骈双四氢呋喃类木脂素及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种骈双四氢呋喃类木脂素及其制备方法和应用，该木脂素的制备如下：①将忧遁草粉碎后用乙醇浸泡回流提取，得到乙醇总浸膏，然后均匀分散于蒸馏水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取；②将石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚‑乙酸乙酯溶剂体系进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分；③将采用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脱得到的流分依次进行反相硅胶柱色谱分离、Sephadex LH‑20葡聚糖凝胶柱层析分离以及高效液相色谱分离，得到骈双四氢呋喃类木脂素。本发明专利技术从忧遁草中提取的骈双四氢呋喃类木脂素对宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF‑7细胞、肺腺癌A549细胞具有抑制活性。

Parallel double tetrahydrofuran lignans and preparation method and application thereof

The invention discloses a parallel double tetrahydrofuran lignans and preparation method and application thereof, preparation of the lignans were as follows: 1. After crushing sorrow escape grass soaked in alcohol reflux extraction, the ethanol extract was obtained, and then dispersed in distilled water, followed by petroleum ether and ethyl acetate extraction; the petroleum ether extract by silica gel column chromatography, using ethyl acetate solvent system of petroleum ether by gradient elution, collecting, concentrating, with the same flow; 3 using petroleum ether: ethyl acetate =5: 1 elute flow points followed by reversed-phase silica gel column chromatography, Sephadex LH 20 Sephadex column chromatographic separation and HPLC separation, by parallel double tetrahydrofuran lignans. The present invention is extracted from the parallel double Dun worry grass tetrahydrofuran lignans have inhibitory activity on human cervical cancer Hela cells and breast cancer MCF 7 cells, lung adenocarcinoma A549 cells.

【技术实现步骤摘要】
骈双四氢呋喃类木脂素及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种天然植物提取物，具体涉及一种骈双四氢呋喃类木脂素及其制备方法和应用。
技术介绍
爵床科（Acanthaceae）鳄嘴花属（ClinacanthusNees）植物，全球有2种，主要分布于华南热带至马来西亚、爪哇、加里曼丹等地。我国分布1种，即忧遁草（Clinacanthusnutans），又名鳄嘴花、沙巴蛇草、青箭等。该植物主要产于海南、广东、广西和云南等省地，在民间主要用于清热解毒、利湿、散瘀消肿、活血调经、止痛等。目前，在海南省五指山市已有规模化种植。经查阅相关文献发现，国内外对其化学成分及药理活性的研究报道较少。骈双四氢呋喃类木脂素是由四氢呋喃类木脂素中脂肪烃链上的羟基缩合形成的，母体骨架中含有18个碳的对称结构。到目前为止，这种结构的木脂素中的两个四氢呋喃环均以顺式立体构型骈合，双四氢呋喃环的骨架也只有一种结构类型，即7-O-9'型和7'-O-9型四氢呋喃环通过8,8'-碳骈合。从目前所分离得到的骈双四氢呋喃类木脂素类化合物来看，仅仅是它们的烃基链和苯环上含氧取代基的种类和立体构型的不同，造成了此类化合物的种类繁多，且造成了分离和结构鉴定的困难。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述问题，提供一种骈双四氢呋喃类木脂素及其制备方法和应用。实现本专利技术目的的技术方案是：一种骈双四氢呋喃类木脂素，其结构如式（Ⅰ）所示：（Ⅰ）。上述骈双四氢呋喃类木脂素的制备方法包括以下步骤：①将自然风干的忧遁草粉碎后用乙醇浸泡回流提取，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到乙醇总浸膏，然后将上述乙醇总浸膏均匀分散于蒸馏水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏；②将步骤①得到的石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分；③将步骤②中采用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脱得到的流分依次进行反相硅胶柱色谱分离、SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离以及高效液相色谱分离，得到骈双四氢呋喃类木脂素。上述步骤③中反相硅胶柱色谱分离使用的溶剂体系为水∶甲醇=1∶1，SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=1∶1，高效液相色谱分离使用的流动相体系组成为48%乙腈和52%水。上述骈双四氢呋喃类木脂素在抑制肿瘤细胞上的应用，所述肿瘤细胞为宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7细胞或者肺腺癌A549细胞。本专利技术具有的积极效果：本专利技术从忧遁草中提取的骈双四氢呋喃类木脂素对宫颈癌Hela细胞、乳腺癌MCF-7细胞、肺腺癌A549细胞具有抑制活性。附图说明图1为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的1H-NMR谱（核磁共振氢谱）图。图2为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的13C-NMR谱（核磁共振碳谱）图。图3为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的DEPT-NMR谱（核磁共振无畸变极化转移增强谱）图。图4为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的1H-1HCOSY谱（氢氢相关谱）图。图5为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的HSQC谱图。图6为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的HMBC谱图。图7为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的NOESY谱图。图8为本专利技术的骈双四氢呋喃类木脂素的HRESIMS（高分辨电喷雾电离质谱）光谱图。具体实施方式（实施例）本实施例的骈双四氢呋喃类木脂素的结构式如式（Ⅰ）所示：（Ⅰ）。该骈双四氢呋喃类木脂素的制备方法包括以下步骤：①将9.5kg自然风干的忧遁草粉碎后，用体积分数为85%的乙醇浸泡回流提取3次，每次7天，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到550.2g的乙醇总浸膏，浸膏呈粘稠状棕色。然后将上述乙醇总浸膏均匀分散于3.0L蒸馏水中，依次用石油醚（3×3.5L）和乙酸乙酯（4×4.0L）进行萃取，得到石油醚部位浸膏（200g），乙酸乙酯部位浸膏（10.2g）。本实施例所用的忧遁草的茎采自海南省五指山市，标本存放于海南师范大学热带药用植物化学省部共建教育部重点实验室。②将步骤①得到的200g石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系，按照100∶0～0∶100（V/V）的进行梯度洗脱，每500mL收集流分，浓缩流分，通过TLC（薄层色谱）检测，合并相同流分。③将步骤②中采用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脱得到的流分依次进行反相硅胶柱色谱分离、SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离以及高效液相色谱分离，得到骈双四氢呋喃类木脂素。其中反相硅胶柱色谱分离使用的溶剂体系为水∶甲醇=1∶1，SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=1∶1，高效液相色谱分离使用的流动相体系组成为48%乙腈和52%水。（测试例）对实施例得到的骈双四氢呋喃类木脂素进行产品分析：（1）该骈双四氢呋喃类木脂素的1H-NMR谱见图1（溶剂CD3OD，400Hz）。（2）该骈双四氢呋喃类木脂素的13C-NMR谱见图2（溶剂CD3OD，100MHz）。具体数据见表1。表1（3）该骈双四氢呋喃类木脂素的DEPT-NMR谱（核磁共振无畸变极化转移增强谱）见图3（溶剂CDCl3）。（4）该骈双四氢呋喃类木脂素的1H-1HCOSY谱（氢氢相关谱）见图4（溶剂CDCl3）。（5）该骈双四氢呋喃类木脂素的HSQC谱见图5（溶剂CDCl3）。（6）该骈双四氢呋喃类木脂素的HMBC谱见图6（溶剂CDCl3）。（7）该骈双四氢呋喃类木脂素的NOESY谱见图7（溶剂CDCl3）。（8）该骈双四氢呋喃类木脂素的高分辨电喷雾电离质谱图（Q-TrapLC/MS/MSSystem质谱仪，ESI源）见图8，由图8中[M+H]+的理论值423.105【实测值为423.105】推算出该化合物的分子式为C21H20O8，不饱和度为11。通过对比化合物的13C-NMR谱和DEPT-NMR谱：共显示了21个碳信号，其中1个连氧甲基碳信号（δC56.7）、2个连二氧亚甲基碳信号（δC102.3、102.5）。剩余18个碳信号，其中12个碳为两组芳环碳信号，包括：5个连氧碳信号（δC148.8、142.6、153.0、149.3、148.5）、5个连氢碳信号（δC95.7、106.3、108.7、107.9、120.8）、2个季碳信号（δC138.3、124.5）。可以看出化合物含有五个连氢芳香碳信号，推测化合物含有1个三取代苯环和1个四取代苯环。还剩下6个碳信号（δC80.9、63.6、103.8、88.5、55.0、72.9）为脂肪族碳信号，再结合DEPT-NMR谱，发现6个脂肪族碳信号中δC72.9为亚甲基碳信号，其余均为次甲基碳信号。由此可猜测该化合物母体骨架为典型的骈四氢呋喃类木脂素化合物，其中在9号位或者9'号位被取代。在1H-NMR谱中观察到1个甲基氢信号δH3.82（3H），2个典型的连二氧亚甲基氢信号：δH5.90（2H），5.93（2H）；结合HSQC谱：δC56.7与δH3.82存在直接相关信号、δH5.89,5.92分别与δC102.5,102.3存在直接相关信号。进一步佐证了化合物为骨架为含有1个甲氧基、2个连二氧亚甲基片段的骈双四氢呋喃类木脂素。在HMBC谱中，发现δH3.81（3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种骈双四氢呋喃类木脂素，其结构如式（Ⅰ）所示：

【技术特征摘要】
1.一种骈双四氢呋喃类木脂素，其结构如式（Ⅰ）所示：（Ⅰ）。2.权利要求1所述的骈双四氢呋喃类木脂素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：①将自然风干的忧遁草粉碎后用乙醇浸泡回流提取，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到乙醇总浸膏，然后将上述乙醇总浸膏均匀分散于蒸馏水中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏；②将步骤①得到的石油醚部位浸膏经过硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流分；③将步骤②中采用石油醚∶乙酸乙酯=5∶1洗脱得到的流分依次进行反相...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋小平，李小宝，韩长日，陈光英，刁鸿章，
申请(专利权)人：海南师范大学，海南科技职业学院，
类型：发明
国别省市：海南,46