用于快速筛查EGFR基因外显子18‑21突变的特异性引物及应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于快速筛查EGFR基因外显子18‑21突变的特异性引物及其应用方法，包括以下步骤：(1)提取外周血样品基因组DNA；(2)设计合成用于扩增EGFR基因外显子18‑21的特异性引物共4对；(3)使用上述引物对样品基因组DNA进行高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR；(4)曲线分析中得到阳性结果的样本，即发生EGFR基因突变。本发明专利技术的检测方法不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变的分析。操作简便快速，使用成本低，结果准确，能够实现真正的闭管操作。同时针对人群快速筛查，具有高通量、速度快、可试剂盒化、检测成本低等特点。

【技术实现步骤摘要】
用于快速筛查EGFR基因外显子18-21突变的特异性引物及应用
本专利技术涉及基因工程
尤其是涉及一种用于快速筛查EGFR基因外显子18-21突变的特异性引物及其应用。
技术介绍
近年来，我国恶性肿瘤的发生率和病死率呈明显上升趋势，已跃居我国居民死亡病因的首位。然而，对于恶性肿瘤的早期发现、早期诊断以及防治，尚无突破性研究，部分患者就诊时已处于中晚期，疗效较差。因此，提高恶性肿瘤的早期诊断水平，是改善恶性肿瘤诊治疗效的有效出路。目前临床上，多采用血清学检测的方法监测血清或其他体液中的肿瘤标志物，动态地对肿瘤的存在、发生发展及预后做出判断。然而，任何一种科学指标都不是绝对的。肿瘤标志物的器官特异性和肿瘤特异性较差,既存在于肿瘤中也存在于正常人群和非肿瘤患者血液和体液中,每个人对于肿瘤标志物都有各自的基础水平,不能单凭超过参考范围而进行诊断。有时要借助相关辅助检查,对检测结果进行仔细分析后,才能提高对肿瘤的存在、发展及预后的实用价值。同时，肿瘤标志物浓度会受到体内代谢的很多因素影响，所以准确性也会受到影响。以肿瘤标记物甲胎蛋白(AFP)为例，除绝大多数肝癌病人的血清呈阳性外，还有本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于快速筛查EGFR基因外显子18‑21突变的特异性引物，其特征在于，其核苷酸序列分别是：EGFR外显子18正向引物：如SEQ ID No.1所示；EGFR外显子18反向引物：如SEQ ID No.2所示；EGFR外显子19正向引物：如SEQ ID No.3所示；EGFR外显子19反向引物：如SEQ ID No.4所示；EGFR外显子20正向引物：如SEQ ID No.5所示；EGFR外显子20反向引物：如SEQ ID No.6所示；EGFR外显子21正向引物：如SEQ ID No.7所示；EGFR外显子21反向引物：如SEQ ID No.8所示。

【技术特征摘要】
1.用于快速筛查EGFR基因外显子18-21突变的特异性引物，其特征在于，其核苷酸序列分别是：EGFR外显子18正向引物：如SEQIDNo.1所示；EGFR外显子18反向引物：如SEQIDNo.2所示；EGFR外显子19正向引物：如SEQIDNo.3所示；EGFR外显子19反向引物：如SEQIDNo.4所示；EGFR外显子20正向引物：如SEQIDNo.5所示；EGFR外显子20反向引物：如SEQIDNo.6所示；EGFR外显子21正向引物：如SEQIDNo.7所示；EGFR外显子21反向引物：如SEQIDNo.8所示。2.权利要求1所述的特异性引物用于高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR方法快速筛查EGFR基因外显子18-21突变。3.一种快速筛查EGFR基因外显子18-21突变的检测方法，其特征在于，使用权利要求1所述的特异性引物，进行高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)提取外周血样品基因组DNA；(2)合成权利要求1所述的特异性引物共4对；(3)使用上述引物对样品基因组DNA进行高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR，95℃预变性10min，60℃15s，72℃15s，95℃10s，50个循环...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾瀚，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：北京青航基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11