分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法。该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的一种或多种；该方法能同时将帕布昔利布中间体Z1及其有关物质完全分离，检测中溶剂峰不干扰帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的测定，分离度大于1.5；本方法专属性强，稳定性好，灵敏度高，可有效分离帕布昔利布中间体Z1及其有关物质，对帕布昔利布中间体Z1的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

Methods in Malibu Prabhu intermediate Z1 and its related substances determination

The invention belongs to the field of analytical chemistry, in particular relates to a method for separation and determination of Malibu Prabhu intermediate Z1 and its related substances. This method takes eighteen alkyl silane bonded silica as the stationary phase, the mixture of water and organic solvents as the mobile phase, the organic solvent is one or more methanol, acetonitrile, ethanol and isopropyl alcohol; the method can also be completely separated in Malibu Prabhu intermediate Z1 and its related substances, solvent peak detection did not interfere with the determination of Malibu Prabhu intermediate Z1 and related substances, the separation degree is greater than 1.5; this method has strong specificity, good stability, high sensitivity, can be effectively separated in Malibu Prabhu intermediate Z1 and its related substances of PA in Malibu cloth intermediate Z1 quality control, safety guarantee is very important.

【技术实现步骤摘要】
分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法。
技术介绍
帕布昔利布，商品名IBRANCE，是FDA批准的首个细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDKs4/6)抑制剂，CDKs4和6作为细胞周期的关键调节因素，能够触发细胞周期进展。IBRANCE在美国的适应症为联合来曲唑用于治疗雌激素受体阳性，人类表皮生长因子受体2阴性(ER+/HER2-)绝经后晚期乳腺癌患者，作为初始的内分泌治疗为基础的方案治疗转移性疾病。帕布昔利布中间体Z1是合成帕布昔利布的关键中间体，其分子式为C27H34BrN7O3，分子量为584.52，中间体Z1化学名：tert-Butyl4-[6-(6-bromo-8-cyclopentyl-5-methyl-7-oxo-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-2-ylamino)pyridin-3-yl]piperazine-1-carboxylate，其结构式为式Ⅰ所示：在帕布昔利布的合成过程中，其中间体Z1可能存在几个关键的工艺杂质和反应副产物，以及反应原料的残留。目前帕布昔利布中间体Z1合成过程中控制的有关物质有两个，即结构式如式Ⅱ所示的杂质1和结构式如式Ⅲ所示的杂质2，杂质1的化学名为：1-Boc-4-(6-aminopyridin-3-yl)piperazine，杂质2的化学名为：6-Bromo-2-chloro-8-cyclopentyl-5-methylpyrido[2,3-d]pyri-midin-7(8H)-one。其中杂质1还为基因毒性杂质，基因毒性杂质是指化合物本身直接或者间接损伤细胞DNA，导致生物体产生基因突变或者发生体内诱变，具有致癌性或者潜在倾向。根据EMA《基因毒性杂质限度指南》(2006年)规定，应对基因毒性杂质在帕布昔利布中的含量进行严格控制，按帕布昔利布最大日计量和最长用药时间计算该杂质的限度应控制不超过0.048％。另外，为了控制帕布昔利布中间体Z1的质量，还需要对帕布昔利布中间体Z1及其他相关物质的含量也要进行严格控制。因此，为了控制帕布昔利布中间体Z1的质量，对帕布昔利布中间体Z1及其相关物质进行分离测定显得尤为重要，目前还没有公开的方法报道分离测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于开发一种分离测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的方法，该方法能够实现帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的有效分离，还能够准确测定帕布昔利布中间体Z1及其相关物质的含量，专属性强，灵敏度高，对于实现对帕布昔利布中间体Z1的质量控制、安全性保证及对帕布昔利布原料和制剂质量控制具有极其重要的意义。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：分离帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，取供试品制备供试品溶液，然后以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的一种或多种；所述帕布昔利布中间体Z1的结构式如式Ⅰ所示：优选的，所述的方法，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行梯度洗脱。在本专利技术的一个实施例中，所述梯度洗脱设置如下：所述流动相A为水，所述流动相B为有机溶剂。作为更优选的，所述梯度洗脱设置如下：所述流动相A为水，所述流动相B为有机溶剂。进一步，所述的方法，所述有机溶剂更优选为甲醇或乙腈。进一步，所述的方法，所述的流动相，所述水可采用0.01mol/L六氟磷酸钾缓冲溶液代替。进一步，所述的方法，所述有关物质包括如式Ⅱ所述的杂质1和/或如式Ⅲ所述的杂质2：进一步，所述的方法，制备供试品溶液采用的稀释剂为乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的混合溶液。进一步，所述的方法，所述乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的体积比为20-80：20-80。优选的，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.1％。进一步，所述的方法，所述供试品溶液的浓度为0.2mg/ml-1.0mg/ml。进一步，所述的方法，所述流动相洗脱的流速为0.5ml/min-2.0ml/min。本专利技术还提供了一种利用高效液相色谱法分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，所述高效液相色谱法采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水和有机溶剂的混合液作为流动相；所述有关物质包括如式Ⅱ所述的杂质1和如式Ⅲ所述的杂质2，所述的方法具体包括以下步骤：(1)配制稀释剂(空白溶液)：配置乙腈和0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的混合溶液作为稀释剂(空白溶液)；所述乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的体积比为20-80：20-80；(2)配制有关物质定位溶液：取帕布昔利布中间体Z1有关物质的对照品，用稀释剂溶解并稀释，得有关物质定位溶液；(3)配制供试品溶液：取帕布昔利布中间体Z1样品，加稀释剂溶解并稀释，得供试品溶液；(4)配制自身对照溶液：取步骤(3)所述供试品溶液再加稀释剂稀释，得自身对照溶液；(5)配制杂质1标准溶液：取杂质1对照品，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质1标准溶液；(6)分别取步骤(1)所述空白溶液、步骤(2)所述有关物质定位溶液、步骤(3)所述供试品溶液、步骤(4)所述自身对照溶液和步骤(5)所述杂质1标准溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，确定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的保留时间，按外标法计算供试品溶液中杂质1的含量，按自身对照法计算供试品溶液中杂质2及未知杂质的含量，总杂质含量为各已知杂质和未知杂质含量之和。检测过程中，空白溶剂峰不能干扰帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的测定，帕布昔利布中间体Z1主峰与各杂质峰间、各杂质峰之间的分离度均需大于1.5。本专利技术的利用高效液相色谱法分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，所选用的空白溶剂不干扰帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的测定。进一步，所述的方法，所述步骤(6)中高效液相色谱分析采用检测器的检测波长为210-280nm。进一步，所述的方法，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱设置条件为：0.01min：水与有机溶剂的体积比为55-65：35-45；8min：水与有机溶剂的体积比为55-65：35-45；18min：水与有机溶剂的体积比为25-35：65-75；30min：水与有机溶剂的体积比为25-35：65-75；31min：水与有机溶剂的体积比为55-65：35-45；40min：水与有机溶剂的体积比为55-65：35-45。进一步，所述的方法，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱设置条件为：0.01min：水与有机溶剂的体积比为60：40；8min：水与有机溶剂的体积比为60：40；18min：水与有机溶剂的体积比为30：70；30min：水与有机溶剂的体积比为30：70；31min：水与有机溶剂的体积比为60：40；40min：水与有机溶剂的体积比为60：40。进一步，所述的方法，所述色谱柱柱箱温度为25-40℃。进一步，所述的方法，所述流动相流速为0.5ml/min-2.0ml/min。进一步，所述的方法，所述的流动相，所述水可采用0.01mo本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，其特征在于，取供试品制备供试品溶液，然后以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的一种或多种；所述帕布昔利布中间体Z1的结构式如式Ⅰ所示：

【技术特征摘要】
1.分离帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，其特征在于，取供试品制备供试品溶液，然后以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的一种或多种；所述帕布昔利布中间体Z1的结构式如式Ⅰ所示：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有关物质包括如式Ⅱ所述的杂质1和/或如式Ⅲ所述的杂质2：3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备供试品溶液采用的稀释剂为乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的混合溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的体积比为20-80：20-80。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流动相，以0.01mol/L的六氟磷酸钾水溶液与有机溶剂的混合液作为流动相进行洗脱。6.利用高效液相色谱法分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水和有机溶剂的混合液作为流动相；所述有关物质包括如式Ⅱ所述的杂质1和/或如式Ⅲ所述的杂质2，所述的方法具体包括以下步骤：(1)配制稀释剂(空白溶液)：配置乙腈和0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的混合溶液作为稀释剂(空白溶液)；所述乙腈与0.05-0.2％三氟乙酸水溶液的体积比为20-80：20-80；(2)配制有关物质定位溶液：取帕布昔利布中间体Z1有关物质的对照品，用稀释剂溶解并稀释，得有关物质定位溶液；(3)配制供试品溶液：取帕布昔利布中间体Z1样品，加稀释剂溶解并稀释，得供试品溶液；(4)配制自身对照溶液：取步骤(3)所述供试品溶液再加稀释剂稀释，得自身对照溶液；(5)配制杂质1标准溶液：取杂质1对照品，用稀释剂溶解并...

【专利技术属性】
技术研发人员：李江玲，唐舒棠，
申请(专利权)人：重庆华邦胜凯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50