一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统及其制备方法技术方案

本发明专利技术一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统及其制备方法，制备方法为将组合物1、组合物2、基因以及生物分子保护剂按体积比为(10‑20):(20‑30):1:(1‑5)的比例混匀，得混合物，冷冻干燥，得到冻干粉，常温储存；所述生物分子保护剂为(0.01‑0.02)g/ml的黏土水溶液、(1.7‑2.6)g/ml的海藻糖水溶液、体积分数为(30％‑50％)的甘油水溶液、(0.5‑1)g/ml的葡聚糖水溶液和(0.6‑1)g/ml的甜菜碱水溶液中至少一种。本发明专利技术实现了无细胞蛋白合成系统的常温存储问题，降低了存储和运输成本。在使用时，只需将冻干粉用去离子水溶解，系统即可以开始表达蛋白质。

An acellular protein synthesis system which can be stored at normal temperature and its preparation method

The invention relates to a cell-free protein synthesis system and preparation method thereof can be stored at room temperature, preparation method for the composition of the 1, 2, as well as the molecular composition of gene protective agent in the volume ratio (10 20 (20): 30): 1: (1 5) of the mixing, the mixture cold, freeze drying, get the freeze-dried powder, stored at room temperature; the protective agent for biological molecules (0.01 0.02) clay aqueous solution of g/ml (1.7, 2.6) trehalose solution, the volume fraction of g/ml (30% 50%) glycerin water solution, (0.5 1) g/ml Dextran Aqueous Solution and (0.6 1) betaine g/ml in aqueous solution at least one. The invention has realized the normal temperature storage problem of the acellular protein synthesis system and reduced the cost of storage and transportation. In use, it is only necessary to dissolve the frozen dry powder with deionized water, and the system can begin to express the protein.

【技术实现步骤摘要】
一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统及其制备方法
本专利技术涉及一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统及其制备方法，属于生物合成领域。
技术介绍
传统的蛋白表达是指通过细菌、酵母、植物细胞或动物细胞等表达外源基因的生物学技术。随着科学技术的发展，与蛋白质相关的前沿领域逐渐兴起，无细胞蛋白合成系统应运而生，其是一种以外源mRNA或DNA为模板，在细胞提取物中补加各种底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统(SmithMT，BennettAM，HuntJM，etal.Creatingacompletely“cell－free”systemforproteinsynthesis[J].BiotechnolProg，2015，10:2157.)。无细胞蛋白表达系统具有诸多优势，例如表达周期短、反应条件易控制、蛋白产量高、可表达细胞不能表达的蛋白质，甚至是对细胞有毒害作用的特殊蛋白质，这使得它在高通量表达目的蛋白和合成生物学方面得到了广泛的应用(HodgmanCE,JewettMC.Cell-freesyntheticbiology:Thinkingoutsidethecell[J].Metabolic本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将组合物1、组合物2、基因以及生物分子保护剂按体积比为(10‑20):(20‑30):1:(1‑5)的比例混匀，得混合物，冷冻干燥，得到冻干粉，常温储存；所述的组合物1按1g:0.01～0.1ml:1～3ml比例包括细胞破碎产物、缓冲溶液1和缓冲溶液2；所述的组合物2按(2‑8):(20‑30):(2‑5):1的体积比包括氨基酸混合液、反应缓冲液、能量补充液和浓度为5‑150μg/ml的核糖核酸聚合酶水溶液：所述生物分子保护剂为(0.01‑0.02)g/ml的黏土水溶液、(1.7‑2.6)g/ml的海藻糖水溶液、体积分数为(...

【技术特征摘要】
1.一种可常温储存的无细胞蛋白合成系统的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将组合物1、组合物2、基因以及生物分子保护剂按体积比为(10-20):(20-30):1:(1-5)的比例混匀，得混合物，冷冻干燥，得到冻干粉，常温储存；所述的组合物1按1g:0.01～0.1ml:1～3ml比例包括细胞破碎产物、缓冲溶液1和缓冲溶液2；所述的组合物2按(2-8):(20-30):(2-5):1的体积比包括氨基酸混合液、反应缓冲液、能量补充液和浓度为5-150μg/ml的核糖核酸聚合酶水溶液：所述生物分子保护剂为(0.01-0.02)g/ml的黏土水溶液、(1.7-2.6)g/ml的海藻糖水溶液、体积分数为(30％-50％)的甘油水溶液、(0.5-1)g/ml的葡聚糖水溶液和(0.6-1)g/ml的甜菜碱水溶液中至少一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述基因为能表达所需蛋白质的基因，所述基因存在的形式为基因组、质粒、带有目的基因的线性双链脱氧核糖核酸、单链脱氧核糖核酸片段和核糖核酸中的至少一种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述细胞为真核细胞或原核细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述缓冲溶液1为：5-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷，30-100mmol/L谷氨酸钾，10-20mmol/L谷氨酸镁，0.5-2mmol/L二硫苏糖醇，5-10mmol/L2-巯基乙醇；溶剂是去离子水；所述缓冲溶液2为：5-20...

【专利技术属性】
技术研发人员：仰大勇，白丽慧，郭小翠，刘阳，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津,12