左旋维C-2-氧乙酰-GRPAK,其合成,活性和应用制造技术

本发明专利技术公开了左旋维C‑2‑氧乙酰‑Gly‑Arg‑Pro‑Ala‑Lys，公开了它的制备方法、公开了它的溶血栓活性、公开了它治疗脑血栓的活性以及公开了它清除NO·自由基活性，因而本发明专利技术公开了它在制备溶血栓药物、治疗脑血栓药物以及制备NO·自由基清除剂的应用。

Levo vitamin C-2- oxy acetyl -GRPAK, its synthesis, activity and Application

The invention discloses a L-dimensional C 2 Gly oxygen acetyl Arg Pro Ala Lys, discloses its preparation method and discloses its thrombolytic activity, discloses it for the treatment of cerebral thrombosis and discloses its activity of scavenging NO free radical activity, so the invention discloses it in the preparation of water-soluble drug preparation and application of cerebral thrombosis NO - free radical scavenger, drug treatment of thrombosis.

【技术实现步骤摘要】
左旋维C-2-氧乙酰-GRPAK,其合成,活性和应用
本专利技术涉及左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys，涉及它的制备方法，涉及它的溶血栓作用、涉及它治疗脑血栓的作用和涉及它清除NO·自由基的作用，因而本专利技术涉及它在制备溶血栓药物中的应用、在制备治疗脑血栓药物中的应用和在制备NO·自由基清除剂中的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
缺血性中风是一类较常见且危害严重的脑血管疾病，特点是发病率高、病死率高、致残率高和复发率高。目前临床治疗缺血性中风面临没有有效药物的现实，尤其中风面4h以上的患者非死即残。专利技术对中风面4小时以上的患者有效的药物是临床的重要需求。本专利技术设定的基本目标之一就是为缺血性中风专利技术新型化合物，突破缺血性中风4小时黄金治疗时间窗口，帮助缺血性中风的临床治疗走出困境。为了达到这个目标，专利技术人经历了艰苦的专利技术过程。专利技术人的第一个专利技术是涉及P6A相关的溶血栓化合物，它们大约于1996年获得国家专利授权。因为溶血栓活性不等于治疗缺血性中风活性，所以这个专利中与P6A相关的溶血栓化合物没有评价出治疗缺血性中风功能。专利技术人的第二个专利技术涉及RGD-四肽与P6A相关的溶血栓化合物缀合形成抗血栓化合物。尽管在2.5μmol/kg剂量下RGDF具有抗血栓活性，但是在2.5μmol/kg剂量下P6A-RGDF和QP6A-RGDF却没有抗血栓活性。尽管在5μmol/kg剂量下没有抗血栓活性的RGDS和RGDV与P6A和QP6A的缀合物P6A-RGDS、P6A-RGDV、QP6A-RGDS和QP6A-RGDV在2.5μmol/kg剂量下却有抗血栓活性。尽管10μmol/kgP6A和QP6A都有溶血栓活性，但是P6A-RGDF、QP6A-RGDF、P6A-RGDS、P6A-RGDV、QP6A-RGDS和QP6A-RGDV实质上都没有溶血栓活性。可见，药效团组合并不是总能导致期望的专利技术。专利技术人的第三个专利技术是将PAK序列(ARPAK、GRPAK、QRPAK)与1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉缀合，创造具有清除自由基和溶血栓双重功能的缀合物。在10μmol/kg剂量下1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-ARPAK、1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-GRPAK和1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-QRPAK显示溶血栓活性。它们的活性明显低于剂量为20000IU/kg的UK的溶血栓活性，并只与ARPAK、GRPAK和QRPAK的活性相当。1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-ARPAK、1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-GRPAK和1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-QRPAK在ESR仪(即顺磁共振仪)上可以测到清除O·自由基、·OH自由基和NO·自由基活性，但是在国际公认的评价模型(对乙酰胆碱舒张的大鼠主动脉条的抑制实验)上它们不能拮抗乙酰胆碱诱导的大鼠主动脉条舒张。1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-ARPAK、1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-GRPAK和1,3-二氧基-2-[(4-氧乙酸)苯基]-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-QRPAK最不理想的性质是没有治疗缺血性中风的作用。专利技术人曾经公开式II的咪唑啉化合物在中风面24h的大鼠缺血性中风模型上，显示优秀疗效。即连续静脉注射6天式II的咪唑啉化合物，每天1次，首次剂量为5μmol/kg，后5次的剂量为2μmol/kg具有优秀疗效。式中aa1和aa2可为同时存在,aa1存在但aa2不存在,或同时不存在；当aa1和aa2同时存在时,aa1为R(Arg),且aa2为G(Gly),A(Ala)或Q(Gln)；当aa1存在但aa2不存在时,aa1为R(Arg)；aa3可为S(Ser),V(Val)或F(Phe)。由于式II的咪唑啉化合物的2-位是4-氧乙酰-Lys。而该Lys的侧链氨基和主链羧基分别与RGD抗血栓四肽及ARPAK溶栓肽相连接,所以结构比较复杂需要简化。专利技术人又经过3年实验研究，发现在左旋维C的2位用氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys取代可以获得治疗缺血性中风的有效药物，最低有效剂量为1μmol/kg，明显低于式II的咪唑啉化合物。对于左旋维C的结构修饰来说，这是意想不到的技术效果。按照这个发现，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供下式的左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys。本专利技术的第二个内容是提供左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys的合成方法，该方法包括：(1)左旋维C在NaH催化下与溴乙酸乙酯反应生成左旋维C-2-氧乙酸乙酯；(2)左旋维C-2-氧乙酸乙酯在NaOH溶液(2N)中皂化成左旋维C-2-氧乙酸；(3)Boc-Pro与活泼酯HOSu生成Boc-Pro-OSu；(4)Boc-Pro-OSu与L-Ala经DCC、HOBt缩合成Boc-Pro-Ala；(5)Boc-Pro-Ala与Lys(Fmoc)-OBzl经DCC、HOBt缩合成Boc-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(6)Boc-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc得到Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(7)Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl与Boc-Arg(NO2)经DCC、HOBt缩合成Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(8)Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc得到Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(9)Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl与Boc-Gly经DCC、HOBt缩合成Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(10)Boc-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc得到Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(11)Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl与左旋维C-2-氧乙酸经DCC、HOBt缩合成左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(12)左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl经三氟醋酸、三氟甲磺酸脱保护基得到左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys；本专利技术的第三个内容是评价左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys的溶血栓活性。本专利技术的第四个内容是评价左旋维C-2-氧乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的左旋维C‑2‑氧乙酰‑Gly‑Arg‑Pro‑Ala‑Lys，

【技术特征摘要】
1.下式的左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys，2.权利要求1的左旋维C-2-氧乙酰-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys的制备方法，该方法包括：(1)左旋维C在NaH催化下与溴乙酸乙酯反应生成左旋维C-2-氧乙酸乙酯；(2)左旋维C-2-氧乙酸乙酯在NaOH溶液(2N)中皂化成左旋维C-2-氧乙酸；(3)Boc-Pro与活泼酯HOSu生成Boc-Pro-OSu；(4)Boc-Pro-OSu与L-Ala在弱碱条件下缩合成Boc-Pro-Ala；(5)Boc-Pro-Ala与Lys(Fmoc)-OBzl经DCC、HOBt缩合成Boc-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(6)Boc-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc得到Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(7)Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl与Boc-Arg(NO2)经DCC、HOBt缩合成Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(8)Boc-Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl在4N氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱Boc得到Arg(NO2)-Pro-Ala-Lys(Fmoc)-OBzl；(9)A...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵明，彭师奇，王玉记，吴建辉，赵欣尉，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11