一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin及其制备方法和应用，香港巨牡蛎半乳凝素的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。实验数据表明，本发明专利技术的香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin是一种全新的4联体半乳凝素蛋白，其具有凝集多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生物活性，可以有效提高贝类，特别是香港巨牡蛎等的免疫力，减少疾病的发生，有效提高养殖效益。

A kind of galactoin ChGalectin of Hongkong giant oyster and its preparation and Application

The invention discloses a Hongkong giant oyster galectin ChGalectin and preparation method and application thereof, the amino acid sequence of Hongkong giant oyster galectin is shown as SEQ ID NO:1. The experimental data show that the Hongkong giant oyster by coagulation the invention of vitamin ChGalectin is a new type of 4 CIS galectin protein, which has a variety of agglutination of gram positive and gram negative bacteria biological activity, can effectively improve the immunity of shellfish, especially Hongkong giant oysters, reduce the incidence of disease, improve the breeding benefit.

【技术实现步骤摘要】
一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物领域，特别涉及一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin及其制备方法和应用。
技术介绍
贝类是世界上最重要经济类群之一，贝类养殖在我国沿海经济社会发展中占据举足轻重的地位，具有巨大的发展潜力。香港巨牡蛎(Crassostreahongkongensis)，属于软体动物门，双壳纲，珍珠贝目，牡蛎科动物，是我国华南沿海地区最重要的贝类经济动物。随着养殖业规模的不断扩大，天然苗种大规模异地移养、养殖香港巨牡蛎抗逆力下降和种质资源退化等问题已经凸现。良种匮乏导致牡蛎免疫能力低下，疾病爆发，甚至出现大规模死亡，是制约贝类产业可持续发展的主要瓶颈。因此，如何提高贝类的抗菌能力，同时易为大众所接受是目前需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin及其制备方法和应用。本专利技术所采取的技术方案是：一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。编码上述香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的核酸序列。进一步的，核酸序列根据表达宿主细胞进行密码子优化。特别的，核酸序列如SEQIDNO：2所示。一种表达载体，载体内插入有表达上述香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的核酸序列。进一步的，表达载体为原核表达载体。一种提高贝类免疫能力的养殖方法，在贝类的养殖过程中添加上述的香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin，或与表达上述香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的细胞共培养。贝类选自牡蛎、贻贝、扇贝、缢蛏、泥蚶、蛤仔、鲍、珍珠贝、江瑶等常见的经济养殖贝类。一种制备香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的方法，香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，包括：1)构建表达载体；2)将表达载体转入宿主细胞，诱导表达：3)纯化得到香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin。本专利技术的有益效果是：实验数据表明，本专利技术的香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin是一种全新的4联体半乳凝素蛋白，其具有凝集多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生物活性，可以有效提高贝类，如牡蛎、贻贝、扇贝、缢蛏、泥蚶、蛤仔、鲍、珍珠贝、江瑶等，特别是香港巨牡蛎的免疫力，减少疾病的发生，有效提高养殖效益。附图说明图1是表达和纯化的香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin重组蛋白，其中，M：蛋白Marker；Lane1：重组表达蛋白GST-ChGalectin；Lane2：纯化后的GST；箭头指示重组表达的目的蛋白GST-ChGalectin；图2是香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin对细菌的凝集分析结果；通过ChGalectin重组蛋白对细菌的凝集分析，确定其对多种细菌具有凝集能力。A、B：ChGalectin对革兰氏阴性菌大肠杆菌Escherichiacoli的凝集分析；C、D:ChGalectin对革兰氏阴性菌溶藻弧菌Vibrioalginolyticus的凝集分析；E、F：ChGalectin和革兰氏阳性菌苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis的凝集分析。具体实施方式为进一步说明本专利技术的技术手段、新颖性和目的效果，结合实际阐述实施例，但以下实施例为示例性的，仅用于解释此专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例11.RNA提取总RNA的提取使用Trizol(Invitorgen)提取，具体步骤如下：1)取40mg香港巨牡蛎鳃组织于液氮预冷的研钵中，将组织磨成粉末之后，转移到装有1mlTrizol的离心管中，吹打、混匀；2)加入200μL氯仿，剧烈震荡40s，室温放置5min；3)4℃，12,000×g离心10min，吸取上清转移至新管；4)加入0.5ml的异丙醇，混匀，-80℃沉淀过夜；5)4℃，12,000×g离心10min，弃上清；6)75％乙醇漂洗两次沉淀；7)弃上清，加入80μLDEPC水溶解RNA。2.cDNA文库构建全长cDNA文库构建使用SMARTcDNAlibraryconstructionKit(Clontech)，具体步骤如下：1)使用MMLV合成cDNA第一条链；2)使用LDPCR扩增cDNA；3)蛋白酶K消化并纯化cDNA产物；4)使用ChromaSpin400进行产物大小分离；5)连接cDNA至λTripEx2载体，经λ噬菌体包装后，转化至宿主细胞中；6)检测cDNA文库滴度。测序结果表明，cDNA的全序列为：ATCCCAACAATTTGAAAATTTCAAGAAAAAACATCTCTTGCCAGACCGCGTCGGTATATAGTAAGGTGATCAAACATGACTTACCAGATCAGCAGAATTCCACAACCATTCACCAGTTACATTCCTAATGGCCTCCATGTTGGCAAGCACTTGCTCCTGAGAGGACGCGTGTCTTACGGAACGGAAGCGTTTGCGATCAACCTTCAACAAAACCCCGAACCTTGCGATGGAGAGGTTGCGTTCCATTTCAACCCTCGTCCAGGCGAGCAGCAATGCGTGCGCAACTCGTTCGATGGAGGATCATGGATGGATGAAGAGAGAGACCAGCCTCATTTTCCATTTGACGAAGGTCGGTCATTTACCCTTCGTATTGAGGTGGCGGAAGAGGGGTTCCGAACGTATGTAAATGGAAAGCCTTACGTCAATTTCAGCCATCGCCTGGACCTCGGGAATGTCCACTATCTATACTTGACGGAGGGAGCAGAGTTCTATGACATAAGCTACCAAGACCGTTACTCTTTGCCATATAAGTCCGAGATACCCCAGCAGATGAACGTAGGAAAAGCCGTCAGAATCAGAGGCGCCGCCCAGGACAACGATGGATTCAGTGTGAATTTTGCCTGTGACCCAGACAATGAAAACTGTGCCTTCCACTTTAACCCCCGACCCAATGAGGGCGTGGTCGTCCGTAATGCTAACCTGGGGGGCTGGGGCGAAGAAGAGAGGGATTACGATGCAGAATTTCCTTTCAATCCAAACAACTACTTTGACGCCATGTTTATTTGCACCGACGATAAATATATGGTTCACGTGAATGACAAGTATTTCACGGAGTTCAATCACCGTGGCGGGGTCAATGACGCATCCCATTTTAACATCGTGGGAAACCTGGACATCCAAGATGTCGAGTACTTCGAGCCATTGGAAGATGATTTCGTGAAGACCTTCCCATCCGGATTGGTGAAAGGAGACGTGCTGATCTTTAGGGGGTTCATGAAACCCGGGGGTGACACGTTCTCCATCAACTTCATGAACGGCTACAGCGTGGAGGACGACATTGCTTTCCACCTGAACCCCCGAGTTGGGGAGGGACAGGTTGTCATGAACTGCTGCATGGGTGGCGGGTGGGGGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
2017.04.10 CN 20171022971811.一种香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。2.编码权利要求1所述香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的核酸序列。3.根据权利要求2所述的核酸序列，其特征在于：核酸序列如SEQIDNO：2所示。4.根据权利要求2所述的核酸序列，其特征在于：核酸序列根据表达宿主细胞进行密码子优化。5.一种表达载体，其特征在于：载体内插入有表达权利要求1所述香港巨牡蛎半乳凝素ChGalectin的核酸序列。6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于：表达载体为原核表达载体。7.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金辉，冼昶华，文媛，罗月红，路远宁，邓雪萍，陈法才，林曼芬，陈清乐，
申请(专利权)人：清远职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44