羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用，本发明专利技术羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物能够用于糖尿病的治疗中，并能够有效控制患者的糖尿病水平。

Application of amniotic epithelial cells and amniotic mesenchymal stem cells in preparation of drugs for diabetes mellitus

The present invention provides a kind of amniotic epithelial cells and mesenchymal stem cells mixture in preparation for the application of diabetes drugs, the amniotic epithelial cells and mesenchymal stem cells can be used for the treatment of diabetes in the mixture, and can effectively control the level of diabetes patients.

【技术实现步骤摘要】
羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用
本专利技术涉及干细胞领域，具体而言，涉及羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
技术介绍
糖尿病是一种常见的由内分泌系统代谢障碍引起的慢性终身疾病，长期患病可导致神经系统、心血管系统、泌尿系统等多种系统的慢性损害。随着我国经济的发展以及人民生活水平的提高，糖尿病患病率逐年增加，严重危害人们的健康，给家庭和社会带来沉重的经济负担。最新大样本流行病学调查显示，中国成人糖尿病患病率为11.6％，其中男性患病率为12.1％，女性患病率为11％，城市居民为14.3％，农村居民为10.3％；调查结果还显示糖尿病前期率为50.1％。目前主要是使用口服降糖药及胰岛素替代治疗，不能根治，且存在很多不足。人羊膜来源干细胞包括人羊膜上皮细胞(humanamnioticepithelialcells，hAEC)、人羊膜间充质干细胞(humanamnioticmes-enchymalstromalcells，hAMSC)。人羊膜干细胞可在体内及体外向外胚层来源的神经细胞、神经胶质细胞，内胚层来源的胰腺细胞、肝脏细胞以及中胚层来源的心肌样细胞、肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞方向分化，并且具有无性集落形成能力和抗炎性。作为很多细胞的前体，羊膜干细胞又能抑制细胞免疫。不同的抗血管生成和抗炎症的蛋白都在羊膜干细胞中表达，这也解释了羊膜的抗血管生成和抗炎症的作用。这些性质使得羊膜干细胞已在很多治疗起到辅佐作用，而且大多数效果显著。人羊膜干细胞在具有类似胚胎干细胞性质的同时，因其无致瘤性、低免疫排斥性、含量丰富、容易获取、不引起伦理争议，极有潜力成为临床应用的干细胞来源之一。近年来，随着干细胞技术的发展，羊膜干细胞移植已经成为新的疾病治疗的发展方向。在临床应用上，羊膜干细胞在结膜损伤修复、重建眼表、防治睑球粘连与视网膜移植等眼科临床已开展了大量工作，而且在糖尿病难愈性皮肤溃疡、烧伤等创面修复愈合方面也有积极的疗效。而且，已经有实验证据证明羊膜干细胞能够分化在一定条件下能够分化为胰岛细胞。同时，也有学者报道了人羊膜间充质干细胞治疗糖尿病的病例，并取得了良好的效果。虽然现在在羊膜干细胞的应用研究上已经取得了一定的成果，但实际上，对于羊膜上皮细胞的功能开发和利用还不充分，更没有对羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物进行有效的研究开发和利用。因此，对羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物的开发和利用就成了目前亟待解决的技术问题。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物的应用，本专利技术羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物能够用于糖尿病的治疗中，并能够有效控制患者的糖尿病水平。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。本专利技术中，通过将所述羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合，并将所得到的混合物用于糖尿病的治疗中，从而能够有效控制患者的糖尿病水平，使得患者血糖恢复至正常水平。可选的，本专利技术中，所述应用还进一步包括从胎盘上分别分离得到羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞，然后将分离得到的羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞分别培养后混合，以制备羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物的步骤。可选的，本专利技术中，所述羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物中，羊膜上皮细胞与羊膜间充质干细胞的细胞数目比例为(1～100)：(1～100)，例如可以为，但不限于1:5,1:10,1:15,1:20,1:30，1:25，1:40，1:45,1:50,1:60,1:70,1:80,1:90,1:95，5:1，10:1,15:1，20:1,25:1,30:1，35:1,40:1,50:1,60:1,70:1,75:1,80:1,90:1,95:1等。可选的，本专利技术中，所述羊膜上皮细胞的分离和培养包括如下步骤：(1)将羊膜从胎盘组织上剥离后，以含3％双抗的HBSS缓冲溶液进行清洗；(2)将清洗后的羊膜剪碎，并用胰酶消化处理；(3)将消化处理后得到的消化液过筛后，收集细胞滤液，并离心处理；(4)将离心处理得到的细胞用培养基悬浮后接种，并培养；(5)当培养的细胞汇合度达到80～90％后，加入胰酶消化，然后加入培养基终止消化，并传代培养，即得人羊膜上皮细胞。可选的，本专利技术中，步骤(2)中所述胰酶消化处理是在33～39℃条件下用胰酶消化处理20～40min，并消化处理2～4次；优选的，本专利技术中，步骤(2)中所述胰酶消化处理是在35～37℃条件下用胰酶消化处理30～35min，并消化处理3次。可选的，本专利技术中，步骤(3)中所述过滤是以孔径为200～400目的筛网进行过滤；优选的，本专利技术中，骤(3)中所述过滤是以孔径为300～350目的筛网进行过滤。可选的，本专利技术中，步骤(5)中所述胰酶消化是在33～39℃条件下用胰酶消化处理3～10min；优选的，本专利技术中，步骤(5)中所述胰酶消化是在36～37℃条件下用胰酶消化处理8～10min。可选的，本专利技术中，所述羊膜间充质干细胞的分离和培养包括如下骤：(1)将羊膜从胎盘组织上剥离，并以含3％双抗的HBSS缓冲溶液清洗；(2)将清洗后的羊膜剪碎后，加入胰酶处理；(3)将胰酶处理后的组织清洗后，加入胶原酶I消化处理；(4)将消化处理后的组织过滤，并离心；(5)用培养液将离心后得到的细胞悬浮后接种培养；(6)培养后细胞汇合度达到80～90％后，加入胰酶消化，然后加入培养基终止消化，并传代培养，即得到人羊膜间充质干细胞。可选的，本专利技术中，步骤(3)中所述消化处理为以浓度为0.3～0.6mg/ml的胶原酶I消化处理；优选的，本专利技术中，步骤(3)中所述消化处理为以浓度为0.4～0.5mg/ml的胶原酶I消化处理。可选的，本专利技术中，步骤(3)中所述消化处理为在35～39℃条件下消化处理1～2h；优选的，本专利技术中，步骤(3)中所述消化处理为在37～38℃条件下消化处理1～2h。可选的，本专利技术中，步骤(6)中所述胰酶消化是在35～38℃条件下消化3～6min；优选的，本专利技术中，步骤(6)中所述胰酶消化是在36～37℃条件下消化4～5min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物能够用于糖尿病的治疗中，并能够有效控制患者的糖尿病水平。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为培养48h后，人羊膜上皮细胞在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图2为培养基中细胞汇合度达到80％-90％时，人羊膜上皮细胞在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图3为P1代人羊膜上皮细胞在在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图4为P5代人羊膜上皮细胞在在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图5为培养48h后，人羊膜间充质干细胞在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图6为培养基中细胞汇合度达到80％-90％时，人羊膜间充质干细胞在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图7为P5代人羊膜间充质干细胞在在4×显微镜下观察到的培养基中细胞形态；图8为P1本文档来自技高网...

【技术保护点】
羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用还进一步包括从胎盘上分别分离得到羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞，然后将分离得到的羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞分别培养后混合，以制备羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞混合物的步骤。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述羊膜上皮细胞的分离和培养包括如下步骤：(1)将羊膜从胎盘组织上剥离后，以含3％双抗的HBSS缓冲溶液进行清洗；(2)将清洗后的羊膜剪碎，并用胰酶消化处理；(3)将消化处理后得到的消化液过筛后，收集细胞滤液，并离心处理；(4)将离心处理得到的细胞用培养基悬浮后接种，并培养；(5)当培养的细胞汇合度达到80～90％后，加入胰酶消化，然后加入培养基终止消化，并传代培养，即得人羊膜上皮细胞。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述胰酶消化处理是在33～39℃条件下用胰酶消化处理20～40min，并消化处理2～4次。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(3)中所述过筛是以孔径...

【专利技术属性】
技术研发人员：张璐，梁磊，战阳，王珏，
申请(专利权)人：吉林省中科生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22