从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法技术

本发明专利技术涉及从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法。具体地说，从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，其包括以下步骤：(1)血小板富集；(2)血小板裂解物制备，根据血小板浓度将步骤(1)富集的血小板样本稀释；化学裂解：按照沉淀体积：激活剂＝1：5‑10进行血小板激活；室温静止，进行离心，分别收集上清液和沉淀，上清液至4摄氏度冰箱保存；物理裂解：将上一步骤收集的沉淀进行37摄氏度/‑80摄氏度反复冻融三次裂解，得裂解物；将上面步骤收集的上清液和裂解后产物充分混匀得裂解物；(3)血小板源性活性因子冻干与保存。还涉及一种冻干粉。本发明专利技术方法具有如本发明专利技术说明书所述有益效果。

A method of enriching platelets from the placenta and extracting active factors

The present invention relates to a method of enriching platelets from the placenta and extracting active factors. Specifically, the enrichment and extraction method of platelet activating factor from human placenta, which comprises the following steps: (1) platelet accumulation; (2) platelet lysate preparation, according to the platelet concentration in step (1) enrichment of platelet sample dilution; chemical cleavage: according to the precipitation volume: 1:5 = 10 activator platelet activation; static at room temperature, centrifugation, supernatant and precipitation were collected, the supernatant to 4 degrees Celsius refrigerator; physical: a cleavage step of collecting precipitation was 37 degrees Celsius to 80 degrees Celsius / repeated freezing and thawing three times to lysis lysate; and supernatant was collected after the above steps cracking product fully mix to lysate; (3) the platelet-derived factor activity and frozen preservation. It also involves a kind of freeze-dried powder. The method of the invention has the beneficial effect as described in the invention specification.

【技术实现步骤摘要】
从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法
本专利技术属于生物
，涉及从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，特别是涉及从来源于自体的胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法。本专利技术制得的活性因子可以搭配溶媒，直接用于美容护肤方面，包括美容、祛斑、修复疤痕等，或者添加到各种制剂的美容护肤产品中。这些制剂产品可以包括针剂、面霜、乳液、水液、或常见的各种制剂。本专利技术制得的活性因子还可以直接涂抹受损皮肤表面或微针注射，用于创伤愈合。
技术介绍
近年来，随着对间充质干细胞研究的不断深入，其分泌因子已成为研究者们的热点。间充质干细胞可以分泌多种具有生物活性的细胞因子，这些细胞因子可有效地调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞。干细胞在美容中的应用，最早是干细胞在整形外科中的运用，它是目前研究较多的一种干细胞美容技术。而在整形外科中应用得较多的干细胞种类主要亦是人脐带间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞等。传统上所谓的干细胞美容术，一般都是直接注射干细胞针剂。而这种注射用干细胞的来源主要是从流产的胚胎中提取的，所以难免会引起免疫排斥反应，而且存在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，其包括以下步骤：(1)血小板富集11)将胎盘放入无菌托盘中，弃除血污块；12)用无菌的剪刀将胎盘剪碎，并用0.9％氯化钠生理盐水进行组织表面和内部冲洗，挤压收集胎盘血后，弃除组织；13)将上一步骤收集的胎盘血经无菌的300目滤网过滤，混匀后取样进行血常规检测；14)将上一步骤经过滤的胎盘血收集至250ml离心瓶中，500‑2000g，10‑15min离心，收集上清；15)将上一步骤收集的上清转移至新的50ml离心管中，2400‑5000g，10‑20min离心后，收集沉淀，弃上清；16)将上一步骤收集的沉淀进行重悬，得到血小板样本，取样进行血常规检测(主...

【技术特征摘要】
1.从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，其包括以下步骤：(1)血小板富集11)将胎盘放入无菌托盘中，弃除血污块；12)用无菌的剪刀将胎盘剪碎，并用0.9％氯化钠生理盐水进行组织表面和内部冲洗，挤压收集胎盘血后，弃除组织；13)将上一步骤收集的胎盘血经无菌的300目滤网过滤，混匀后取样进行血常规检测；14)将上一步骤经过滤的胎盘血收集至250ml离心瓶中，500-2000g，10-15min离心，收集上清；15)将上一步骤收集的上清转移至新的50ml离心管中，2400-5000g，10-20min离心后，收集沉淀，弃上清；16)将上一步骤收集的沉淀进行重悬，得到血小板样本，取样进行血常规检测(主要用于富集后血小板含量检测，一般富集后血小板浓度是富集前的15-80倍，即富集系数为15-80倍，示例性的结果见表1)；(2)血小板裂解物制备21)根据血小板浓度将步骤(1)富集的血小板样本稀释2-20倍；22)化学裂解：按照沉淀体积：激活剂(例如，其中含有氯化钙、葡萄糖酸钙或凝血酶)＝1：5-10进行血小板激活；23)室温静止0.5-1小时后(例如间隔20min进行混合一次)，进行3000-5000g离心，5-10min，分别收集上清液和沉淀，上清液至4摄氏度冰箱保存；24)物理裂解：将上一步骤收集的沉淀进行37摄氏度/-80摄氏度反复冻融三次裂解，间隔10min-15min/次，得裂解物；25)将上面步骤收集的上清液和裂解后产物充分混匀得裂解物；(3)血小板源性活性因子冻干与保存以-80摄氏度冰箱直接冻存，或者制成冻干粉；制成冻干粉时在裂解物溶液中添加重量/体积百分数为0.5％-6％的冻干保护剂，或者不添加冻干保护剂(示例性的，冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、壳聚糖或其组合)，分装至1-2.5ml/支，冷冻干燥成干粉剂。2.根据权利要求1的方法，其中在对活性因子进行冻干时，依次进行两步干燥：冷冻干燥、解析干燥。3.根据权利要求1的方法，其中在对活性因子进行冻干时，冻干机使用程序：预冷冻：3.5h(冻干机程序里有预冷冻温度，无需自己设定，预冷冻无需开启真空泵)——>冷冻干燥a：-40度2h，(真空泵会在程序下自动开启，真空度值为0.014mbar)——>冷冻干燥b：-22度12h(主要的干燥步骤)——>0度2h(作为冷冻干燥到解析干燥的过渡)解析干燥：35度2-5h。4.根据权利要求1的方法，其中胎盘储存样本的采集包括如下步骤：在手术室无菌环境下，胎盘储存盒取出打开，取出无菌采集袋；新生儿娩出后，在距新生儿脐部10cm处用两把止血钳夹住脐带；从两钳间剪断脐带，结扎，消毒；胎盘放入无菌采集袋中，加入胎盘保护液；无菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李诣书，王芳，周丹，梅俊，尚聪，汤乐，
申请(专利权)人：博雅干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32