抗CD89细胞毒素的复合物制造技术

适于靶向和杀死人靶细胞的复合物，其包含具有结合结构的第一多肽和包括毒性效应结构域(优选假单胞菌外毒素A)的第二多肽，所述结合结构将所述复合物与存在于人靶细胞的细胞表面上的细胞表面受体CD89(例如用抗CD89抗体)相结合；还涉及编码所述复合物的核酸分子、载体、含有核酸的宿主细胞和用于制备和产生此类复合物的方法；使用所述复合物治疗疾病，特别是癌症疾病如白血病的组合物和方法。

Complex of anti CD89 cytotoxin

Suitable for targeting and killing target cells of the complexes, comprising a polypeptide structure and combination of the first domain (preferably including toxic effects of Pseudomonas exotoxin A) article more than 2 of the peptide, the binding structure of the complexes with the surface of target cells in cells on cell surface receptors (CD89 for example, the combination of anti CD89 antibody); nucleic acid molecules, also involves encoding the complexes containing nucleic acid carrier, host cells and methods for preparing and producing such complexes for use; the complex treatment of diseases, particularly cancer diseases such as leukemia, compositions and methods.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD89细胞毒素的复合物
本文提供的技术涉及适于靶向和杀死人靶细胞的新型复合物，所述复合物包含具有结合结构的第一多肽和具有毒性效应结构域的第二多肽，所述结合结构用于将所述复合物与存在于人靶细胞的细胞表面的细胞表面受体CD89相结合；还涉及编码所述复合物的核酸分子、载体、含有核酸的宿主细胞和用于制备和产生此类复合物的方法；以及使用所述复合物用于治疗疾病，特别是如白血病等癌症的组合物和方法。
技术介绍
在治疗肿瘤、自身免疫性疾病、过敏和组织排斥反应方面，目前可用的药物，如化疗剂(Goodin,S.,AmJHealthSystPharm,2007,64:p.15-24)皮质类固醇(Stanbury,R.M.&Graham,E.M.,BrJOphthalmol,1998,82:p.704-708)和免疫抑制剂等(Stucker,F.&Ackermann,D.,TherUmsch,2011,68:p.679-686)，由于其相关的非特异性，缺点在于具有潜在的有时相当大的副作用。已经尝试通过各种治疗方案来改善这种情况。特别是使用免疫治疗剂这种方法，其增加了特别是在肿瘤治疗方面的药物的特异性。免疫毒素(IT)是最初开发用于治疗恶性疾病的蛋白。它们包含毒性效应结构域和肿瘤细胞特异性结合组分，其通常是抗体或其衍生物。最初，抗体组分来自小鼠，而毒素来自细菌或植物，例如，铜绿假单胞菌外毒素A(ETA)(Ribbert,T.,etal.,BrJDermatol,2010；163:p.279-86)、白喉毒素(DT)(Potala,S.,etal.,Drugdiscoverytoday,2008,13:p.807-15)或蓖麻A毒素(RT)(ThepenT.,etal.,Naturebiotechnology,2000,18:p.48-51.)。与传统化疗相比，IT的主要优势在于其具有针对靶细胞的特有的特异性。由与人毒性效应结构域(如促细胞凋亡酶)融合的疾病特异性结合组分(如scFV、细胞因子或肽配体)构成的融合蛋白被称为“人溶细胞融合蛋白”(hCFP)，并已经在几个应用中证明了它们的潜力(Stahnke,B.,etal.,MolCancerTher,2008.7(9):p.2924-32；Huhn,M.,etal.,CancerRes,2001.61(24):p.8737-42；Krauss,J.,etal.,BrJHaematol,2005.128(5):p.602-9；Schiffer,S.,etal.,Antibodies,2013.2(1):p.9-18；Hristodorov,D.,etal.,BrJCancer,2014.109(6):p.1570-1578)。在临床使用中大多数抗癌药物的治疗活性受到其对增殖细胞(包括一些正常细胞)的一般毒性的限制。虽然化学家持续开发具有独特作用机制的新型细胞毒剂，但是许多这些化合物仍然缺乏肿瘤选择性，不具有治疗用途。抗体或其切除片段也意味着IT和hCFP与癌细胞表面的特异性标记结合，其提供了一种对肿瘤具有高度特异性因此具有更低毒性的取代疗法(Chari,RV,Accountsofchemicalresearch,2008,41:p.98-107)。然而，为了获得期望的IT和/或hCFP的细胞毒性作用，靶细胞中的一些处理步骤至关重要。在IT-或hCFP-抗原复合物进行必要的结合和内化之后，随后的细胞内途径和胞质递送是对活性的关键影响(Berges,N.,etal.Antibodies,2014,3(1):p.92-115)。一个例子是使用免疫疗法治疗白血病，其需要在原始细胞表面上靶向特异性抗原。已经对Fcγ受体(FcvRI，CD64)进行了详细研究。CD64靶向免疫疗法已经在急性骨髓性白血病(AML)和慢性骨髓性白血病(CML)细胞的靶向消融中显示出所希望的功效。到目前为止，CD64是唯一被认为适合作为致癌和炎性疾病的免疫治疗的靶标的Fc受体。然而，许多缺乏CD64表达的恶性肿瘤的临床病例(Schiffer,S.,etal.,IntJCancer,2014,135:p.1497-508))排除了进行有效CD64靶向治疗的可能性。此外，IT或hCFP的细胞毒性功效关键依赖于在IT-或hCFP-抗原复合物内化之后所使用的scFv和随后的细胞内途径。因此，所选择的scFv以及所述毒性效应结构域，需要满足多个要求以获得IT或CFP细胞毒性。结果，非常有利的是包含新结合部分的新型IT或人溶细胞融合蛋白的可用性涵盖所有的要求。
技术实现思路
在第一方面，本公开属于适于靶向和杀死人靶细胞，特别是人类癌细胞的选定的和特异性复合物，其包含具有结合结构的第一多肽和具有毒性效应结构域的第二多肽，所述结合结构用于将所述复合物与存在于人靶细胞的细胞表面的细胞表面受体CD89相结合。因此，本公开的实施例提供了细胞毒性重组体IT和人溶细胞融合蛋白(hCFP)，例如其适合于诱导人细胞凋亡，包括靶细胞特异性结合组分和毒性效应结构域，其中所述结合组分包含具有与细胞表面受体CD89结合的抗原结合位点的抗体或抗体片段。在另一方面，本公开的实施例提供了编码复合物的核酸，特别是本文公开的重组融合蛋白，以及包含该核酸的载体和宿主细胞。在其他方面，本公开涉及包含本公开的复合物的组合物，特别是本文所述的重组融合蛋白，其中所述复合物可用作(usefulfor)或用于(usedin)治疗、化妆品和/或诊断的应用。在有利的实施例中，所述组合物用作用于癌症的治疗特别是用于治疗白血病的治疗组合物。在另一方面，本公开的实施例提供了药物或药物组合物，其包含本公开的复合物、以及药理学上可接受的载体、稀释剂、稳定剂或制剂。在另一方面，本公开的实施例涉及用于产生复合物的方法，特别是用于通过用DNA构建体转化宿主细胞来产生宿主细胞中的重组融合蛋白，其有利地是包括在宿主细胞中具有转录活性的启动子，在合适的培养基中培养转化的宿主细胞以允许所述融合蛋白的表达并产生所述融合蛋白。该方法还可以包括分离/纯化所产生的融合蛋白。另一方面属于治疗恶性疾病、过敏、自身免疫反应、组织排斥反应或慢性炎症反应的方法，包括给有需要的患者施加有效剂量的本专利技术的复合物或药物组合物。另一方面涉及适用于检测CD89的多肽，其中所述多肽包含SEQIDNO：1的氨基酸序列，或其同源多肽、变体或突变(mutation)或其片段，所述同源多肽、变体或突变具有与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少85％、优选90％、更优选95％相同的氨基酸，通过重组或合成方法取代、插入、添加或缺失一个或多个氨基酸残基而产生。本公开的另一方面属于用于检测样品中所含的CD89的方法，包括：(a)将样品与根据权利要求16至21中任一项所述的多肽接触，并与将融合标签与所述多肽特异性地结合的融合标签特异性荧光团接触；(b)通过与融合标签特异性荧光团相关联的荧光信号检测样品中CD89的存在。因此，本公开某些方面还涉及用于诊断CD89+恶性肿瘤的方法，其包括向患者施用本文中所述的适于检测CD89的多肽或将取自患者的生物样本与本文所述的适于检测CD89的多肽接触。在详细描述公开内容之前，应当理解，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
适于靶向和杀死人靶细胞的复合物，其包含具有结合结构的第一多肽和包含毒性效应结构域的第二多肽，所述结合结构用于将所述复合物与存在于所述人靶细胞的细胞表面上的细胞表面受体CD89相结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.适于靶向和杀死人靶细胞的复合物，其包含具有结合结构的第一多肽和包含毒性效应结构域的第二多肽，所述结合结构用于将所述复合物与存在于所述人靶细胞的细胞表面上的细胞表面受体CD89相结合。2.根据权利要求1所述的复合物，其中所述结合结构是选自由Fab、scFv、单结构域或其片段、双scFv、Fab2、Fab3、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体和tandab组成的组的抗体或抗体片段。3.根据权利要求1至2中任一项所述的复合物，其中所述毒性效应结构域选自由下述组成的组：蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、包含颗粒酶B、颗粒酶A、颗粒酶H、颗粒酶K和颗粒酶M的颗粒酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、细菌来源的有毒化合物如铜绿假单胞菌外毒素A(ETA)、人水解酶如血管生成素、细胞骨架相关的蛋白如微管相关蛋白tau、光敏剂和植物来源的毒素如蓖麻毒素A及其变体或其功能片段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的复合物，其中结合组分为CD89特异性单链可变片段(scFv)，并且所述毒性效应结构域选自由铜绿假单胞菌外毒素A(ETA)、颗粒酶B、血管生成素和微管相关蛋白质tau组成的组。5.根据权利要求1至4中任一项所述的复合物，其中结合组分包含SEQIDNO：1的氨基酸序列或同源多肽或其片段，所述同源多肽具有与SEQIDNO：1的氨基酸序列至少85％、优选90％、更优选95％相同的氨基酸，其通过重组或合成方法取代、插入、添加或缺失一个或多个氨基酸残基而产生。6.根据权利要求1至5中任一项所述的复合物，其中，所述复合物包含选自SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4和SEQIDNO：5的氨基酸序列，或其同源多肽、变体或突变或其片段，所述同源多肽、变体或突变具有与SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4或SEQIDNO：5的氨基酸序列至少85％、优选90％、更优选95％相同的氨基酸，通过重组或合成方法取代、插入、添加或缺失一个或多个氨基酸残基而产生。7.根据权利要求1至6中任一项所述的复合物，其中所述人靶细胞为癌细胞，特别是恶性骨髓细胞。8.一种用于编码根据权利要求1至7中任一项所述的复合物的分离的核酸分子。9.一种包含权利要求8所述的核酸分子的载体。10.一种用权利要求9所述的载体转化和/或包含权利要求8所述的核酸分子的宿主细胞。11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的复合物、以及...

【专利技术属性】
技术研发人员：克利斯多夫·斯坦，拉多斯拉夫·姆拉德诺夫，伯哈德·斯托克迈尔，斯蒂芬·巴斯，莱亚·克里斯廷·海因，瑞纳尔·费希尔，
申请(专利权)人：弗劳恩霍夫应用研究促进协会，亚琛工业大学，
类型：发明
国别省市：德国,DE