一种人多能干细胞的定向分化方法技术

本发明专利技术公开了一种人多能干细胞的定向分化方法，该方法是将人多能干细胞在无外源造血细胞因子、无血清、无基质细胞、成分明确的细胞培养环境下培养，形成类胚体后，添加血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4并使类胚体贴附于铺有胶原蛋白IV的表面，以诱导中胚层分化，生成造血祖细胞和血细胞。本发明专利技术方法使用成分确定的细胞培养体系对人多能干细胞进行定向分化，具有低成本、操作简单、可重复性高、分化过程有序等优点，可大量产生造血祖细胞和血细胞，在人体血液发育过程机制研究中具有重要意义。

A directional differentiation method for human pluripotent stem cells

The invention discloses a method for directed differentiation of human pluripotent stem cells, the human pluripotent stem cells in hematopoietic cells without exogenous factor, without serum, stromal cells, components of clear culturing cells, forming embryoid bodies after addition of vascular endothelial growth factor and bone morphogenetic protein 4 and the embryo is attached to the surface covered with collagen IV, to induce mesoderm differentiation, generation of hematopoietic progenitor cells and blood cells. The method of the invention uses certain composition cell culture system on differentiation of human pluripotent stem cells, has the advantages of low cost, simple operation, high repeatability and differentiation of orderly, can produce a large number of hematopoietic progenitor cells and blood cells in human blood development has important significance in research process.

【技术实现步骤摘要】
一种人多能干细胞的定向分化方法
本专利技术属细胞培养分化方法
，更具体地说，本专利技术涉及一种利用人多能干细胞在无外源造血细胞因子、无血清、无基质细胞、成分明确的培养条件下进行定向分化的方法。
技术介绍
在体外利用人多能干细胞(hPSCs)进行定向分化，为规模化获得临床级别治疗用的造血祖细胞和成熟血细胞提供了机会，并为人体早期造血发育中的功能研究提供条件。通常，利用hPSCs进行定向造血发育的培养体系大多利用小鼠细胞系OP9、mAGM-S3、S17、MS-5滋养层细胞进行共培养，这些共培养体系需要使用胎牛血清以维持小鼠基质细胞生长和实现hPSCs分化。基质细胞共培养体系对不同批次间血清质量变化、基质细胞培养质量和用于分化的hPSCs集落大小非常敏感。小鼠滋养层/基质细胞和胎牛血清均属于成分不明的异源性成分，其存在从根本上阻碍了对微环境在造血发育中的作用的研究。并且，上述培养体系也不能用于获得临床级别治疗用的血细胞。这是因为血清作为一种复杂的混合物，可能含有包括各种对原代细胞和细胞系有害的细胞毒素，并且其组分在不同批次产品之间差异巨大，容易导致细胞培养条件难以控制、且不同批次的血本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人多能干细胞的定向分化方法，其特征在于，该方法是将人多能干细胞在无外源造血细胞因子、无血清、无基质细胞、成分明确的细胞培养环境下培养，形成类胚体后，添加血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4并使类胚体贴附于铺有胶原蛋白IV的表面，以诱导中胚层分化，生成造血祖细胞和血细胞。

【技术特征摘要】
1.一种人多能干细胞的定向分化方法，其特征在于，该方法是将人多能干细胞在无外源造血细胞因子、无血清、无基质细胞、成分明确的细胞培养环境下培养，形成类胚体后，添加血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白4并使类胚体贴附于铺有胶原蛋白IV的表面，以诱导中胚层分化，生成造血祖细胞和血细胞。2.根据权利要求1所述的人多能干细胞的定向分化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将人多能干细胞在铺有Matrigel的无血清mTeSR1培养液中进行常规培养；(2)将步骤(1)培养的人多能干细胞制成单细胞悬液，经离心、重悬后，加入培养板中培养，形成类胚体；(3)将步骤(2)所得类胚体培养24h后，用添加了人血管内皮生长因子、人骨形态发生蛋白4和Thiazovivin的mTeSR1培养液悬浮类胚体，然后使类胚体贴附于铺有胶原蛋白IV的表面进行贴附培养；(4)在类胚体贴附培养48h后，换成添加有人血管内皮生长因子的StemLineII培养液继续培养，生成造血祖细胞和血细胞。3.根据权利要求2所述的人多能干细胞的定向分化方法，其特征在于，所述人多能干细胞包括人胚胎干细胞、人细胞核移植胚胎干细胞和人诱导多功能干细胞。4.根据权利要求2所述的人...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊戈尔·M·萨莫赫瓦洛夫，尤昊，谭颖，樊琛语，埃琳娜·S·菲洛年科，王翠华，查希尔·沙阿，张建光，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44