一种稷平脐蠕孢菌菌株、其筛选方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种稷平脐蠕孢菌菌株、其筛选方法及其用途。稷平脐蠕孢菌菌株(SX‑5‑2)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13887。利用该菌株的分生孢子的浓度为每毫升10

【技术实现步骤摘要】
一种稷平脐蠕孢菌菌株、其筛选方法及其用途
本专利技术属于微生物应用于农业植物保护、防除农作物杂草的
，具体涉及一种稷平脐蠕孢菌菌株Bipolarispanici-miliacei(Y.Nisik.)Shoemaker(SX-5-2)、其筛选方法及其用途。
技术介绍
我国是一个拥有14亿人口的农业大国，然而我国的粮食产量还需要以来外国进口来补充，化学农药的大量使用以及作物田杂草的频繁发生严重制约着现代农业的发展。我国农田杂草共有255种，其中大面积发生的约有10种，而这10种中禾本科杂草占40％。牛筋草、狗尾草、稗草、千金子、狗牙根、假俭草、马唐、看麦娘、菵草、早熟禾等是我国重要的农田禾本科杂草，由于其种子的休眠性，早熟性及与作物的共生性，以及其强大的分蘖能力和结实性，收割机割跨区作业都为禾本科杂草的传播提供了良好的条件。纵观中国的农田杂草，具有种类繁多、发生量大、难以防除的特点，而对于禾本科杂草的防除方法也集中于人工除草、机械除草、化学防治等方面。随着人类保护环境和生物多样性意识的提高，特别是在大力倡导可持续发展的今天，农药对农田生态环境和农业生产的危害，已引起世界各国的普遍关注，因而研制生物除草剂成为对抗这些禾本科杂草的新途径。而国内现在尚无有效的生物除草剂来针对这些禾本科杂草，显然将该菌株开发成为生物除草剂会有极为显著的经济和社会效益。柔枝莠竹(Microstegiumvimineum(Trin.)A.Camus)原产于亚洲，在中国分布于安徽、福建、广东、广西、贵州、河南、湖北、湖南、江苏、江西、四川、山东、台湾、云南、西藏和浙江省，其生存和生长跨越各种各样的环境条件，主要发生在潮湿，阴暗的地区，如森林边缘，潮湿的草原，旷野，湿地，作物田边缘，沟渠，树篱和峡谷，也偶尔发生在花园和农田，会形成高密度、几近单一的植物群落，一种在森林环境中长势茂盛的独特的C4一年生杂草。自1919年在美国田纳西州第一次发现柔枝莠竹，它目前散布在整个美国东南部，其侵入森林下层和挤出原生植被的能力使得柔枝莠竹已经成为美国严重的外来入侵植物。它对森林水文，碳储存和营养循环以及对植物群落组成和功能都有负面影响，在经历建立新种群，杂交，以及对新环境的适应和其它过程后其基因发生改变，导致原产地和入侵地柔枝莠竹生长和形态特征之间的重大遗传差异，增加了柔枝莠竹的活力和适应性，再加上菌根刺激分枝和气生根的形成，使其入侵更为严重。目前商业化的生物除草剂有80年代出研制的DeVine和Collego以及90年代末推出的Camperico和Biochon，这些除草剂在控制相应的目标杂草上起到了重要作用，甚至是唯一的选择。如Devine的持效性可以保证使用一次，2～3年无需再除草。在已被研究的候选生防真菌又相对集中在如下几个属：炭疽菌属(Colletotrichum)有18种，镰刀菌属(Fusarium)13种，链格孢菌属(Alternaria)12种和尾孢菌属(Cercospora)8种，柄锈菌属(Puccinia)，核盘菌属(Sclerotinia)，叶黑粉菌属(Entyloma)，壳单胞菌属(Ascochyta)。目前成功用于作物生产并申请专利的主要有炭疽菌属(Colletotrichumspecies)(US3,849,104和US3,999,973)；镰刀菌属(Fusariumspecies)(US4,419,120)；链格孢属(Alternariaspecies)(US4,390,360)；壳单孢菌属(Ascochytaspecies)(US4,915,724)以及核盘菌属(Selerotiniaspecies)(CAOZ,292,233)；小菌核菌属(Sclerotiumrolfsii)(SC64)等。目前国内对于平脐蠕孢属已有狗尾草平脐蠕孢和玉蜀黍平脐蠕孢用于生物除草剂的专利，没有稷平脐蠕孢菌的申报，也没有其运用在作物田禾本科杂草和草坪杂草以及柔枝莠竹及其近缘种的生物防除。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对水稻、小麦、高粱、大豆、棉花、蔬菜作物田的禾本科杂草马唐、牛筋草、狗尾草、稗草、千金子、看麦娘、早熟禾等，高羊茅、结缕草草坪的狗牙根、假俭草等杂草以及柔枝莠竹及其近缘种植物油芒、芒、金茅、日本莠竹、荩草、苏丹草等禾本科植物。筛选一种稷平脐蠕孢菌菌株，用于生物除草，安全、高效，成本低，无污染，对农作物安全。为达成以上目的，本专利技术公开了一种稷平脐蠕孢菌菌株、其筛选方法及其用途，采用的技术方案如下：一种稷平脐蠕孢菌菌株，所述菌株为稷平脐蠕孢菌菌株SX-5-2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.13887。上述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途。优选的，上述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途为：利用所述稷平脐蠕孢菌菌株的分生孢子的浓度为每毫升104个以上，接种于目标杂草上。优选的，所述杂草为禾本科杂草。优选的，所述禾本科杂草包括狗牙根、早熟禾、假俭草、马唐、看麦娘、菵草、牛筋草、狗尾草、柳枝稷、稗草、千金子、柔枝莠竹及其近缘属植物。优选的，所述柔枝莠竹近缘属植物包括油芒、芒、金茅、日本莠竹、荩草、苏丹草。一种除草组合物，包含稷平脐蠕孢菌菌株SX-5-2，保藏编号为CGMCCNO.13887；以及农药学上可接受的载体。优选的，所述载体包括表面活性剂、稳定剂。优选的，所述表面活性剂为吐温20、吐温80、菜籽油和卵磷脂；所述稳定剂为抗氧化剂或pH调节剂，包括明胶和阿拉伯树胶。一种稷平脐蠕孢菌菌株的筛选方法，包括以下步骤：步骤1)将该菌株于28℃黑暗培养箱培养4天，采用真菌gDNA提取试剂盒提取DNA，分别利用rDNAITS序列和GPDH序列进行PCR扩增，其通用引物分别为ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGC-3’)、ITS2(5’-CCTTGTAAGTTTCTTTTCCTCC-3’)和gpd1(5’-CAACGGCTTCGGTCGCATTG-3’)、gpd2(5’-GCCAAGCAGTTGGTTGTGC-3’)；步骤2)将步骤1)得到的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳回收，连接至pMD19载体，转化大肠杆菌DH5α，经过蓝白斑筛选，挑取白色菌落，摇菌，得到菌液；步骤3)将步骤2)制得的菌液进行测序，所测结果在Genbank中核酸数据库的ITS和GPDH相关序列进行同源性比较；步骤4)经扩增测序比对后，ITS扩增序列(MF083601)与B.panici-miliacei模式菌株(KJ909773)的同源性为99％，GPDH扩增序列(MF112228)与B.panici-miliacei模式菌株(KM042896)同源性为99％，确定菌株为稷平脐蠕孢菌。本专利技术的主要优点和积极效果如下：1、稷平脐蠕孢菌柔枝莠竹专化型菌剂用于生物除草可以在作物与禾本科杂草间进行安全地选择。本专利技术的除草剂对环境友好，可抑制杂草的耐药和抗药性发展，有利于绿色食品和有机农业的推广，并且成本低、无污染、对农作物安全。在供试的17科57种植物中，对稷平脐蠕孢菌很敏感的有12种，敏感的有7种，稍敏感的有5种，不敏感的有33种，其中有敏感性的植物大都集中在禾本科，对于其他科植物如菊科、旋花科、唇形科、十本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稷平脐蠕孢菌菌株，其特征在于，所述菌株为稷平脐蠕孢菌菌株SX‑5‑2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13887。

【技术特征摘要】
1.一种稷平脐蠕孢菌菌株，其特征在于，所述菌株为稷平脐蠕孢菌菌株SX-5-2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.13887。2.权利要求1所述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途。3.根据权利要求2所述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，利用所述稷平脐蠕孢菌菌株的分生孢子的浓度为每毫升104个以上，接种于目标杂草上。4.根据权利要求3所述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述杂草为禾本科杂草。5.根据权利要求4所述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述禾本科杂草包括狗牙根、早熟禾、假俭草、马唐、看麦娘、菵草、牛筋草、狗尾草、柳枝稷、稗草、千金子、柔枝莠竹及其近缘属植物。6.根据权利要求5所述的稷平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述柔枝莠竹近缘属植物包括油芒、芒、金茅、日本莠竹、荩草、苏丹草。7.一种除草组合物，其特征在于，包含稷平脐蠕孢菌菌株SX-5-2，保藏编号为CGMCCNO.13887；以及农药学上可接受的载体。8.根据权利要求7所述的一种除草组合物，其特征在于，所述载体包括表面活性剂、稳定剂。9.根据权利要求8所述的一种除草组合物，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20、...

【专利技术属性】
技术研发人员：强胜，丁如意，黄琼，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32