携带基孔肯亚相关肽的纳米胶囊制造技术

本发明专利技术涉及包含病毒蛋白质或其片段的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段被包封在自组装蛋白质纳米胶囊内，优选铁蛋白，并且其中所述病毒蛋白质或其片段选自披膜病毒科的病毒。所述病毒蛋白质或其片段还可进一步选自甲病毒亚科的病毒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】携带基孔肯亚相关肽的纳米胶囊相关申请的交叉引用本申请要求2015年1月29日提交的新加坡临时申请号10201500725U的优先权的权益，该新加坡临时申请的内容出于所有目的在此以引用方式整体并入。
本专利技术大体上涉及纳米
具体地说，本专利技术涉及用于肽递送的纳米胶囊。
技术介绍
基孔肯亚病毒(CHIKV)是一种人类病原体，并且是非洲、印度和东南亚部分地区蚊媒性关节痛的主要原因之一。同一名称基孔肯亚疾病是由携带基孔肯亚病毒(CHIKV)的伊蚊属蚊子传播的。由于基孔肯亚症状与登革热非常相似，因此经常被误诊。在2006年，印度报道了共数1,390,322的疑似基孔肯亚热病例。该疾病在新加坡直到2008年才为人所知，当时新加坡经历了其连续第一波的基孔肯亚热病。根据新加坡卫生部和海峡时报，过去五年的感染总数约为1500人。没有具体的治疗或任何经过许可的疫苗来预防基孔肯亚，这种疾病仍然是公共健康的威胁。因此，需要开发针对基孔肯亚病毒引起的疾病的有效疫苗。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术涉及包含病毒蛋白质或其片段的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段被包封在纳米胶囊内，并且其中所述病毒蛋白质或其片段选自披膜病毒科(Togaviridae)的病毒。在一个方面，本专利技术涉及诱发受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用如本文所述的组合物。在另一方面，本专利技术涉及用于预防由选自由以下组成的组的病原引起的感染的疫苗：基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒、奥拉病毒、巴班肯病毒、巴马森林病毒、贝巴鲁病毒、博吉河病毒、卡巴斯欧病毒、东方马脑脊髓炎病毒、沼泽病毒、摩根堡病毒、盖塔病毒、高地J病毒、Kyzykagach病毒、马亚罗病毒、米德尔堡病毒、莫斯达斯佩德拉斯病毒、穆坎博病毒、恩杜茂病毒、奥克尔布病毒、帕拉马纳病毒、皮克孙纳甲病毒、里奥内格罗病毒、图那特病毒、特罗卡拉病毒、鹭山病毒、睡眠病病毒、鲑鱼胰腺病病毒、南方象海豹病毒、乌纳病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒、西马脑脊髓炎病毒、沃达罗河病毒和罗斯河病毒基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒和罗斯河病毒，所述疫苗包含如本文所述的组合物。在再一方面，本专利技术涉及预防或改善由选自由以下组成的组的病原引起的感染的方法：基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒、奥拉病毒、巴班肯病毒、巴马森林病毒、贝巴鲁病毒、博吉河病毒、卡巴斯欧病毒、东方马脑脊髓炎病毒、沼泽病毒、摩根堡病毒、盖塔病毒、高地J病毒、Kyzykagach病毒、马亚罗病毒、米德尔堡病毒、莫斯达斯佩德拉斯病毒、穆坎博病毒、恩杜茂病毒、奥克尔布病毒、帕拉马纳病毒、皮克孙纳甲病毒、里奥内格罗病毒、图那特病毒、特罗卡拉病毒、鹭山病毒、睡眠病病毒、鲑鱼胰腺病病毒、南方象海豹病毒、乌纳病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒、西马脑脊髓炎病毒、沃达罗河病毒和罗斯河病毒基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒和罗斯河病毒，所述方法包括向受试者施用如本文所述的组合物。在又一方面，本专利技术涉及包含编码如本文所述的病毒蛋白质或其片段、如本文所述的接头序列和如本文所述的支架蛋白质的基因的核酸序列。在再又一方面，本专利技术涉及包含如本文所述的核酸序列的载体。在一个方面，本专利技术涉及包含如本文所述的载体的分离的宿主细胞。在另一方面，本专利技术涉及生产如本文所述的组合物的方法，所述方法包括分离由如本文所述的载体表达的蛋白质，和添加足以催化纳米胶囊形成的量的催化剂。附图说明当结合非限制性实施例和附图考虑时，参考具体实施方式将更好地理解本专利技术，其中：图1显示基孔肯亚病毒组合物/疫苗的基因结构域布置的示意图，所述基孔肯亚病毒组合物/疫苗包含表位(例如CHIKV表位)、接头序列(例如SGG)和支架蛋白质(例如铁蛋白)。NdeI、NHeI和BamHI是所述序列内或末端的限制位点。图2显示病毒基孔肯亚糖蛋白E2的示意性蛋白质建模图像，其显示各种蛋白质结构以及E2EP3表位的空间取向。图3显示分别由(A)野生型(AfFtn)和(B)突变型(AfFtn-AA)闪烁古生球菌(Archaeoglobulusfulgidus)铁蛋白形成的四级蛋白质结构的示意图。野生型铁蛋白(AfFtn；SEQIDNO:15或SEQIDNO:16)具有每六个亚单位具有三角形开口(直径约为)的独特的二十四聚体结构，而突变的铁蛋白AfFtn-AA是来自所述野生型的突变蛋白质，其中150位的氨基酸残基赖氨酸和151位的氨基酸残基精氨酸均被丙氨酸替代。作为突变的结果，AfFtn-AA具有封闭的球形结构。图4显示概括定点诱变的潜在机制的一般示意图。图5显示闪烁古生球菌铁蛋白蛋白质的示意图。单个亚单位的N-末端已被以较暗的阴影标记。在进行成功的亚单位生产和随后的24聚体组装后，附着的病毒表位应当从铁蛋白结构从每个亚单位的N末端突出出来。图6显示用于生产如本公开中所述的组合物的实验程序的示意性概图。图7显示不同构建体在LB琼脂板上生长的图像。(A)显示氨苄青霉素板上用pCVAf-IDT质粒转化的DH5α细胞的集落形成。(B)显示氨苄青霉素板上用pCVcAf-IDT质粒转化的DH5α细胞的集落形成。(C)显示在没有选择抗生素的LB琼脂上空白DH5α细胞的集落形成，其显示DH5α细胞是活的并且能够在LB琼脂板上生长。(D)显示具有氨苄青霉素的LB琼脂板上没有DH5α细胞(阴性对照)的集落形成。图8显示定点诱变后的pCVAf的测序结果(顶线)与理论DNA(底线)序列的比较。加框部分显示已发生诱变的位点。图9显示描绘pET-11a载体上的pCV-AfFtn-AA和pCVc-AfFtn-AA在BL21(DE3)CodonPlus-RIL细胞中的基因过表达的生长曲线的线图。图10显示疏水性生物分子在柱中的保留的示意图。图11显示比较用于动态光散射分析(DLS)的较大和较小粒子的光散射背后的理论的示意图。图12显示描绘批次1过表达后的结果的SDS-PAGE凝胶的图像。A：具有IPTG的pCVAf-pET11a/BL21B：具有IPTG的pCVcAf-pET11a/BL21C：pCVAf-pET11a/BL21D：pCVcAf-pET11a/BL21。图13显示代表BSA标准曲线的线图。图14显示描绘批次1上清液的热稳定性测试的结果的SDS-PAGE凝胶的图像。图15显示描绘批次2样品的热稳定性测试的结果的SDS-PAGE凝胶的图像。图16显示示出具有0.5M硫酸铵的7mLCVAf的疏水相互作用色谱(HIC)的色谱图的图(A)和描绘具有0.5M硫酸铵的7mLCVAf的相应SDS-PAGE结果的图像(B)。图17显示示出具有0.5M硫酸铵的8mLCVcAf的疏水相互作用色谱(HIC)的色谱图的图(A)和描绘具有0.5M硫酸铵的8mLCVcAf的相应SDS-PAGE结果的图像(B)。图18显示示出具有0.5M硫酸铵的13mLCVAf的疏水相互作用色谱(HIC)的色谱图的图(A)和描绘具有0.5M硫酸铵的13mLCVAf的相应SDS-PAGE结果的图像(B)。图19显示示出具有1M硫酸铵的15mLCVcAf的HIC结果的图(A)和描绘具有1M硫酸铵的15mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含病毒蛋白质或其片段的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段被包封在纳米胶囊内，并且其中所述病毒蛋白质或其片段选自披膜病毒科(Togaviridae)的病毒。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.29 SG 10201500725U1.一种包含病毒蛋白质或其片段的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段被包封在纳米胶囊内，并且其中所述病毒蛋白质或其片段选自披膜病毒科(Togaviridae)的病毒。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段选自由甲病毒属(alphavirus)和风疹病毒属(Rubivirus)组成的组。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述甲病毒属选自由以下组成的组：基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒、奥拉病毒、巴班肯病毒、巴马森林病毒、贝巴鲁病毒、博吉河病毒、卡巴斯欧病毒、东方马脑脊髓炎病毒、沼泽病毒、摩根堡病毒、盖塔病毒、高地J病毒、Kyzykagach病毒、马亚罗病毒、米德尔堡病毒、莫斯达斯佩德拉斯病毒、穆坎博病毒、恩杜茂病毒、奥克尔布病毒、帕拉马纳病毒、皮克孙纳甲病毒、里奥内格罗病毒、图那特病毒、特罗卡拉病毒、鹭山病毒、睡眠病病毒、鲑鱼胰腺病病毒、南方象海豹病毒、乌纳病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒、西马脑脊髓炎病毒、沃达罗河病毒和罗斯河病毒。4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述甲病毒属选自由基孔肯亚病毒、奥-奈氏病毒、塞姆利基森林病毒、辛德毕斯病毒和罗斯河病毒组成的组。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述甲病毒属是基孔肯亚病毒。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段是所述基孔肯亚病毒的表位。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段是针对选自由E2EP3(SEQIDNO:1)、E2EP4(SEQIDNO:3)、E2EP5(SEQIDNO:IDNO：4)和CV(SEQIDNO:6)组成的组的序列的共有序列。8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段与选自由E2EP3(SEQIDNO:1)、E2EP4(SEQIDNO:3)、E2EP5(SEQIDNO:4)和CV(SEQIDNO:6)组成的组的病毒蛋白质或其片段具有至少约70％、约80％、约90％、约92％、约95％、约97％、约98％或约99％的同一性。9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段选自由E2EP3(SEQIDNO:1)、E2EP3突变体(SEQIDNO:2)、E2EP4(SEQIDNO:3)、E2EP5(SEQIDNO:4)、E2EP5突变体(SEQIDNO:5)和CV(SEQIDNO:6)组成的组。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段与选自由E2EP3(SEQIDNO:7)、E2EP4(SEQIDNO:9)、E2EP5(SEQIDNO:10)和CV(SEQIDNO:12)组成的组的病毒蛋白质或其片段相差至少1个、至少2个或至少3个氨基酸。11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述病毒蛋白质或其片段选自由E2EP3(SEQIDNO:7)、E2EP3突变体(SEQIDNO:8)、E2EP4(SEQIDNO:9)、E2EP5(SEQIDNO:10)、E2EP5突变体(SEQIDNO:11)和CV(SEQIDNO:12)组成的组。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纳米胶囊包含仅一种类型的病毒蛋白质或其片段，或其中所述纳米胶囊包含2种或3种或4种或更多种病毒蛋白质或其片段。13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述纳米胶囊是纳米笼。14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述纳米胶囊是由选自由铁蛋白、脱铁铁蛋白和细菌铁蛋白组成的组的支架蛋白质形成的。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述支架蛋白质是从选自由哺乳动物、人科、马科、骆驼科、鼠科、细菌和古细菌组成的组的代表中分离的。16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述代表选自由人、马、美洲驼、大鼠、小鼠和闪烁古生球菌(Arc...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍芳葆，甘曜荣，李苇玲，林福满，黄霭莉，于康，苏成迅，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，南洋理工大学，
类型：发明
国别省市：新加坡,SG