The invention belongs to the medical field, a fusion protein for delivery to the central nervous system and synthesis method are disclosed, wherein the synthesis methods include information extraction of RNA and mRNA, using reverse transcriptase mRNA synthesis of complementary deoxyribonucleic acid cDNA, cloning of GDNF gene and BDNF gene, and PEP encoding 1 penetrating peptides oligonucleotides were fused into neurotrophic factor GDNF gene and BDNF gene of N amino terminal end or C end, fusion protein M Y N compounds. The treatment effect of the invention is obvious, the purified GDNF fusion protein with the penetrating peptide and GDNF two functions; overcome the blood-brain barrier in the brain, so that GDNF can through the peripheral blood circulation system through the blood-brain barrier, its biological activity, achieve the treatment of nervous system diseases related to.
【技术实现步骤摘要】
一种用于递送至中枢神经系统的融合蛋白及合成方法
本专利技术属于医疗领域,尤其涉及一种用于递送至中枢神经系统的融合蛋白及合成方法。
技术介绍
人脑神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF,下同)是由脑组织中的神经胶质细胞产生、分泌的一种有着重要神经生物功能的神经细胞营养因子。GDNF对中枢和外周的多种神经细胞具有有较广泛的促进神经元生长和分化的神经营养作用,是目前发现的对多巴胺神经元和运动神经元作用最为显著的一类神经营养因子,尤其对多巴胺神经元作用最强。国内外对GDNF的功能进行了广泛的研究,证明GDNF通过PI3K/Akt通路介导,明显缓和6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱发的染色质浓缩和DNA断裂;启动一系列抗凋亡信号途径而保护神经元,被认为是一种有希望的神经保护治疗药物。BDNF是于1982年由德国神经化学家Barde等人首次从动物脑中分离纯化出具有促进神经生长活性的一种蛋白质,BDNF分子单体是由119个氨基酸残基组成的分泌型成熟多肽,蛋白等电点为9199,分子量为13.15kD,主要由β折叠和无规N-级结构组成,含有3个二硫键,为一种碱性蛋白质,分析表明BDNF的氨基酸序列有相当一部分与神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)相同,故通称为神经营养因子(neurotrophicfactor,NTF)。BDNF可由大脑自然分泌,能够起到调节痛苦和恐惧的作用,BDNF缺乏会导致创伤后压力紊乱,也就是俗称的恐惧症。服用BDNF能够使大脑不断重写覆盖痛苦的记忆,并在重写的过程中建立信心和安全感。与神经元损失或损伤相关的疾病是严重病症并且在世界 ...
【技术保护点】
一种用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白的合成方法,其特征在于,所述用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白的合成方法包括以下步骤:提取信息核糖核酸mRNA,并利用反转录酶将mRNA合成互补脱氧核糖核酸cDNA,然后,应用PCR技术,克隆GDNF基因和BDNF基因,并将穿透肽PEP‑1的编码脱氧核苷酸分别融合到神经细胞营养因子GDNF基因和BDNF基因的氨基酸末端N‑端或C‑端;将GDNF融合基因和BDNF融合基因插入原核细胞表达载体,构建成GDNF融合基因表达质粒和BDNF融合基因表达质粒;将GDNF融合基因表达质粒和BDNF融合基因表达质粒转化感受态表达菌,形成含有GDNF融合基因表达质粒的转化子和含有BDNF融合基因表达质粒的转化子;在适当条件下培养转化子表达菌株,并用诱导剂诱导表达菌内的表达质粒GDNF融合基因和表达质粒BDNF融合基因的转录、并合成融合蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白的合成方法,其特征在于,所述用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白的合成方法包括以下步骤:提取信息核糖核酸mRNA,并利用反转录酶将mRNA合成互补脱氧核糖核酸cDNA,然后,应用PCR技术,克隆GDNF基因和BDNF基因,并将穿透肽PEP-1的编码脱氧核苷酸分别融合到神经细胞营养因子GDNF基因和BDNF基因的氨基酸末端N-端或C-端;将GDNF融合基因和BDNF融合基因插入原核细胞表达载体,构建成GDNF融合基因表达质粒和BDNF融合基因表达质粒;将GDNF融合基因表达质粒和BDNF融合基因表达质粒转化感受态表达菌,形成含有GDNF融合基因表达质粒的转化子和含有BDNF融合基因表达质粒的转化子;在适当条件下培养转化子表达菌株,并用诱导剂诱导表达菌内的表达质粒GDNF融合基因和表达质粒BDNF融合基因的转录、并合成融合蛋白。2.如权利要求1所述的用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白的合成方法,其特征在于,合成融合蛋白后还需进行:通过蛋白质纯化技术、WesternBlot分析和细胞分析确定融合蛋白的生物功能活性。3.一种如权利要求1所述合成方法的用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白,其特征在于,所述用于将GDNF和BDNF递送至中枢神经系统的融合蛋白为M...
【专利技术属性】
技术研发人员:程梅,吴玉龙,李波清,倪天辉,张莹,周秀芝,
申请(专利权)人:滨州医学院,
类型:发明
国别省市:山东,37
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