一种谷胱甘肽分子检测用试纸条及检测方法技术

一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，所述结合垫须经以下步骤处理：1）将纳米颗粒氨基化制得的氨基化的纳米颗粒、羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液于37℃下混合反应30min，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化的纳米颗粒；2）将上述生物素化的纳米颗粒加水分散，再向该体系中加入纳米片层溶液混合，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物；3）将生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物与吐温20的水溶液混合，并涂于结合垫上干燥即可。本发明专利技术操作简单便捷，对GSH的选择性较好；检测时间短，仅需10min即可，且检测准确性高。

A test paper and detection method for glutathione molecular detection

With a strip of glutathione molecular detection, the binding pad shall be subject to the following steps: 1) nanoparticles prepared by amination aminated nanoparticles, hydroxymethyl amber imidization of biotin in aqueous solution at 37 DEG C under the mixed reaction of 30min, precipitation separation, the precipitate was washed by water biotinylated nanoparticles; 2) nanoparticles of the biotinylated water dispersion, and then added into the system mixed nanosheet solution precipitation separation, the precipitate was washed by biotinylated nanoparticles / nanosheet composites; 3) the biotin nanoparticle / nano film Twain and the 20 layer composite aqueous solution, and apply the combination mat drying. The invention has simple and convenient operation, good selectivity to GSH, short detection time, only 10min, and high detection accuracy.

【技术实现步骤摘要】
一种谷胱甘肽分子检测用试纸条及检测方法
本专利技术属于纳米材料技术、侧流层析技术、生物分析
，具体涉及一种谷胱甘肽分子检测用试纸条及检测方法。
技术介绍
GSH(谷胱甘肽)是人体内重要的非蛋白类含巯基化合物，广泛存在于哺乳动物和真核细胞中。谷胱甘肽在生物系统中提供重要功能，如：降低细胞内的自由基水平、维持新陈代谢过程、去除新陈代谢过程中产生的有毒物质、平衡细胞内氧化还原压力。研究表明，人体中谷胱甘肽的水平与许多疾病，如：细胞凋亡、衰老、心脏病、帕金森、老年痴呆症等症状密切相关。因此，为满足临床和医学需要，快速灵敏地检测谷胱甘肽含量成为日益紧迫的研究课题。到目前为止，许多谷胱甘肽检测方法被报道出来。目前常用的GSH含量的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、表面增强拉曼光谱法(SERS)、毛细管电泳法、酶联免疫吸附测定(ELISA)法等。这些已建立的方法在定量检测谷胱甘肽中具有重要的优势，然而这些检测方法操作繁琐费时，成本较高，且需要专业的人员操作。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供了一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，同时提供谷胱甘肽分子检测方法是本专利技术的又一专利技术目的。基于上述目的，本专利技术采取了如下技术方案：一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，所述试纸条包括基板，所述基板上依次设置样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上标记链霉亲和素检测线，所述结合垫须经以下步骤处理：1)将纳米颗粒氨基化制得的氨基化的纳米颗粒、羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液于37℃下混合反应30min，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化的纳米颗粒；2)将上述生物素化的纳米颗粒加水分散，再向该体系中加入纳米片层溶液混合，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物；3)将生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物与吐温20的水溶液混合，并涂于结合垫上干燥即可。所述样品垫和结合垫均由玻璃纤维膜制成；所述基板为PVC板。所述链霉亲和素的浓度为0.1～5mg/mL；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫的长度分别为26mm、6mm、20mm和33mm；试纸条的宽度为3.9mm。步骤1)中，沉淀分离时，先加入异丙醇混合，再离心分离即可。步骤1)中，所述氨基化的纳米颗粒的浓度为0.01～2μM，羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液的浓度为2～1000μM；氨基化的纳米颗粒与羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液的体积比为200uL：(200～300)uL。步骤2)中，纳米片层溶液的浓度为0.3～0.4mg/mL；纳米片层溶液与氨基化的纳米颗粒的体积比为200uL：(60～80)uL。步骤3)中，采用真空干燥，干燥温度为37℃。步骤3)中，吐温20水溶液中吐温20的体积百分比含量为1％～5％。所述纳米颗粒为水溶性金纳米簇、水溶性银纳米簇、水溶性铜锌铟/硫化锌量子点(CuZnIn/ZnS)、水溶性硒化镉/硫化锌量子点(CdSe/ZnS)、碳量子点(Carbondots)和石墨烯量子点(GrapheneQuantumdots)中的一种；且所述纳米颗粒的荧光发射波长为400nm～750nm；所述纳米片层为二氧化锰纳米片层(MnO2nanosheets)或氢氧化氧化钴纳米片层(CoOOHnanoflakes)。一种谷胱甘肽分子检测方法，包括以下步骤：i)将不同浓度的谷胱甘肽标准液滴加到所述的试纸条上跑样10～30min，测定不同浓度下标准液的荧光强度值A；ii)以谷胱甘肽标准液的浓度为横坐标、荧光强度值A为纵坐标作图，在一定浓度范围内经线性拟合得谷胱甘肽标准曲线和拟合方程；iii)将未知浓度的待测样品滴加到所述试纸条上跑样10～30min，检测荧光强度值A1，将该荧光强度值A1代入拟合方程计算得到待测样品的浓度。本专利技术中，首先制备出具有荧光效应的生物素化的纳米颗粒，其采用纳米颗粒的荧光发射波长为400nm～750nm，再利用二氧化锰纳米片层负载生物素化的纳米颗粒，制备成生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物，生物素化的纳米颗粒的荧光被猝灭，同时结合层析试纸条技术，将纳米片层负载的生物素化的纳米颗粒固定到试纸条的反应区域(结合垫)。当待测液中含有谷胱甘肽(GSH)时，GSH可以消解纳米片层释放生物素化的纳米颗粒，生物素化纳米颗粒的荧光恢复。在毛细作用下，生物素化的量子点向前移动，利用检测线上的链霉亲和素(Streptavidin)和生物素(Biotin)的特异性结合，从而捕获纳米颗粒。因此通过测量检测线上的纳米颗粒的荧光信号强弱从而达到检测GSH的目的。以检测不同浓度的GSH标准溶液的荧光值为基础，建立不同浓度的标准液与荧光值的标准曲线，实现对待测样品中GSH含量的测定。与现有技术相比，本专利技术具有以下技术效果：1、本专利技术克服了传统检测的不足，提供了一种便捷、快速的生物和临床诊断方法，操作简单，适应性较强，对GSH的选择性较好；检测时间短，仅需10min即可，且检测准确性高；2、本专利技术对仪器的要求不高，不需要复杂昂贵的仪器，成本较低，过程十分简便，有利于方法的规模推广，在分子诊断、医学检测及临床应用方向具有重要意义。附图说明图1是试纸条的组成检测原理图；图2是试纸条的组装过程示意图；图3是试纸条检测信号读取过程示意图；图4是各种干扰物的荧光强度柱状图；图5是对图2中步骤2的结构放大示意图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明，但是本专利技术的保护范围并不局限于此。本专利技术中，样品垫、结合垫、吸水垫和PVC底板均来自上海金标公司；硝酸纤维素膜购自Millipore公司。实施例1一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，如图1所示，所述试纸条包括PVC基板，所述基板上依次设置样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上标记有浓度为0.3mg/mL的链霉亲和素检测线，所述样品垫和结合垫均由玻璃纤维膜制成；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫的长度分别为26mm、6mm、20mm和33mm；试纸条的宽度为3.9mm。所述结合垫须经以下步骤处理：1)将纳米颗粒氨基化得氨基化的纳米颗粒，将200uL浓度2μM氨基化的纳米颗粒、200uL浓度800μM羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液于37℃下混合反应30min，加入1mL异丙醇离心，所得沉淀物水洗三次得生物素化的纳米颗粒；2)将上述生物素化的纳米颗粒加200uL水分散，再向该体系中加入60uL浓度为0.277mg/mL的纳米片层溶液混合，离心，所得沉淀物经水洗三次后得生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物；3)将生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物与200uL吐温20(吐温20的体积百分比含量为3％)的水溶液混合，并涂于结合垫上37℃真空干燥即可。纳米颗粒为水溶性铜锌铟/硫化锌量子点(CuZnIn/ZnS)；所述纳米片层溶液为二氧化锰纳米片层(MnO2nanosheets)和水的混合液。一种谷胱甘肽分子检测方法，包括以下步骤：i)分别配置浓度0.05mM、0.1mM、0.2mM、0.5mM、0.8mM、1mM、1.5mM的谷胱甘肽标准液，滴加到上述试纸条上跑样10min，测定不同浓度下标准液的荧光强度A，分别为237.12、267.56、314.42、395.61、454.83、545.83和649.43；检测时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，所述试纸条包括基板，所述基板上依次设置样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上标记链霉亲和素检测线，所述结合垫须经以下步骤处理：1）将纳米颗粒氨基化制得的氨基化的纳米颗粒、羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液于37℃下混合反应30min，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化的纳米颗粒；2）将上述生物素化的纳米颗粒加水分散，再向该体系中加入纳米片层溶液混合，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物；3）将生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物与吐温20的水溶液混合，并涂于结合垫上干燥即可。

【技术特征摘要】
1.一种谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，所述试纸条包括基板，所述基板上依次设置样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上标记链霉亲和素检测线，所述结合垫须经以下步骤处理：1）将纳米颗粒氨基化制得的氨基化的纳米颗粒、羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液于37℃下混合反应30min，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化的纳米颗粒；2）将上述生物素化的纳米颗粒加水分散，再向该体系中加入纳米片层溶液混合，沉淀分离，所得沉淀物经水洗得生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物；3）将生物素化纳米颗粒/纳米片层复合物与吐温20的水溶液混合，并涂于结合垫上干燥即可。2.如权利要求1所述的谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，所述样品垫和结合垫均由玻璃纤维膜制成；所述基板为PVC板。3.如权利要求1所述的谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，所述链霉亲和素的浓度为0.1～5mg/mL；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫的长度分别为26mm、6mm、20mm和33mm；试纸条的宽度为3.9mm。4.如权利要求1所述的谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，步骤1）中，所述氨基化的纳米颗粒、羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液的体积比，沉淀分离时，先加入异丙醇混合，再离心分离即可。5.如权利要求1所述的谷胱甘肽分子检测用试纸条，其特征在于，步骤1）中，所述氨基化的纳米颗粒的浓度为0.01～2μM，羟甲基琥珀酰亚胺化的生物素水溶液的浓度为2～1000μM；氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李朝辉，黄钟明，陈娟，葛佳，张琳，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南,41