一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。该试剂盒包括：吖啶酯标记物、偶联有抗原或抗体的磁微粒、特布他林校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。本发明专利技术试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明专利技术建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

A magnetic particle chemiluminescence detection kit for terbutaline and its preparation method

The invention discloses a magnetic particle chemiluminescence detection kit for terbutaline and a preparation method thereof. The kit includes: acridiniumester markers, coupled with magnetic particles, antigen or antibody terbutaline Linxiao products, chemiluminescence prespark quasi liquid A, chemical liquid and cleaning liquid B excited luminescence. The kit uses magnetic separation chemiluminescence technique as detection means, and combines with acridine ester labeling technology. The direct chemiluminescence method established by the invention has high sensitivity, strong specificity, accurate and fast, short detection time, high accuracy and repeatability of the detection result, and the kit can be applied to various luminous detection instruments.

【技术实现步骤摘要】
一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法
本专利技术属于食品安全检测领域，具体是一种特布他林的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。
技术介绍
特布他林（Terbutaline），中文别名为5-(1-羟基-2-叔丁基氨基乙基)苯-1,3-二酚，分子式为C12H19NO3，其结构为：又称叔丁喘安、特普他林，临床上常用于治疗支气管哮喘，喘息性支气管炎，肺气肿等，其支气管扩张作用比沙丁胺醇弱，同样为选择性β2受体激动剂，对动物具有促进骨骼肌（瘦肉）生长，减少脂肪蓄积，提高胴体瘦肉率，常被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产。特布他林不易破坏，如若动物在屠宰前没有经过一定时间的用药停留期，残留会聚集在动物可食用组织中，由于这类化合物具有口服活性，如果违法超量使用人体会将出现不同程度的中毒反应，其症状与动物中毒症状相似，表现为肌肉震颤、四肢麻痹、心动过速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心眩晕、呼吸困难等症状，重者可引发高血压、心脏病甚至死亡，严重影响人体健康。因此我国禁止使用促进动物生长的特布他林作为饲料添加剂。早在1997年3月，农业部发文严令禁止β-激动剂在动物生产中的应用。2001年，随着广东、广西等地连续发生人食用含β-激动剂的动物性食品中毒事件，农业部启动了“无公害食品行动计划”，将“瘦肉精”监测作为动物产品监控的重点。2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物使用β激动剂类药物作为饲料添加剂（农业部176号、193号公告、1519号条例）。因此，食品中特布他林残留检测，对保证食品安全起着非常重要的作用。到目前为止，用于检测动物源性食品中特布他林残留的方法主要有：微生物法、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）、液相色谱-质谱联用（LC-MS）、放射免疫法、酶促化学发光等。微生物法缺乏特异性且所需时间较长。高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用法中仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时费力又不易普及，检测成本高。放射免疫法除了上述缺陷外还需配备放射源，有一定危险性。CN101393210A（2009年3月）公开了一种特布他林的化学发光酶联免疫检测试剂盒，该试剂盒采用酶标板包被特布他林与卵清蛋白偶合制成的人工抗原，辣根过氧化物酶标记特布他林多克隆抗体，虽达到了省时省力、节约成本的效果，但采用辣根过氧化物酶具有以下缺点：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。综上，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测特布他林的方法具有十分重要的意义。本专利技术采用方法为直接化学发光法，采用吖啶酯作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。本专利技术建立的磁微粒化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果具有更高的准确性与重复性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测特布他林的试剂盒，可以采取特布他林单克隆抗体偶联磁微粒，吖啶酯标记特布他林抗原，也可以采取特布他林抗原偶联磁微粒，吖啶酯标记特布他林单克隆抗体。试剂盒还包括特布他林校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。所述的磁微粒可直接与抗体或抗原偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记抗体或抗原。所述磁微粒的表面修饰基团为羧基、氨基、对甲苯磺酰基或链霉亲和素-生物素。所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。所述的吖啶酯标记的是特布他林抗原，或特布他林单克隆抗体。所述的校准品是用含有0.5-5.0%BSA和0.1-0.5%PC300的Tris-HCl缓冲液为基质，加入特布他林纯品配置而成，校准品形态为液态。所述的特布他林校准品溶液浓度分别为：0μg/L、0.02μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、2.5μg/L、12.5μg/L。所述的化学发光预激发液A为H2O2和HNO3的混合液，其中H2O2的质量分数为0.05-5%，HNO3的浓度为0.05-2.5mol/L。所述的化学发光激发液B为TritonX-100和NaOH的混合液，其中TritonX-100的浓度为0.05-2.0mol/L，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L。所述的清洗液为：pH7.0-9.0、浓度为5.0-50.0mmol/L的Tris-HCl溶液，其中含浓度为0.05-0.50mol/L的NaCl及0.01-0.25%Tween-20。本专利技术的原理是将抗体-抗原反应的高度特异性与吖啶酯发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶酯捕捉反应产生的光子以检测产物浓度。本专利技术的优点在于采用竞争法联合磁微粒化学发光技术，测定食品中的特布他林含量。吖啶酯作为标记物的直接化学发光具有明显优势，主要表现在：反应不需要催化剂，只要碱性环境即可进行，反应迅速，可以完全捕捉反应产生的光子，背景发光低，信噪比高，干扰因素少，试剂稳定性好，体系简单，激发液成本低，吖啶酯易与蛋白质联结，且联结后光子产率不减少。具体实施方式本专利技术提供一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加明确、清楚，以下对本专利技术进一步详细说明。本专利技术提供一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，其中，本专利技术所提供的磁微粒化学发光方法检测特布他林的试剂盒，可以采取特布他林单克隆抗体偶联磁微粒，吖啶酯标记特布他林抗原，也可以采取特布他林抗原偶联磁微粒，吖啶酯标记特布他林单克隆抗体。试剂盒还包括特布他林校准品、上述吖啶酯作用的化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。具体地，本专利技术所述磁珠的内核为四氧化三铁，所述的磁微粒可直接与抗体或抗原偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记抗体或抗原。磁珠使用前固相的不完全沉降会影响精确度，因此选择时应选分散性好，长时间放置磁珠抱团个数少，沉降速度慢的磁珠。具体地，本专利技术在制备磁微粒混悬液时，所述偶联抗原缓冲液为pH5.0、浓度为0.1mol/L的MES缓冲液；偶联抗体缓冲液为pH6.0、浓度为0.1mol/L的MES缓冲液。具体地，本专利技术在制备磁微粒混悬液时，所述封闭缓冲液为含1%BSA的缓冲液。具体地，本专利技术所述校准品是用含有1-3%BSA和0.1-0.3%PC300的Tris-HCl缓冲液为基质，加入特布他林纯品配置而成，校准品形态为液态。具体地，本专利技术所述的化学发光预激发液A为H2O2和HNO3的混合液，其中H2O2的质量分数为1.5%，HNO3的浓度为0.1mol/L。具体地，本专利技术所述化学发光激发液B为Trito本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有特布他林单克隆抗体的磁微粒混悬液、校准品、吖啶酯标记的特布他林抗原、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

【技术特征摘要】
1.一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：包括偶联有特布他林单克隆抗体的磁微粒混悬液、校准品、吖啶酯标记的特布他林抗原、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。2.根据权利要求1所述的一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的磁微粒可直接与特布他林单克隆抗体偶联，或将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记特布他林单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的化学发光标记物为吖啶酯，如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS等。4.根据权利要求1所述的一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的吖啶酯标记的是特布他林抗原。5.根据权利要求1所述的一种特布他林的磁微粒化学发光检测试剂盒及其组成，其特征在于：所述的校准品是以含有0.5-5.0%BSA和0.1-0.5%PC300的Tris-HCl缓冲液为基质，加入特布他林纯品配置而成的系列浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：常燕，胡雪婷，曹晶，刘丽青，杜爱铭，徐兵，
申请(专利权)人：太原瑞盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14