚链霉菌IBL14中基因cas3构建的蛋白Cas3表达载体与包含t‑DNA和/或g‑DNA的基因编辑载体所组成的基因编辑工具对所有生物的遗传物质进行基因编辑。

【技术特征摘要】
1.一种基于I-B型CRISPR-Cas系统基因cas3的基因编辑方法，其特征在于：包括维吉尼亚链霉菌IBL14中基因cas3构建的蛋白Cas3表达载体与包含t-DNA和/或g-DNA的基因编辑载体所组成的基因编辑工具对所有生物的遗传物质进行基因编辑。2.根据权利要求1所述的一种基于I-B型CRISPR-Cas系统基因cas3的基因编辑方法，其特征在于，步骤如下：（1）Cas3表达载体的构建基于维吉尼亚链霉菌IBL14基因cas3序列信息设计引物，以维吉尼亚链霉菌IBL14基因组为模板，通过PCR反应扩增得到cas3基因，并连接到载体上，得到Cas3表达载体；（2）基因编辑载体的构建（A）根据靶向基因序列信息设计引物，以靶向生物基因组为模板，设计并通过PCR合成由靶向基因上、下游同源臂和所需遗传功能信息组成的t-DNA片段；（B）根据生物靶向基因序列信息设计并化学合成顺序包含限制性酶缺位点、转录启动子、转录crRNA的crDNA、转录终止子和限制性酶缺位点组成的g-DNA片段；（C）分别将制备得到的t-DNA片段和g-DNA片段连接到载体上，得基因编辑载体；（3）基因编辑重组子的构建与验证制备感受态细胞或原生质体，并将步骤（1）得到的Cas3表达载体和步骤（2）得到的基因编辑载体导入感受态细胞或...

【专利技术属性】
技术研发人员：童望宇，唐严严，夏婷婷，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34