一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法技术

一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌(Metarhizium guizhouense)菌种进行种子培养；步骤(2)，摇瓶培养菌种；步骤(3)，初步发酵；步骤(4)，深度发酵；步骤(5)，制备菌悬液；步骤(6)，将步骤(5)得到的菌悬液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素混合均匀，干燥即得所述的长效生物杀线虫组合物。本发明专利技术采用了具有优异杀线虫剂能力的金龟子绿僵菌，并在制备过程中，将其菌液吸附于活性炭上，部分菌液吸附于活性炭孔道内部，施用后缓慢释放，使得本发明专利技术具备长效杀线虫作用。

Preparation of a long-acting nematode combiner

Includes a method for preparing long-acting biological nematicidal agent combination: step (1), the cryopreservation of Metarhizium anisopliae (Metarhizium guizhouense) strains of seed cultivation; step (2), shake flask culture; step (3), primary fermentation; step (4), the depth of fermentation; step (5), the preparation of bacterial suspension; step (6), the step (5) obtained bacterial suspension with horseradish, chlorothalonil, citric acid and azadirachtin mixing, drying to obtain the long-term biological nematicidal compositions. The invention adopts Metarhizium anisopliae with excellent nematode killing ability, and in its preparation process, it adsors bacterial liquid on activated carbon, and some bacteria liquid is adsorbed on the activated carbon pore, and then slowly released after application, so that the invention has the long-term nematode killing effect.

【技术实现步骤摘要】
一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法
本专利技术涉及农业杀线虫药剂制备领域，具体涉及一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法。
技术介绍
在农业生产活动中，农业作物经常受到病害，导致大量减产。植物寄生线虫的危害超过细菌和病毒，仅次于真菌病害。植物寄生线虫每年造成世界农业生产的损失约1000亿美元，其中根结线虫是危害最大的一类植物寄生线虫，每年仅对世界上重要的经济作物造成的经济损失就高达数百亿美元。线虫对大多数的粮食作物、油料作物、纤维作物、烟草、茶叶、果树、蔬菜、药材和花卉等均可造成严重损失。在控制线虫病害的方法中，由于根结线虫通常存活于土壤中和植物根内，所以一般化学农药难以控制其危害，剧毒农药又对农产品生产的安全性构成严重威胁，而化学杀线虫剂只能在短期内控制线虫数量，同时还存在成本高、持效短和抗药性等问题。此外，一些传统的防治方法，如轮作、种植抗病品种等虽可起到一定的防治作用，但在实际生产中能够轮作的作物并不多，对根结线虫具有抗性的作物品种十分有限。微生物杀虫剂具有对人畜安全、对天敌昆虫无害、选择性高、对环境影响小、不易产生抗药性等特点而受到越来越多的重视。但是现有技术中的生物杀线虫剂的作用效果短期较为明显，时间久了，杀线虫能力几乎无存。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种长效生物杀线虫组合剂。本专利技术的长效生物杀线虫组合剂具有高效杀线虫，且持续有效的优点。本专利技术的技术方案如下。一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌(Metarhiziumguizhouense)菌种转接至PDA培养基斜面上，25-35℃条件下培养2-4天，实现菌种的充分活化，活化培养后的菌种接种摇瓶进行种子培养；步骤(2)，选定摇瓶培养基，其组成为葡萄糖1-5重量份、MgSO40.1-0.6重量份、KCl0.1-0.3重量份、ZnSO40.2-0.3重量份、K2HPO40.1-0.9重量份、琼脂1-3重量份、K2HPO40.1-0.9重量份和蒸馏水20-50重量份；摇瓶接种时采用培养基直接接种摇瓶，摇瓶培养的参数如下：摇床转速为150rpm，培养温度为29-30℃，时间为48-70h；即得菌种；步骤(3)，准备初步发酵液体培养基，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖10-15重量份，酵母1-6重量份，MgSO41-5重量份，KCl0.2-2重量份，ZnSO40.2-3重量份，蒸馏水200-2000重量份；将种子罐灭菌进行初步发酵，接种条件为：培养基121℃灭菌30min，此时pH范围在6.0-6.5；发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下，发酵时间为18-24小时；初步发酵所得种子液呈粘稠状，孢子含量达到6×107/ml以上；步骤(4)，准备深度发酵液体培养基，所述深度发酵液体培养基包括葡萄糖20-50重量份，酵母10-15重量份，MgSO46-10重量份，KCl5-9重量份，ZnSO43-7重量份，农作物秸秆50-200重量份和蒸馏水500-3000重量份；深度发酵的生产罐灭菌、接种条件具体为：培养基经121℃灭菌30min，发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下；发酵温度28±1℃，发酵周期为42-50小时；深度发酵所得菌液中液生孢子含量在5×108/ml以上；步骤(5)，将步骤(4)所得到的菌液在发酵罐中搅拌，分散菌丝以及孢子，加入菌液重量10-28％重量的活性炭以及菌液重量0.01-2％的吐温60，搅拌，制备成菌悬液备用；步骤(6)，将步骤(5)得到的菌悬液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素按照1-2∶0.1-0.8∶0.2-0.5∶0.01-0.2∶0.5-1.2混合均匀，干燥即得所述的长效生物杀线虫组合物。优选的，步骤(2)中，摇瓶培养基组成为葡萄糖2重量份、MgSO40.5重量份、KCl0.2重量份、ZnSO40.2重量份、K2HPO40.6重量份、琼脂2重量份、K2HPO40.5重量份和蒸馏水30重量份。优选的，步骤(3)中，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖12重量份，酵母3重量份，MgSO43重量份，KCl1重量份，ZnSO41重量份，蒸馏水1000重量份。优选的，步骤(4)中，所述深度发酵液体培养基包括葡萄糖30重量份，酵母12重量份，MgSO48重量份，KCl6重量份，ZnSO45重量份，农作物秸秆100重量份和蒸馏水2000重量份。优选的，步骤(6)中，步骤(4)得到的菌悬液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素按照1∶0.5∶0.4∶0.1∶0.8混合均匀。本专利技术进一步请求保护一种长效生物杀线虫组合剂，其上述制备方法得到。所述的一种长效生物杀线虫组合剂的应用，将其置于作物根部使用。本专利技术取得了显著的技术进步。本专利技术采用了具有优异杀线虫剂能力的金龟子绿僵菌，并在制备过程中，将其菌液吸附于活性炭上，部分菌液吸附于活性炭孔道内部，施用后缓慢释放，使得本专利技术具备长效杀线虫作用。本专利技术通过与将金龟子绿僵菌的菌液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素复配，克服了单一的生物杀线虫剂存在的功能单一的问题，提高的杀线虫能力，减轻了线虫病害的危害，辣根素通过其有机质在分解过程中产生挥发性气体消灭或抑制土壤中有害生物，尤其对根结线虫病的抑制作用、效果好，印楝素可使根结线虫拒食并抑制根结线虫生长发育，干扰根结线虫内分泌，百菌清使得幼虫不能正常生长而导致死亡加入的柠檬酸能够提供上述杀线虫剂良好的发挥作用的pH环境，提高了杀虫能力，本专利技术中，金龟子绿僵菌的菌液与辣根素、百菌清、柠檬酸以及印楝素配合协同作用，并合理控制组分比例，制品对线虫的杀虫效果极为优异，且成本较低，方法简单，对环境和作物友好没有任何污染，深度发酵时使用了作物秸秆，降低制品成本。本专利技术的长效生物杀线虫组合剂具有高效杀线虫，且持续有效的优点。具体实施方式下面结合具体实施方式进一步详述本专利技术的技术方案。实施例1一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌(Metarhiziumguizhouense)菌种转接至PDA培养基斜面上，35℃条件下培养4天，实现菌种的充分活化，活化培养后的菌种接种摇瓶进行种子培养；步骤(2)，选定摇瓶培养基，其组成为葡萄糖5重量份、MgSO40.6重量份、KCl0.3重量份、ZnSO40.3重量份、K2HPO40.9重量份、琼脂3重量份、K2HPO40.9重量份和蒸馏水50重量份；摇瓶接种时采用培养基直接接种摇瓶，摇瓶培养的参数如下：摇床转速为150rpm，培养温度为30℃，时间为70h；即得菌种；步骤(3)，准备初步发酵液体培养基，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖15重量份，酵母6重量份，MgSO45重量份，KCl2重量份，ZnSO43重量份，蒸馏水2000重量份；将种子罐灭菌进行初步发酵，接种量和接种温度具体为：121℃灭菌30min，此时pH范围在6.5；发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃，发酵时间为24小时；初步发酵所得种子液呈粘稠状，孢子含量达到6×107/ml以上；步骤(4)，准备深度发酵液体培养基，所述深度发酵液体培养基包括葡萄糖50重量份，酵母15重量份，MgSO410重量份，KCl9重量份，ZnSO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，其特征在于，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌菌种转接至PDA培养基斜面上，25‑35℃条件下培养2‑4天，实现菌种的充分活化，活化培养后的菌种接种摇瓶进行种子培养；步骤(2)，选定摇瓶培养基，其组成为葡萄糖1‑5重量份、MgSO4 0.1‑0.6重量份、KCl 0.1‑0.3重量份、ZnSO4 0.2‑0.3重量份、K2HPO4 0.1‑0.9重量份、琼脂1‑3重量份、K2HPO4 0.1‑0.9重量份和蒸馏水20‑50重量份；摇瓶接种时采用培养基直接接种摇瓶，摇瓶培养的参数如下：摇床转速为150rpm，培养温度为29‑30℃，时间为48‑70h；即得菌种；步骤(3)，准备初步发酵液体培养基，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖10‑15重量份，酵母1‑6重量份，MgSO4 1‑5重量份，KCl 0.2‑2重量份，ZnSO4 0.2‑3重量份和蒸馏水200‑2000重量份；将种子罐灭菌进行初步发酵，接种条件具体为：培养基121℃灭菌30min，此时pH范围在6.0‑6.5；发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下，发酵时间为18‑24小时；初步发酵所得种子液呈粘稠状，孢子含量达到6×10...

【技术特征摘要】
1.一种长效生物杀线虫组合剂的制备方法，其特征在于，包括：步骤(1)，将低温保存的金龟子绿僵菌菌种转接至PDA培养基斜面上，25-35℃条件下培养2-4天，实现菌种的充分活化，活化培养后的菌种接种摇瓶进行种子培养；步骤(2)，选定摇瓶培养基，其组成为葡萄糖1-5重量份、MgSO40.1-0.6重量份、KCl0.1-0.3重量份、ZnSO40.2-0.3重量份、K2HPO40.1-0.9重量份、琼脂1-3重量份、K2HPO40.1-0.9重量份和蒸馏水20-50重量份；摇瓶接种时采用培养基直接接种摇瓶，摇瓶培养的参数如下：摇床转速为150rpm，培养温度为29-30℃，时间为48-70h；即得菌种；步骤(3)，准备初步发酵液体培养基，所述初步发酵液体培养基包括：葡萄糖10-15重量份，酵母1-6重量份，MgSO41-5重量份，KCl0.2-2重量份，ZnSO40.2-3重量份和蒸馏水200-2000重量份；将种子罐灭菌进行初步发酵，接种条件具体为：培养基121℃灭菌30min，此时pH范围在6.0-6.5；发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下，发酵时间为18-24小时；初步发酵所得种子液呈粘稠状，孢子含量达到6×107/ml以上；步骤(4)，准备深度发酵液体培养基，所述深度发酵液体培养基包括葡萄糖20-50重量份，酵母10-15重量份，MgSO46-10重量份，KCl5-9重量份，ZnSO43-7重量份，农作物秸秆50-200重量份和蒸馏水500-3000重量份；深度发酵的生产罐灭菌、接种条件具体为：培养基经121℃灭菌30min，发酵液按罐装量的4％体积比接种，接种温度为30℃以下；发酵温度28±1℃，发酵周期为42-50小时；深度发酵所得菌液中液...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏永侠，屈庆涛，孙瑞，
申请(专利权)人：北京中农富源生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11